自身免疫性溶血性貧血患者用稀釋法進(jìn)行抗體分類的應(yīng)用

楊 宇，吳德靜，陳月寬，張紹基，劉福慧，黃美容，熊 杰

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院輸血科，貴州遵義 563003；2.遵義市第一人民醫(yī)院中心實驗室，貴州遵義 563002；3.遵義醫(yī)學(xué)院檢驗醫(yī)學(xué)院，貴州遵義 563003)

自身免疫性溶血性貧血(AIHA)患者體內(nèi)常常存在一些抗體，這些抗體常導(dǎo)致抗體篩選陽性及交叉配血困難[1-2]，從而延誤臨床的救治時機(jī)。采用稀釋法可以快速將患者體內(nèi)抗體的分類，從而縮短后續(xù)抗體鑒定及為選擇合適的血液輸注節(jié)約寶貴的時間[3-5]。本研究采用稀釋法對AIHA患者的抗體進(jìn)行分類，旨在提高臨床輸血的安全性，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年1月至2017年12月遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院(以下稱“本院”)AIHA患者36例為研究對象，其中男10例，女26例。年齡37～64歲，中位年齡52歲。36例AIHA患者中，2例血紅蛋白低于30 g/L，28例血紅蛋白為30～49 g/L，6例血紅蛋白為50～59 g/L，貧血貌均較重?；颊呔L期生活在本地區(qū)。納入與排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床實驗室指標(biāo)提示有溶血性貧血的證據(jù)；(2)排除理化因素及藥物導(dǎo)致的溶血、年齡在37歲以上、患有基礎(chǔ)疾病(系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)等。

1.2儀器與試劑 不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號細(xì)胞(上海血液生物醫(yī)藥有限公司)；10項譜細(xì)胞(上海血液中心)、一次性放免試管、氯喹、試管、生理鹽水、血庫專用離心、移液器等。

1.3方法 對36例AIHA患者進(jìn)行輸血前3項檢查(血型鑒定、不規(guī)則抗體篩選及交叉配血)。其中不規(guī)則抗體篩選尤為重要，對于抗篩鑒定結(jié)果判斷有困難者，必要的時候?qū)⒉捎谩岸娇购Y法”[1]：第1步，采用商品試劑Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞進(jìn)行抗體篩選；第2步，采用10項譜細(xì)胞與不同配比濃度的血漿(清)進(jìn)行抗體篩選，來確定抗體的特異性，從而選擇相合的血液輸注。試驗均采用試管法：(1)取3支小試管，分別加入經(jīng)離心后的被檢者血漿(清)100 L；(2)分別加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞各50 L；(3)混勻，以3 400 r/min離心15 s，肉眼觀察凝集情況；(4)凝集為陽性，無凝集為陰性。稀釋法：(1)將離心后的被檢者血漿(清)進(jìn)行倍比稀釋，稀釋配比濃度為1∶1，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128；(2)稀釋后的每一配比濃度分別與10項譜細(xì)胞進(jìn)行同試管法同樣(1)～(4)的操作，以上操作均按試劑說明書及標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。

2 結(jié) 果

2.1“第1步”抗體篩檢結(jié)果 在36例AIHA中，1例不規(guī)則抗體篩檢Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號細(xì)胞，檢測結(jié)果全部陰性，未檢出同種抗體及自身抗體；3例不規(guī)則抗體篩檢Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號細(xì)胞部分陽性、部分陰性，表示檢出同種抗體，再進(jìn)行譜細(xì)胞鑒定其特異性；32例不規(guī)則抗體篩檢Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號細(xì)胞全部陽性。表明可能有自身抗體或(和)同種抗體。

2.2“第2步”抗體篩檢結(jié)果 對第1步中32例AIHA患者不規(guī)則抗體篩檢初篩全部陽性的標(biāo)本，采用稀釋法對患者血漿(清)進(jìn)行倍比稀釋，然后對相應(yīng)稀釋倍數(shù)后的血漿(清)進(jìn)行譜細(xì)胞鑒定。

將不同稀釋倍數(shù)的血漿(清)標(biāo)本分別與譜細(xì)胞反應(yīng)，如果到某一稀釋倍數(shù)濃度時出現(xiàn)格局顯示全部陽性結(jié)果，然而下一稀釋倍數(shù)濃度時出現(xiàn)反應(yīng)結(jié)果全部陰性，這時表明出現(xiàn)全陰性結(jié)果的稀釋倍數(shù)自身抗體的效價為0，但也不排除同種抗體此稀釋倍數(shù)時效價同樣為0或上一稀釋倍數(shù)效價為0，即當(dāng)同種抗體效價等于或低于自身抗體效價時，與譜細(xì)胞的反應(yīng)格局會出現(xiàn)抗體遮蓋現(xiàn)象，會出現(xiàn)反應(yīng)格局，見表1。此時需要繼續(xù)用自身紅細(xì)胞作自身抗體的吸收放散(氯喹放散)，通過反復(fù)吸收放散，直到吸收后的自身紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(DAT)陰性為止，將吸收后的血漿(清)再進(jìn)行譜細(xì)胞鑒定。若存在同種抗體則會出現(xiàn)表2的反應(yīng)格局。若不存在同種抗體則譜細(xì)胞反應(yīng)格局顯示全部陰性。

表1 對AIHA患者血漿(清)倍比稀釋后的譜細(xì)胞結(jié)果

注：s表示反應(yīng)加強；w表示反應(yīng)變?nèi)?/p>

表2 對AIHA患者血漿(清)用自身紅細(xì)胞吸收后的譜細(xì)胞結(jié)果

續(xù)表2 對AIHA患者血漿(清)用自身紅細(xì)胞吸收后的譜細(xì)胞結(jié)果

注：s表示反應(yīng)加強；w表示反應(yīng)變?nèi)?/p>

當(dāng)稀釋后不同稀釋倍數(shù)的標(biāo)本血漿(清)與譜細(xì)胞反應(yīng)，若出現(xiàn)反應(yīng)格局到某一稀釋倍數(shù)時譜細(xì)胞格局出現(xiàn)全部陽性結(jié)果，然而下一稀釋倍數(shù)濃度時的反應(yīng)格局出現(xiàn)部分陽性部分陰性，這時表明自身抗體的效價低于同種抗體效價。譜細(xì)胞鑒定類似反應(yīng)格局結(jié)果見表3。

表3 血漿(清)倍比稀釋后的譜細(xì)胞結(jié)果

注：s表示反應(yīng)加強；w表示反應(yīng)變?nèi)?/p>

3 討 論

AIHA多發(fā)于淋巴系統(tǒng)惡性疾病、結(jié)締組織性疾病、細(xì)菌病毒感染和應(yīng)用某些藥物后，紅細(xì)胞受到藥物、感染等外界因素影響后可產(chǎn)生自身抗體[6-7]。AIHA患者常常因嚴(yán)重貧血貌來院就診，在臨床治療中，常常需要反復(fù)輸血治療，然而部分患者本身也存在自身抗體，也因多次輸血治療可能會產(chǎn)生同種抗體，因此為交叉配血帶來困擾。

本文采用稀釋法及“二步抗篩法”，旨在能夠進(jìn)行抗體種類分類。選擇合適供者的血液輸注，對AIHA患者“精準(zhǔn)輸血”提供“精準(zhǔn)信息”具有重要的意義。通常，AIHA患者在進(jìn)行輸血前3項檢查時，其中不規(guī)則抗體篩檢初篩常有困擾，及Rh血型同型血配血即可；若初篩結(jié)果部分陽性、部分陰性，判斷無自身抗體但有同種抗體，此時初篩后還需要鑒別其同種抗體的特異性，隨后交叉配血選擇ABO、Rh同型血配血且不帶同種特異性抗體對應(yīng)抗原的供者紅細(xì)胞與之配血即可[8]。對于需要自身紅細(xì)胞反復(fù)放散吸收后的患者血漿(清)，該方法對于同種抗體較易區(qū)分，但對于同種自身血型抗體不能進(jìn)行區(qū)分，該試驗會出現(xiàn)假陰性的譜細(xì)胞結(jié)果。文獻(xiàn)[9-11]報道，選擇避開與特異性抗體對應(yīng)抗原的紅細(xì)胞制品輸注，輸注的紅細(xì)胞制品在AIHA患者體內(nèi)存活能達(dá)到臨床輸血要求的標(biāo)準(zhǔn)，而大大高于無經(jīng)選擇性交叉配血其凝集強度低于自身對照管凝集強度的紅細(xì)胞制品，無經(jīng)選擇性的最小凝集強度供者紅細(xì)胞輸注后須有一定效果但是達(dá)不到輸血要求的標(biāo)準(zhǔn)。在治療期間每例患者平均輸注4～6 U紅細(xì)胞制品，輸注期間均無不良反應(yīng)，輸注順利；次日進(jìn)行輸血后療效評價，33例患者血紅蛋白均有所提高輸血有效，而3例未達(dá)到預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)輸血無效。為了有效輸血，輸血科人員應(yīng)在交叉配血時盡可能選擇能避開特異性抗體對應(yīng)抗原的紅細(xì)胞制品輸注后，才能夠有效地避免遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生而有效輸血。因此對AIHA患者輸血前進(jìn)行相關(guān)抗體分類鑒定非常必要，能夠為臨床患者的治療贏得寶貴的時間，確保輸血安全。