孟河醫(yī)派蒼術(shù)特色炮制品與其他炮制品中β-桉葉醇、蒼術(shù)酮和蒼術(shù)素含量差異的研究

曹 琰 劉產(chǎn)明 張 琪 朱月琴 黃 瑋

（常州市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇常州 213003）

蒼術(shù)始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，稱其“主風寒濕痹，死肌痙疸……作煎餌，久服，輕身延年不饑”，其生品、炮制品均在臨床上應用廣泛。傳統(tǒng)認為蒼術(shù)苦溫燥烈，因此陰虛內(nèi)熱、氣虛多汗者忌用。但經(jīng)炮制后可緩和燥烈之性，降低辛烈溫燥的不良反應。孟河醫(yī)學為我國著名地域性醫(yī)學流派之一，在臨床上之所以有獨到而確切的療效，除了脈理精細，用藥精當外，其獨特的中藥炮制技術(shù)也是重要原因[1]。其中蒼術(shù)的炮制方法多樣，所用輔料頗具特色。“泔浸麻油拌炒”“黑芝麻拌蒸”等制法在現(xiàn)有的炮制規(guī)范中未見有收載。本研究以蒼術(shù)及其現(xiàn)代主要炮制品、孟河醫(yī)學特色炮制品為研究對象，采用GC-MS分析蒼術(shù)揮發(fā)油中主要成分β-桉葉醇、蒼術(shù)酮和蒼術(shù)素的含量，為蒼術(shù)及其不同炮制品的質(zhì)量評價、炮制機制的闡釋提供科學依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 PerkinElmer Clarus氣相色譜儀串聯(lián)AXION-iQT質(zhì)譜檢測器（美國PerkinElmer公司）；NIST標準質(zhì)譜圖庫（2011版，美國國家標準技術(shù)研究院）；WILEY標準質(zhì)譜圖庫（美國John Wiley&Sons公司）；電子天平（上海梅特勒托利多儀器有限公司）；KH-500型超聲波清洗儀器（昆山禾創(chuàng)聲波儀器有限公司）。

1.2 藥材與試劑 蒼術(shù)藥材購自蘇州市天靈中藥飲片有限公司（批號：170627），經(jīng)南京中醫(yī)藥大學劉產(chǎn)明教授鑒定為菊科植物北蒼術(shù)Atractylodes chinensis（DC.）Koidz.的干燥根莖。對照品蒼術(shù)酮（批號：H4520005，純度≥90%）、蒼術(shù)素（批號：H4510010，純度≥98%）購自上海安譜實驗科技股份有限公司；β-桉葉醇（批號：BCBR5666V，純度≥90%）購自Sigma公司；正己烷為分析純，購自南京化學試劑有限公司。

2 方法

2.1 蒼術(shù)不同炮制品的制備

2.1.1 麩炒蒼術(shù) 取麩皮撒入熱鍋內(nèi)，用中火加熱，俟冒煙時，加入蒼術(shù)片，拌炒至表面呈深黃色，取出，篩去焦麩皮，放涼。100kg蒼術(shù)片，用麩皮10kg。

2.1.2 米泔水制蒼術(shù) 取蒼術(shù)片，用米泔水浸泡片刻，取出，用文火炒干。100kg蒼術(shù)片，用米泔水20kg。

2.1.3 焦蒼術(shù) 取蒼術(shù)片，用中火炒至外表焦黃色，取出放涼。

2.1.4 泔浸麻油拌炒蒼術(shù) 取蒼術(shù)片，用米泔水浸一夜，取出，焙干。取焙后蒼術(shù)片，加麻油拌透，置熱鍋中，用文火不斷翻炒至焦黃色，取出，曬干。100kg蒼術(shù)片，用麻油20kg。

2.1.5 黑芝麻拌蒸蒼術(shù) 取蒼術(shù)片，加黑芝麻，拌勻，置鍋內(nèi)，隔水加熱，上氣后蒸1h，停止加熱，悶透，取出，曬干。100kg蒼術(shù)片，用黑芝麻20kg。

2.2 色譜條件 Agilent HP-5MS石英毛細管色譜柱（0.25mm×30m，0.25μm）。載氣：氦氣；分流比20∶1，流速1mL/min；進樣口溫度200℃，檢測口溫度250℃，進樣量1μL。程序升溫：初始溫度90℃保持2min，以15℃ /min升至130℃，保持1min；以3℃ /min升至180℃，保持1min；以5℃/min升至280℃，保持2min。

2.3 質(zhì)譜條件 電子轟擊離子源（EI），離子源溫度230℃，電子能量70eV，氣相色譜-質(zhì)譜接口溫度230℃，掃描范圍m/z 40～400。對照品、供試品的總離子流圖見圖1。確定各目標化合物的保留時間和特征離子，再采用選擇離子監(jiān)測模式進行定量，選擇監(jiān)測離子m/z 149（β-桉葉醇），216（蒼術(shù)酮），182（蒼術(shù)素）。

圖1 混合對照品（A）和蒼術(shù)樣品（B）的GC-MS圖譜

2.4 對照品溶液的制備 精密稱取β-桉葉醇、蒼術(shù)酮和蒼術(shù)素對照品9.10、15.30、41.55mg置于50mL容量瓶中，用正己烷溶解并定容至刻度，搖勻，分別得到濃度為0.182、0.306、0.831g/L的 混 合 對照品溶液。

2.5 供試品溶液的制備 將蒼術(shù)及其不同炮制品粉碎過40目篩，精密稱取蒼術(shù)生品及各炮制品粉末0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加入正己烷15mL，稱重，超聲處理（功率400W，頻率40kHz）30min，取出放冷，再稱重，以正己烷補足失重，搖勻，13000r/min離心10min，取上清液，以0.22μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液[2]。

2.6 方法學考察

2.6.1 標準曲線的繪制 精密量取2.4項下混合對照品溶液0.25、0.50、1.00、2.50、5.00mL，分別置于10mL量瓶中，加正己烷至刻度，搖勻，得到系列標準溶液。分別取1μL，按2.2項下色譜條件和2.3項下質(zhì)譜條件進行GC-MS/SIM分析。以對照品溶液質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標，對照品峰面積為縱坐標（Y），進行回歸分析，繪制標準曲線，結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系結(jié)果

2.6.2 精密度試驗 取同一份對照品混合溶液，按2.2項下色譜條件和2.3項下質(zhì)譜條件連續(xù)進樣6次，計算峰面積，結(jié)果β-桉葉醇、蒼術(shù)酮和蒼術(shù)素的精密度RSD（n=6）分別為0.91%、2.2%、2.3%，表明儀器的精密度良好。

2.6.3 穩(wěn)定性試驗 取同一生蒼術(shù)供試品溶液，分別在制備后0、2、4、8、12、24h按2.2項下色譜條件和

2.3 項下質(zhì)譜條件進樣分析，結(jié)果β-桉葉醇、蒼術(shù)酮和蒼術(shù)素峰面積的RSD分別為0.61%、0.49%、1.6%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6.4 重復性試驗 精密稱取生蒼術(shù)粉末6份，按2.5項下方法制備供試品溶液后，按2.2項下色譜條件和2.3項下質(zhì)譜條件測定峰面積，結(jié)果β-桉葉醇、蒼術(shù)酮和蒼術(shù)素含量的RSD分別為1.5%、1.7%、2.9%，表明方法重復性良好。

2.6.5 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的生蒼術(shù)樣品0.25g，共6份，每份加入相同濃度的混合對照品溶液，按2.5項下方法制備溶液后，按2.2項下色譜條件和2.3項下質(zhì)譜條件測定，計算加樣回收率，結(jié)果β-桉葉醇、蒼術(shù)酮和蒼術(shù)素的平均加樣回收率分別為97.1%、98.5%、103.9%，RSD分別為2.7%、1.8%、1.5%。

2.7 樣品含量測定 稱取蒼術(shù)及其不同炮制品粉末約0.5g，按2.5項下方法制備供試品溶液，按2.2項下色譜條件和2.3項下質(zhì)譜條件進行測定，計算β-桉葉醇、蒼術(shù)酮和蒼術(shù)素的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果 mg/g

3 討論

孟河醫(yī)家認為，“蒼術(shù)與白術(shù)，功用相似，補中遜之，燥性過之”，須炮制抑其燥之偏性[3]1308。蒼術(shù)的炮制方法頗多，由于炮制方法不同，其作用亦各有偏重。關(guān)于麩炒法，《本草蒙筌》[4]認為“麥麩皮制抑酷性勿傷上膈”；關(guān)于米泔水制，《本草綱目》[5]載有“蒼術(shù)性燥，故以糯米泔浸，去其油，切片焙干用”；關(guān)于炒焦法，《中藥炮制經(jīng)驗集成》[6]認為“炒焦，能溫脾祛濕，止瀉”；關(guān)于泔浸麻油拌炒蒼術(shù)，《青囊秘傳》中將其與大黃等配伍用于治療痢疾[3]899；關(guān)于黑芝麻拌蒸法，《本草通玄》[7]載有“米泔浸三日，去粗皮研，芝麻拌蒸三次，以制其燥”。

現(xiàn)代研究表明，蒼術(shù)的燥性與其中的揮發(fā)油有關(guān)。揮發(fā)油既是蒼術(shù)的有效成分，又是其產(chǎn)生毒副作用的主要物質(zhì)基礎[8]。β-桉葉醇、蒼術(shù)酮和蒼術(shù)素為蒼術(shù)揮發(fā)油的主要成分。本研究結(jié)果表明，蒼術(shù)炮制后，β-桉葉醇的含量均有不同程度的降低，其降低程度大小依次為泔浸麻油拌炒蒼術(shù)＞米泔水制蒼術(shù)＞焦蒼術(shù)＞麩炒蒼術(shù)＞黑芝麻拌蒸蒼術(shù)；蒼術(shù)酮含量也有不同程度的降低，其降低程度大小依次為泔浸麻油拌炒蒼術(shù)＞米泔水制蒼術(shù)＞麩炒蒼術(shù)＞焦蒼術(shù)＞黑芝麻拌蒸蒼術(shù)；蒼術(shù)素含量降低程度大小依次為焦蒼術(shù)＞米泔水制蒼術(shù)＞麩炒蒼術(shù)＞泔浸麻油拌炒蒼術(shù)＞黑芝麻拌蒸蒼術(shù)。炮制引發(fā)這些成分含量降低可能與脫水、脫氫反應、輔料吸附等原因有關(guān)[9]。

β-桉葉醇具有中樞神經(jīng)抑制作用[10]；蒼術(shù)酮具有明顯的抑制家兔唾液腺分泌以及增加小鼠飲水量的作用[11]；蒼術(shù)素可使胃泌素分泌量上升，增強胃平滑肌收縮[12]。經(jīng)炮制后，揮發(fā)油中的這些主要成分含量降低，可降低過量揮發(fā)油引起的副作用。本研究結(jié)果將為蒼術(shù)不同炮制品的臨床合理應用提供理論支撐，同時也為進一步闡述蒼術(shù)的炮制機制提供實驗依據(jù)。