甲氨蝶呤微乳對小鼠銀屑病模型的影響

呂鳳艷 王曉剛

摘要 目的：探討甲氨蝶呤微乳對小鼠銀屑病模型的影響。方法：對于雌激素期的小鼠陰道分別給藥，分別為0.1%甲氨蝶呤微乳、0.2%甲氨蝶呤微乳和0.1維A酸軟膏，1次/d，給藥持續(xù)10d，10d后檢測小鼠陰道上皮基底細(xì)胞有絲分裂指數(shù);對于小鼠尾部分別給藥：分別為0.1%甲氨蝶呤微乳、0.2%甲氨蝶呤微乳和0.1%維A酸軟膏，1次/d，給藥持續(xù) lOd，lOd后考察小鼠尾部顆粒層形成情況及皮膚厚度。結(jié)果：甲氨蝶呤微乳對小鼠雌激素期陰道上皮有絲分裂具有明顯的抑制作用，更加有效地促進(jìn)了小鼠尾部顆粒層形成情況及皮膚厚度。結(jié)論：甲氨蝶呤與維A酸軟膏比較，更能有效地促進(jìn)銀屑病樣小鼠模型恢復(fù)。

關(guān)鍵詞 甲氨蝶呤微乳;銀屑病;模型

甲氨蝶呤（MTX）可以抑制二氫葉酸還原酶，同時干擾葉酸代謝，進(jìn)一步發(fā)揮其抗腫瘤作用，在白血病、絨毛膜上皮癌、肝癌等惡性腫瘤中有廣泛應(yīng)用[1]。在銀屑病的治療中，甲氨蝶呤也發(fā)揮著重要作用，特別是用于嚴(yán)重銀屑病的治療[2]。甲氨蝶呤治療銀屑病的作用機(jī)制還不完全明確，銀屑病動物模型在我國也沒有成熟的建模方案[3]。小鼠陰道上皮在雌激素期的生長特點與銀屑病相似，同時，小鼠尾鱗表面也具有相似的生長特點，所以得到廣泛應(yīng)用。本次研究利用以上兩種不同的時期、部位的上皮為模型，進(jìn)一步探討甲氨蝶呤微乳的應(yīng)用價值。

資料與方法

藥品與試劑：0.1%甲氨蝶呤微乳和0.2%甲氨蝶呤微乳，山東醫(yī)專附屬醫(yī)院藥劑科自制;維A酸軟膏，重慶華邦制藥股份有限公司，批號：12214;己烯雌酚原料藥，北京市京潤生化制造有限公司，批號：20100615;秋水仙堿原料藥，連云港錦港技術(shù)有限公司，批號：20130308。

試驗動物：昆明小鼠，18～26g，由山東醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校試驗動物中心提供。

試驗方法：①小鼠陰道上皮模型創(chuàng)建：雌性小鼠40只，給予己烯雌酚0.2mg/只，11次/d，共3d（d0～d2）。隨機(jī)分組為4組，每組10只，分別為空白對照（生理鹽水）組、陽性對照（維A酸軟膏）組、甲氨蝶呤微乳高劑量組、甲氨蝶呤微乳低劑量組。d3～d9各組經(jīng)陰道給藥分別為：空白對照組為等體積生理鹽水;陽性對照組為維A酸軟膏（0.2 g/只）;高劑量組為0.2%甲氨蝶呤微乳（0.5mg/kg）;低劉量組為0.1%甲氨蝶呤微乳（0.5mg/kg），均為1次/d。最后1次給藥后于當(dāng)天上午9：00給每只小鼠腹腔注別秋水刊堿2mg/kg，6h后斷頸處死小鼠，取陰道上皮組織。固定、包埋、染色。用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞有絲分裂，計數(shù)300個陰道基底細(xì)胞的有絲分裂數(shù)。②鼠尾鱗片模型：昆明小鼠40只，隨機(jī)分成4組，即空白對照組、維A酸軟膏對照組、甲氨蝶呤高劑量組和甲氨蝶呤低劑量組。空白對照組給予生理鹽水;陽性對照組給予維A酸軟膏;高劑量和低劑量組甲氨蝶呤微乳，各試驗組每天涂抹尾部1次，共1周，給藥2h后，頸椎脫斷處死小鼠，尾背部皮膚一長條（0.1cm×0.5cm），固定、包埋、染色。在光學(xué)顯微鏡下逐一觀察每鼠的尾部鱗片。凡是一個鱗片有連接成行的顆粒層細(xì)胞者，即為有顆粒層的鱗片。

統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS17.5進(jìn)行方差分析，（x±s）表示計量資料，使用最小顯著性差異檢驗進(jìn)行組間比較。結(jié)果

上皮細(xì)胞有絲分裂指數(shù)：甲氨蝶呤微乳高、低劑量組與維A酸組明顯抑制小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂（有絲分裂指數(shù)，P<0.05、P<0.01），見表1。

甲氨蝶呤微乳對小鼠尾鱗片顆粒層形成的影響：與空白對照組相比，MTX微乳低劑量與維A酸軟膏對小鼠尾部鱗片顆粒層形成有促進(jìn)作用（顆粒層的鱗片數(shù)，P<0.05）;甲氨蝶呤微乳高劑量組對小鼠尾部鱗片顆粒層形成有促進(jìn)作用（顆粒層的鱗片數(shù)，P<0.01），見表2。

討論

甲氨蝶呤可以抑制表皮細(xì)胞的增值，增強(qiáng)免疫細(xì)胞的作用，進(jìn)一步起到治療銀屑病的作用，同時，甲氨蝶呤還會抑制表皮增殖。近年研究表明，微乳作為透皮藥物載體，能夠使被包容的藥物分散度提高，并且微乳的結(jié)構(gòu)能夠改變微乳的親和力，有利于藥物進(jìn)入并突破角質(zhì)層的屏障作用，同時微乳中的成分具有滲透促進(jìn)劑的作用，可以增大藥物透皮速率和透皮量，維持恒定的有效血藥濃度[4]。本試驗研究表明，MTX微乳在0.5mg/kg劑量下和維A酸乳膏0.2g/只劑量下均可以顯著抑制小鼠雌激素期陰道上皮的有絲分裂。與維A酸乳膏相比，甲氨蝶呤微乳高低劑量組抑制作用更強(qiáng);與甲氨蝶呤微乳低劑量組相比，高劑量組抑制作用更明顯，說明抑制程度與藥物劑量有密切的關(guān)系。本試驗把主藥甲氨蝶呤做成微乳劑，相比于傳統(tǒng)用藥維A酸乳膏，效果更明顯，且其能降低用藥量，再根據(jù)微乳劑的特點，微乳劑可起到緩釋作用，所以MTX微乳的應(yīng)用可能要縮短用藥周期，有望成為治療銀屑病的一種新藥。

參考文獻(xiàn)

[1]張永芳，馬莉.甲氨蝶呤臨床新用途[J].中華實用醫(yī)學(xué)，2004，6（7）：114.

[2]Li CX，Zhang XB，Wu ZH.Methotrexate andPsoriasis[J].Southern China Journal ofDermato-Venerology，2004，11（2）：200-203.

[3]李群，譚國珍、孟珍，等.激肽釋放酶結(jié)合蛋白對銀屑病動物模型的治療作用觀察[J].皮膚性病診療學(xué)雜志，2014，4（1）：11-15.

[4]Paolino D，Ventura CA，Nistic a S，et al.Lecithin microemulsions for the topicaladministration of ketoprofen：percutaneousadsorption through human skin and in vivohuman skin tolerahility[J].Int J Pharm，2002，244（1-2）：21-31.