雞新城疫免疫血清學(xué)監(jiān)測(cè)

劉金玲/河北省盧龍縣潘莊動(dòng)物防疫站

雞新城疫（ND）俗稱雞瘟，是由雞新城疫病毒引起的雞的一種高度接觸性、急性、烈性傳染病。最早發(fā)生于印度尼西亞的爪哇和英國(guó)的新城（Newcastle），1927年Doyle首次分離病原，并將該病命名為新城疫。目前，該病已廣泛流行與我國(guó)所有養(yǎng)雞地區(qū)，在家禽病毒病中，它的流行和危害性占首位。雞患新城疫常呈現(xiàn)敗血癥經(jīng)過，主要特征是呼吸困難，下痢，神經(jīng)機(jī)能紊亂，黏膜和漿膜出血。

雞新城疫抗體水平較低或未經(jīng)免疫接種的雞群，發(fā)病率和死亡率可達(dá)80%～100%，免疫雞群的抗體水平中等時(shí)，發(fā)病率和死亡率的變化較大，低者只有2%～7%，稍高者可達(dá)20%～40%。在大中型養(yǎng)雞場(chǎng)，雞群有一定的抵抗力的情況下，雞新城疫主要是以一種非典型的形式出現(xiàn)，應(yīng)引起重視。

本次實(shí)驗(yàn)調(diào)查采用的是獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室常用的方法，血凝實(shí)驗(yàn)(HA)和血凝抑制實(shí)驗(yàn)(HI)，新城疫抗體水平檢測(cè)使用該方法特異性好，操作方便，可同時(shí)進(jìn)行大量的樣品檢測(cè)，對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求不高等特點(diǎn)。

血凝實(shí)驗(yàn)(HA)和血凝抑制實(shí)驗(yàn)(HI)是獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室常用的方法之一，新城疫抗體水平檢測(cè)使用該方法特異性好，操作方便，可同時(shí)進(jìn)行大量的樣品檢測(cè)，對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求不高等特點(diǎn)。但是，血凝實(shí)驗(yàn)（HA）與血凝抑制實(shí)驗(yàn)（HI）實(shí)驗(yàn)也受很多因素的影響，由于影響因素復(fù)雜，不可能完全排除，但是，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)都是每個(gè)樣品進(jìn)行反復(fù)多次實(shí)驗(yàn)得出的數(shù)據(jù)。

一、材料和方法

（一）被檢血清

從4個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的養(yǎng)殖戶場(chǎng)里或農(nóng)戶家里20個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)（戶）共計(jì)140只雞進(jìn)行血液采集，其中合同肉雞20只，規(guī)模場(chǎng)蛋雞20只，圈養(yǎng)土雞20只，林下放養(yǎng)土雞50只，農(nóng)戶散養(yǎng)土雞30只。采集后的血液樣品靜置凝固后自然析出血清，析出血清少的，用離心機(jī)進(jìn)行離心后把血清離心出來。

（二）檢測(cè)材料

標(biāo)準(zhǔn)抗原(HA抗原)、1%雞紅細(xì)胞懸液、生理鹽水、96孔V型板、微量移液器

本次實(shí)驗(yàn)方法是使用已知抗原檢測(cè)未知抗體，通過血凝實(shí)驗(yàn)（HA）和血凝抑制實(shí)驗(yàn)（HI）測(cè)出被檢血清中的抗體滴度。

1.血凝實(shí)驗(yàn)（HA）。先用血凝實(shí)驗(yàn)（HA），測(cè)出標(biāo)準(zhǔn)抗原的血凝價(jià)單位。25μl生理鹽水→標(biāo)準(zhǔn)抗原25為微升→25μl生理鹽水→1% RBC懸液25μl→震蕩后在37℃恒溫箱靜置30 min等待結(jié)果。

結(jié)果顯示抗原血凝價(jià)為1∶256

2.配制4?HAU抗原。通過血凝實(shí)驗(yàn)（HA）測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)抗原為8 log，那么配制4 HAU抗原需要稀釋倍數(shù)為6倍。

3.血凝抑制試驗(yàn)（HI）。接著血凝實(shí)驗(yàn)（HA），繼續(xù)做下一檢測(cè)步驟。生理鹽水25μl(12孔50μl)→第一孔加入25μl，反復(fù)吸取6～8次，取25μl加入第二孔，第二孔反復(fù)吸取6～8次，取25μl加入第三孔，如此依次至10孔，10孔取25μl丟棄?！尤? HAU抗原25μl，從第一孔加至11孔?！鹗? min，靜置培養(yǎng)20 min。→加入1%雞紅細(xì)胞懸液25μl，加至12孔，震蕩20 s，靜置培養(yǎng)等待結(jié)果。

二、結(jié)果

（一）不同雞場(chǎng)新城疫血清陽性率

通過HA和HI實(shí)驗(yàn)對(duì)不同雞場(chǎng)采集的血清進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，在被檢測(cè)的140個(gè)血清樣品中，共檢出陽性數(shù)為129份，陽性率為92.14%，其中合同肉雞陽性率100%，規(guī)模場(chǎng)蛋雞陽性率100%，圈養(yǎng)土雞陽性率100%，林下放養(yǎng)土雞陽性率100%，農(nóng)戶散養(yǎng)土雞陽性率63.3%。

（二）不同日齡雞群的抗體水平

在被檢測(cè)的140個(gè)血清樣品中，共檢出陽性129份?？贵w水平滴度高的達(dá)到12 log2，低的為0，大多數(shù)都在6～10 log2之間。0～2 log2占7.3%，3～5 log2占10%，6 ～ 10 log2占 77.3% ，10 log2以上的占 5.4%。

表1 樣品抗體分布情況統(tǒng)計(jì)表

表2 樣品抗體滴度統(tǒng)計(jì)表

三、討論與分析

分析檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)這些雞場(chǎng)雞新城疫抗體水平不整齊，特別是農(nóng)戶散養(yǎng)土雞，抗體滴度差距大，抗體保護(hù)力高低不等。圈養(yǎng)土雞抗體滴度明顯過高，經(jīng)詢問養(yǎng)戶，得知該雞群采取的免疫是飲水免疫（C30）和頸部皮下（新城疫油乳滅火苗Lasota株）注射同時(shí)做，所以抗體水平處于高位水平也屬正常，但是同群雞只之間存在個(gè)體差異，可能存在野毒感染或者免疫過程存在缺陷。林下放養(yǎng)土雞，存在抗體水平高低不齊的狀態(tài)，近36%的雞只抗體水平屬于偏低，不具有足夠的保護(hù)力。合同肉雞由于其養(yǎng)殖周期比較短，抗體水平基本處于中等水平，但是其保護(hù)力還是存在缺陷。經(jīng)養(yǎng)戶同意，隨機(jī)解剖兩只發(fā)病雞只，其臨床表現(xiàn)為雞冠變薄，萎縮，精神呆滯，食欲較差，輕微咳嗽，拉黃綠色糞便。解剖病變?yōu)楦闻K腫大，腺胃變薄、變軟，乳頭之間有出血，刀刮后出血明顯，氣囊輕微渾濁，表現(xiàn)為氣囊炎癥狀，腹腔有纖維樣分泌物，盲腸扁桃體腫脹出血，氣管粘膜充血，有粘液性分泌物。初步診斷為雞新城疫感染繼發(fā)大腸桿菌病。

參考文獻(xiàn)（略）