TRPV6對結(jié)腸癌SW480細(xì)胞生物學(xué)行為及小鼠模型中結(jié)腸腫瘤發(fā)生的影響*

謝臣武 劉模榮 董輝 徐靖宇 謝睿 文國榮 劉蓮花

結(jié)腸癌是一種常見的消化系統(tǒng)疾病，嚴(yán)重威脅著人類健康及生命，近年來結(jié)腸癌的發(fā)病率及死亡率也呈逐年增長的趨勢，且預(yù)后不佳［1-2］。研究發(fā)現(xiàn)Ca2+作為信號傳導(dǎo)介質(zhì)，參與腫瘤細(xì)胞的分裂、生命周期及分化的調(diào)節(jié)［3-5］，還有研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度變化與結(jié)腸癌的發(fā)生具有重要關(guān)系［6］。瞬時受體陽離子通道亞家族V成員6（transient receptor poten?tial cation channel，subfamily V member 6，TRPV6）作為一種瞬時受體電位通道，對Ca2+具有高度的選擇性及調(diào)控性，其功能受1，25（OH）2D3、Ca2+、Cu2+、Cd2+、Zn2+及雌激素等的調(diào)節(jié)，與結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲密切相關(guān)［7-8］。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，1，25（OH）2D3、CuCl2能調(diào)節(jié)TRPV6蛋白及mRNA的表達(dá)，使結(jié)腸癌SW480細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平發(fā)生相應(yīng)的變化，從而影響結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的增殖、遷移及凋亡［9］。為進(jìn)一步研究TRPV6在結(jié)腸癌發(fā)生過程中的相關(guān)機(jī)制及作用，本研究擬通過觀察沉默TRPV6基因后對結(jié)腸癌SW480細(xì)胞生物學(xué)行為的影響和細(xì)胞內(nèi)鈣的濃度變化，以及TRPV6對SD大鼠結(jié)腸腫瘤模型中結(jié)腸腺瘤-腺癌發(fā)生的影響，以期為結(jié)腸癌的預(yù)防及治療尋找新的機(jī)制及治療靶點。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞及動物 人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480購自中國科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所，常規(guī)消化傳代保存。雄性SD大鼠購自第三軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心，動物實驗經(jīng)本院倫理委員會審查批準(zhǔn)［批號：黔科合G字（2014）7014號］。

1.1.2 試劑 二甲基肼（dimethyl hydrazine，DMH）及1，25（OH）2D3購自美國SIGMA公司，TRPV6多克隆抗體購自美國Abcam公司，改良型RPMI 1640培養(yǎng)基和Hyclone胎牛血清購自美國Hyclone公司。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、RTPCR擴(kuò)增試劑盒及引物購自日本TakaRa公司，內(nèi)參抗體購自武漢Boster公司。CuCl2購自上海生工生物科技有限公司，重組腺病毒載體TRPV6-RNAi的構(gòu)建及鑒定由上海吉凱公司完成，TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測試劑盒和MTT試劑盒購自南京凱基生物公司。

1.2 方法

1.2.1 構(gòu)建慢病毒 重組腺病毒載體LV-TRPV6-RNAi的構(gòu)建根據(jù)上海吉凱公司RNAi文庫中TRPV6（NM-018646）cDNA序列構(gòu)建，分別為靶向干擾序列5'-CAACTCCATCTTCAATAAA-3'及非特異性的陰性對照序列5'-TTCTCCGAACGTGTCAC GT-3'。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)與病毒轉(zhuǎn)染 結(jié)腸癌SW480細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)，常規(guī)消化、傳代。將實驗分為空白對照組、陰性對照組和TRPV6-RNAi組。根據(jù)感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection，MOI）為10加入病毒，感染后于24、48、72 h分別在熒光顯微鏡下觀察結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的轉(zhuǎn)染情況。在轉(zhuǎn)染72 h后加入含5μg/mL嘌呤霉素的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。

1.2.3 觀察轉(zhuǎn)染TRPV6-RNAi的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量的變化 將培養(yǎng)好的各組實驗細(xì)胞接種于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中，培養(yǎng)72 h采用PBS漂洗后顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染TRPV6-RNAi的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的形態(tài)變化和數(shù)量變化。

1.2.4 免疫組織化學(xué)法觀察蛋白表達(dá)情況 取各組對數(shù)生長期的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞，4%多聚甲醛溶液固定、室溫封閉、抗體孵育、DAB顯色、復(fù)染、1%鹽酸酒精分化、水洗返藍(lán)、顯微鏡下觀察、拍照。

1.2.5 實時熒光定量PCR 取各組對數(shù)生長期的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞，PBS漂洗后采用Trizol提取法抽提細(xì)胞總RNA，測OD值。根據(jù)OD值為1.8～2.0將mRNA的濃度統(tǒng)一定為0.2μg/μL進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄及擴(kuò)增。擴(kuò)增條件：94℃、30 s；94℃、30 s；60℃、30 s，40個循環(huán)，結(jié)果分析采用相對定量法（2-ΔΔCT法）。

1.2.6 Western blot檢測 取各組對數(shù)生長期的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞，采用RIPA法提取蛋白，BCA法蛋白定量后用于蛋白印跡實驗。根據(jù)TRPV6的蛋白分子量選擇配制SDS-PAGE凝膠，取各組樣品10μL加入等體積的上樣緩沖液，電泳后切取目的蛋白及內(nèi)參膠帶電轉(zhuǎn)、封閉。封閉后加入一抗4℃孵育過夜；次日洗膜后再次加入二抗孵育，并于V3系統(tǒng)中曝光顯影；用Image-plus 6.0圖像分析軟件測量灰度值。相對表達(dá)量（目的蛋白）=目的蛋白（平均灰度值）/內(nèi)參（平均灰度值）。

1.2.7 MTT法 取各組對數(shù)生長期的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞，采用不含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行同步化處理24 h后胰酶消化，計數(shù)后接種于96板孔中繼續(xù)培養(yǎng)24 h，每孔吸出培養(yǎng)基0.1 mL后加入等體積的MTT，經(jīng)孵育后酶聯(lián)免疫檢測儀測定OD值進(jìn)行結(jié)果分析。細(xì)胞生長抑制率（%）=（對照組OD值-實驗組OD值）/對照組OD值×100%；細(xì)胞生長增殖率（%）=（實驗組OD值-對照組OD值）/對照組OD值×100%。

1.2.8 細(xì)胞遷移實驗 實驗前于12孔板背面進(jìn)行標(biāo)記；常規(guī)種板后培養(yǎng)24h，待細(xì)胞長至約80%劃痕；劃痕后0、24、48 h，倒置顯微鏡下觀察劃痕寬度并照像。采用Image-plus 6.0軟件測量計算遷移距離，遷移能力采用遷移指數(shù)表示。遷移指數(shù)=d1/d2×100%（d1為起始劃痕寬度-遷移后劃痕寬度，d2為起始劃痕寬度）。

1.2.9 TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡 將各組結(jié)腸癌SW480細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)消化、計數(shù)、爬片，培養(yǎng)24 h后4%多聚甲醛固定，0.1%Triton X-100通透，按照TU?NEL說明書步驟操作并用熒光顯微鏡拍照、觀察，染成紅色的細(xì)胞為凋亡細(xì)胞（陽性細(xì)胞），藍(lán)色細(xì)胞為活細(xì)胞。高倍鏡下任意選3個視野，計算每個視野細(xì)胞總數(shù)及陽性細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞凋亡指數(shù)（apoptosis in?dex，AI）=陽性細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。

1.2.10 結(jié)腸癌SW480細(xì)胞內(nèi)Ca2+的測定 將各組制作完成的結(jié)腸癌SW480細(xì)胞爬片使用準(zhǔn)備好的工作液漂洗，避光加鈣發(fā)光劑Fura-2（Fura-2：PSS為1：1 000），避光孵育及漂洗后于熒光顯微鏡下觀察，用CCD拍攝熒光及轉(zhuǎn)換分析。

1.2.11 大鼠結(jié)腸腫瘤模型的構(gòu)建 雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)，以DMH腹腔注射16周，分為實驗組（DMH組）、干預(yù)組［DMH+1，25（OH）2D3組、DMH+CuCl2組］和對照組。干預(yù)組在建立大鼠結(jié)腸腫瘤模型的同時分別予以1，25（OH）2D3（37.5 nmol/kg）、CuCl2（375μmol/kg）灌胃，隔日1次；DMH組予等量DMH腹腔注射及等量生理鹽水灌胃；對照組等量生理鹽水腹腔注射及灌胃。

1.2.12 大鼠結(jié)腸腫瘤取材 至實驗18周開始，每2周取材1次，于22周處死全部大鼠將結(jié)腸組織充分展開、暴露，觀察結(jié)腸黏膜，如黏膜異常（糜爛、增厚、腫塊等）則取異常處數(shù)塊，如黏膜無異常則腸腔遠(yuǎn)端、中段及近端各取數(shù)塊（全程冰上操作）；分別置于-80℃冰箱保存和福爾馬林固定保存。成瘤率=（長腫瘤大鼠數(shù)/存活大鼠數(shù)）×100%

1.2.13 蛋白質(zhì)印跡實驗 總蛋白的提?。簩⑺〈笫蠼Y(jié)腸組織從-80℃冰箱取出放入1.5 mL的EP管中，加入200μL RIPA與2μL PMSF。用勻漿機(jī)充分搗碎組織，12 000 r/min，離心30 min，4℃，蛋白定量、配膠、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉一抗、洗膜、孵育二抗、顯色曝光及結(jié)果分析同“1.2.6”中細(xì)胞蛋白印跡實驗部分。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，以表示。數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗，數(shù)據(jù)定量資料應(yīng)用單因素方差分析（one-way ANOVA），定性資料應(yīng)用Kruskal-Wallis秩和檢驗，率的比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TRPV6-RNAi轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞后形態(tài)的變化

在倒置顯微鏡下觀察TRPV6-RNAi轉(zhuǎn)染72 h后結(jié)腸癌SW480細(xì)胞形態(tài)變化，空白對照組和陰性對照組結(jié)腸癌SW480細(xì)胞融合成單層，細(xì)胞為梭形、多邊形或三角形，同時可見較多的處于分裂像的細(xì)胞，細(xì)胞密度大。TRPV6-RNAi組細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)細(xì)胞皺縮、間隙增大、變圓等凋亡的表現(xiàn)，細(xì)胞密度比空白組和陰性對照組明顯減低，且培養(yǎng)基中的懸浮死亡細(xì)胞較多。

2.2 TRPV6免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果

空白對照組及陰性對照組結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)及胞膜為黃色、棕黃色或褐色，呈高表達(dá)；TRPV6-RNAi組為淡黃色，呈低表達(dá)。

2.3 TRPV6-RNAi轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞后TRPV6 mRNA的表達(dá)變化

采用RT-PCR法檢測結(jié)果顯示，空白對照組和陰性對照組TRPV6 mRNA表達(dá)量明顯高于TRPV6-RNAi組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；而對照組之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，圖1）。

2.4 TRPV6-RNAi轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞后TRPV6蛋白的表達(dá)變化

Western blot實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，空白對照組和陰性對照組的TRPV6蛋白表達(dá)高于TRPV6-RNAi組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，圖2）。

2.5 TRPV6-RNAi轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞后對細(xì)胞增殖的影響

MTT結(jié)果提示，TRPV6-RNAi組對結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖有抑制作用，與對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，表1）。

2.6 TRPV6-RNAi轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞后對其遷移能力的影響

遷移實驗果顯示，TRPV6-RNAi組結(jié)腸癌SW480細(xì)胞在劃痕后24、48 h的遷移距離小于對照組，與對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明TRPV6-RNAi轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞后可抑制其遷移能力（圖3）。

2.7 TRPV6-RNAi轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞后對其凋亡的影響

采用TUNEL法檢測凋亡細(xì)胞，在熒光顯微鏡下觀察，凋亡細(xì)胞被染成紅色，藍(lán)色細(xì)胞則為活細(xì)胞；對照組可見少量凋亡細(xì)胞；TRPV6-RNAi組可見大量凋亡細(xì)胞，組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，圖4）。

2.8 TRPV6-RNAi轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞后對細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的影響

圖3 TRPV6-RNAi轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞對其遷移能力的影響

高速離子成像系統(tǒng)檢測顯示，F(xiàn)ura-2標(biāo)記后，結(jié)腸癌SW480細(xì)胞內(nèi)Ca2+顯示為綠色熒光；采用F（340）/F（380）表示細(xì)胞內(nèi)鈣離子相對濃度；其變化用△FIRatio表示，可反映細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的變化，且呈正相關(guān)；TRPV6-RNAi組△FIRatio較對照組小，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；對照組之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，圖5）。

圖2 TRPV6-RNAi轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞后TRPV6蛋白表達(dá)

表1 TRPV6-RNAi轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞對其生長增殖的影響

圖4 TRPV6-RNAi轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞對其凋亡的影響

圖5 TRPV6-RNAi轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞對細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度影響（±s）

2.9 1，25（OH）2D3、CuCl2對SD大鼠結(jié)腸腫瘤模型建立的影響

2.9.1 大鼠生長一般情況 實驗組及干預(yù)組大鼠前6周，除對照組外各實驗組均有死亡，結(jié)腸黏膜均未發(fā)現(xiàn)病變，死亡的大鼠不計入為有效的實驗動物；第6周后大鼠無死亡。在12周以后DMH+1，25（OH）2D3組、DMH+CuCl2組和DMH組4組大鼠隨著時間的推移而逐漸出現(xiàn)食欲減退、體質(zhì)量增長緩慢、反應(yīng)變遲鈍，且毛發(fā)光澤較差，部分出現(xiàn)毛發(fā)稀疏，少量大鼠出現(xiàn)腹瀉，均未出現(xiàn)便血。對照組10只大鼠精神狀態(tài)好，食欲可，反應(yīng)迅速，體質(zhì)量增長良好，毛發(fā)色澤光亮，無死亡。

2.9.2 各組大鼠結(jié)腸腫瘤的發(fā)生情況 分別于18、20、22周處死老鼠，對照組大鼠結(jié)腸黏膜光滑，均未見腫瘤結(jié)節(jié)形成；DMH組存活的13只大鼠中11只大鼠結(jié)腸形成腫瘤結(jié)節(jié)，共45個；DMH+1，25（OH）2D3組存活的7只大鼠全部有腫瘤結(jié)節(jié)形成，共形成腫瘤結(jié)節(jié)36個，其中1只大鼠有少量淡黃色腹水，伴腹腔內(nèi)見彌漫性結(jié)節(jié)形成，經(jīng)病理檢查證實為腺癌；DMH+CuCl2組存活的9只大鼠中3只大鼠形成腫瘤結(jié)節(jié)，共形成腫瘤結(jié)節(jié)6個。主要表現(xiàn)為息肉隆起型，大多為無蒂，腫瘤表面未見潰瘍及出血；未形成腫瘤的12只存活大鼠結(jié)腸主要表現(xiàn)為黏膜粗糙、增厚，以慢性炎癥為主，部分伴有異型性增生（圖6）。

圖6 各組SD大鼠結(jié)腸腫瘤生長情況

所取組織標(biāo)本使用福爾馬林固定，H&E染色后觀察各組成瘤情況顯示，對照組均未見腫瘤形成；DMH組、DMH+1，25（OH）2D3組可見較多腫瘤形成，與DMH+CuCl2組及對照組比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而DMH組與DMH+1，25（OH）2D3組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；各組平均腺癌數(shù)比較，DMH+1，25（OH）2D3組、DMH組與DMH+CuCl2組及對照組比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而DMH+CuCl2組與及對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，表2）。

2.9.3 Western blot檢測各組大鼠結(jié)腸組織中TRPV6蛋白的表達(dá) Western blot檢測結(jié)果顯示，DMH+1，25（OH）2D3組＞DMH組＞DMH+CuCl2組＞對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，圖7）。

表2 各組大鼠結(jié)腸腫瘤成瘤率的比較

圖7 各組SD大鼠結(jié)腸組織中TRPV6蛋白的表達(dá)情況

3 討論

近年來中國結(jié)腸癌的發(fā)病率及死亡率呈逐年上升趨勢，多數(shù)結(jié)腸癌患者發(fā)現(xiàn)時已屬于中晚期，且大多合并遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。目前雖然有手術(shù)、放化療、免疫治療、分子生物靶向治療及營養(yǎng)支持等治療手段，但其病死率仍較高，遠(yuǎn)期預(yù)后差。為進(jìn)一步提高結(jié)腸癌患者的生存率，個體化的基因靶向治療將成為結(jié)腸癌重要的治療手段。

TRPV6是位于細(xì)胞膜上的一種重要的Ca2+選擇通道，其表達(dá)水平的增加可能有助于惡性腫瘤的生長，在腸道腫瘤、前列腺癌、乳腺癌等多種癌癥中的表達(dá)明顯高于相應(yīng)的正常組織［10］。研究發(fā)現(xiàn)，TRPV6在人結(jié)腸腺瘤、腺癌的表達(dá)高于正常黏膜組織及非腫瘤性息肉；TRPV6激動劑1，25（OH）2D3和抑制劑CuCl2能調(diào)節(jié)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的TRPV6蛋白及mRNA表達(dá)，通過升高或降低結(jié)腸癌SW480細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，從而調(diào)節(jié)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的增殖、遷移和凋亡［9，11］。本研究進(jìn)一步采用構(gòu)建靶向TRPV6 的RNAi表達(dá)載體轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW480細(xì)胞，通過RTPCR及Western blot檢測發(fā)現(xiàn)，TRPV6-RNAi能下調(diào)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的TRPV6 mRNA及蛋白表達(dá)，降低結(jié)腸癌SW480細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，抑制結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的增殖、遷移，促進(jìn)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的凋亡，與對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。此外，在DMH構(gòu)建SD大鼠結(jié)腸腫瘤模型中，本研究發(fā)現(xiàn)1，25（OH）2D3能上調(diào)結(jié)腸組織中的TRPV6表達(dá)，促進(jìn)SD大鼠結(jié)腸腺瘤及腺癌的發(fā)生及生長；而CuCl2則下調(diào)結(jié)腸組織中的TRPV6表達(dá)，抑制SD大鼠結(jié)腸腺瘤及腺癌的發(fā)生及生長，與對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

研究顯示［2-3］，細(xì)胞內(nèi)Ca2+平衡紊亂與惡性腫瘤密切相關(guān)，尤其表現(xiàn)在細(xì)胞的增殖、遷移及凋亡方面。細(xì)胞內(nèi)鈣調(diào)節(jié)涉及機(jī)制較復(fù)雜，目前發(fā)現(xiàn)與細(xì)胞膜鈣 泵（plasma membrane calcium ATPase 1b，PM?CA1b）、鈉/鈣交換器（NCX1）、維生素D受體（vitamin D receptor，VDR）、斯鈣素-1（Stanniocalcin-1，STC-1）以及TRPV5/6等有關(guān)。TRPV6是TRP超家族中目前唯一已知的Ca2+高選擇性通道，主要負(fù)責(zé)Ca2+由細(xì)胞外向細(xì)胞內(nèi)的主動跨膜運(yùn)輸，位于結(jié)腸吸收表面的頂膜中，是一種可以調(diào)節(jié)腸鈣吸收速度和程度的蛋白質(zhì)，其功能受1，25（OH）2D3通過VDR信號通路的調(diào)節(jié)。有研究發(fā)現(xiàn)［12］，在腸上皮細(xì)胞的鈣內(nèi)流過程中，STC-1能抑制TRPV5/6蛋白表達(dá)，減少TRPV5/6通道蛋白調(diào)節(jié)的鈣內(nèi)流。在結(jié)腸癌發(fā)展階段，TRPV6在Ⅰ期結(jié)腸癌中的表達(dá)為66%，在Ⅱ期結(jié)腸癌中的表達(dá)為17%，在Ⅲ、Ⅳ期結(jié)腸癌中卻幾乎無表達(dá)，TRPV6表達(dá)增高主要發(fā)生在結(jié)腸癌早期，而這種伴隨結(jié)腸黏膜增生的TRPV6異常高表達(dá)可通過高鈣飲食來減弱甚至逆轉(zhuǎn)［9］。TRPV6的抑制劑SOR-C13被臨床用來治療胰腺癌并取得一定療效［13］。上述研究表明TRPV6表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡密切相關(guān)，但具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究通過RNAi技術(shù)及DMH構(gòu)建SD大鼠結(jié)腸腫瘤模型，觀察發(fā)現(xiàn)通過上調(diào)或下調(diào)TRPV6 mRNA及其蛋白表達(dá)，可以通過增加或降低結(jié)腸癌SW480細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，調(diào)節(jié)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的增殖、遷移和凋亡，進(jìn)而影響結(jié)腸癌發(fā)生及生長。TRPV6是結(jié)腸癌發(fā)生及發(fā)展過程中一個重要的影響因素，希望通過對TRPV6的進(jìn)一步研究，可以為結(jié)腸癌的臨床診治提供一個新的標(biāo)志物。

致謝：感謝上海吉凱公司對本研究的支持。