規(guī)?；N豬場豬偽狂犬病凈化方法研究

彭 峰，江倩倩，章四新，王建舉，蘇 雷

（河南省諸美種豬育種集團(tuán)有限公司，河南 駐馬店 463612）

豬偽狂犬病是由豬偽狂犬病病毒引起的一種急性熱性傳染病，感染后豬的臨床癥狀因感染日齡不同而異，母豬主要表現(xiàn)為產(chǎn)死胎、弱仔等繁殖障礙；公豬表現(xiàn)為睪丸腫大，精液質(zhì)量下降；仔豬以神經(jīng)癥狀最為常見，感染后15日齡內(nèi)仔豬死亡率可達(dá)100%[1]，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將其列為B類動(dòng)物疫病，我國將其列為二類動(dòng)物疫病。豬偽狂犬病病毒可隨患病母豬的鼻液、乳汁、尿液等分泌物排出而感染仔豬，患病種公豬可經(jīng)精液將病毒傳播給母豬。因此，對(duì)種豬群進(jìn)行豬偽狂犬病凈化意義重大，同時(shí)，也有學(xué)者認(rèn)為種豬場實(shí)現(xiàn)偽狂犬病凈化勢在必行[2]。

在國外，美國、英國、荷蘭等國家已在全國范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)豬偽狂犬病的凈化，法國于1989年實(shí)施豬偽狂犬病根除計(jì)劃，計(jì)劃實(shí)施后，1998年法國豬偽狂犬病野毒感染抗體陽性率從1995年的24.7%降至4.5%[3]。我國豬偽狂犬病凈化起步較晚，在全國范圍內(nèi)還未進(jìn)行該病的凈化計(jì)劃，但經(jīng)過一些學(xué)者和養(yǎng)殖企業(yè)的努力，部分豬場也已成功清除了豬偽狂犬病。

本次試驗(yàn)豬場使用偽狂犬病gE基因缺失疫苗對(duì)豬群進(jìn)行免疫，所以我們采用偽狂犬病gB-ELISA方法對(duì)豬群免疫抗體進(jìn)行抽樣監(jiān)測，適時(shí)調(diào)整免疫程序；采用偽狂犬病gE-ELISA對(duì)豬群野毒感染抗體進(jìn)行抽樣監(jiān)測，及時(shí)淘汰偽狂犬病gE抗體陽性豬。經(jīng)過兩年持續(xù)不斷的檢測淘汰，使種公母豬群偽狂犬病gE抗體陽性率降至0并維持陰性，從而達(dá)到凈化目標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)豬場 河南某規(guī)?；N豬場，基礎(chǔ)母豬群1 109頭，種公豬102頭，年出欄種豬15 000頭。

1.1.2 試驗(yàn)試劑 偽狂犬病gB抗體檢測試劑盒、偽狂犬病gE抗體檢測試劑盒均購自IDEXX公司；豬偽狂犬病gE基因缺失活疫苗購自梅里亞公司；豬偽狂犬病gE基因缺失滅活疫苗購自武漢科前公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 凈化措施

（1）嚴(yán)把疫苗質(zhì)量關(guān)，選擇業(yè)內(nèi)口碑好的疫苗公司生產(chǎn)的產(chǎn)品。結(jié)合化驗(yàn)室監(jiān)測數(shù)據(jù)，確定免疫程序?yàn)椋鹤胸i1日齡時(shí)滴鼻1頭份偽狂犬病活疫苗，70、98日齡時(shí)分別進(jìn)行肌注1頭份偽狂犬病活疫苗，119、147日齡時(shí)肌注2 mL/頭偽狂犬病滅活疫苗，后備豬配種前肌注1頭份偽狂犬病活疫苗，種公母豬每年普防4次，每次肌注1頭份偽狂犬病活疫苗。

（2）完善生物安全措施。1）在距離場區(qū)大門口一定距離處建停車場和消毒中心，公司員工及外來客戶的車輛均停在停車場內(nèi)。外來購豬車輛需清洗干凈后進(jìn)入消毒中心進(jìn)行噴霧消毒。購豬車輛不能進(jìn)入場區(qū)，通過裝豬臺(tái)隔絕裝豬車和內(nèi)部的接觸，賣豬結(jié)束后對(duì)裝豬臺(tái)進(jìn)行徹底清洗消毒。2）購豬客戶不能進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)，可通過預(yù)售種豬觀察舍對(duì)種豬進(jìn)行觀察挑選。本場員工外出后需進(jìn)行隔離洗浴方可進(jìn)入場區(qū)。3）生產(chǎn)區(qū)、生活區(qū)、糞污和無害化處理區(qū)通過綠化帶和圍墻進(jìn)行有效分割。4）定期對(duì)豬場內(nèi)部及周邊雜草進(jìn)行清除，及時(shí)清除水坑等蚊蠅孳生地。5）每棟豬舍門口設(shè)有專門的消毒池，人員進(jìn)出均需消毒，消毒池內(nèi)的消毒液要定期更換。6）豬群實(shí)行嚴(yán)格的全進(jìn)全出制，豬舍內(nèi)豬群轉(zhuǎn)出后對(duì)豬舍進(jìn)行全面徹底的清洗消毒。7）在生產(chǎn)區(qū)實(shí)施滅鼠、滅蚊蠅、防鳥、防貓狗等措施，將病原微生物的傳播媒介降到最低。

（3）部分清群法和檢測淘汰法。1）對(duì)符合體重要求的肥育豬和保育豬進(jìn)行出售，剩余豬全部轉(zhuǎn)移至另一擴(kuò)繁場進(jìn)行飼養(yǎng)，對(duì)豬場肥育區(qū)和保育區(qū)進(jìn)行徹底清潔、消毒、圈舍修整。2）對(duì)所有種公母豬和后備公母豬進(jìn)行偽狂犬病gB和偽狂犬病gE抗體檢測，對(duì)偽狂犬病gB抗體陰性豬進(jìn)行補(bǔ)免豬偽狂犬病gE基因缺失活疫苗，淘汰偽狂犬病gE抗體陽性豬。

（4）制定監(jiān)測計(jì)劃。部分清群法和檢測淘汰法凈化之后，每季度按比例在各階段豬群中采血進(jìn)行偽狂犬病gB和偽狂犬病gE抗體檢測。1）仔豬群按10%的比例分別在 2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24周齡進(jìn)行采血檢測。2）母豬每季度按40頭的數(shù)量分別在妊娠、哺乳、空懷等階段豬群中進(jìn)行采血檢測。3）公豬群每季度按25%的比例進(jìn)行采血檢測。4）本場選留的后備豬在入群前45 d進(jìn)行采血檢測，偽狂犬病gE抗體陽性豬立即淘汰，偽狂犬病gB抗體陰性者補(bǔ)免后2周重新檢測，抗體合格者入群，仍為陰性者淘汰。

1.2.2 血樣采集及化驗(yàn)室檢測

（1）按照監(jiān)測計(jì)劃對(duì)各階段豬群進(jìn)行前腔靜脈采血，血樣采集由豬場各階段負(fù)責(zé)人監(jiān)督采血，確保采血豬只耳號(hào)及免疫背景記錄清晰準(zhǔn)確，采血結(jié)束后血樣由專人送至化驗(yàn)室。常規(guī)方法分離血清后保存于無菌離心管，進(jìn)行相關(guān)檢測之后血清于-20℃凍存。

（2）化驗(yàn)室檢測人員嚴(yán)格按照檢測試劑盒步驟要求對(duì)血清進(jìn)行偽狂犬病gB抗體和偽狂犬病gE抗體檢測。

（3）根據(jù)各階段豬群偽狂犬病gB抗體消長規(guī)律，適時(shí)對(duì)豬偽狂犬病免疫程序進(jìn)行調(diào)整；對(duì)檢測出的偽狂犬病gE抗體陽性血清對(duì)應(yīng)的豬只及時(shí)淘汰。

2 試驗(yàn)結(jié)果

由表1、表2可知，該場2015年種母豬群偽狂犬病gE抗體陽性率為3.8%，種公豬群偽狂犬病gE抗體陽性率為3.3%，經(jīng)過兩年持續(xù)檢測淘汰的凈化，2017年種豬群偽狂犬病gE抗體陽性率均降至0，并一直維持至今。通過堅(jiān)持自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式，以及對(duì)選留的后備豬進(jìn)行嚴(yán)格的免疫抗體及野毒感染抗體的檢測，后備母豬及后備公豬偽狂犬病gE抗體陽性率分別從1.7%和2.2%均降至0，并一直維持至今。同時(shí)，從2015—2017年各階段豬群成活率和母豬生產(chǎn)性能均有明顯提升（表3、表4）。

表1 2015—2017年能繁種公母豬的偽狂犬病gB、gE抗體檢測結(jié)果

表2 2015—2017年后備公母豬的偽狂犬病gB、gE抗體檢測結(jié)果

表3 2015—2017年分娩率及產(chǎn)仔數(shù)

表4 2015—2017年各階段成活率

3 討論

本次凈化主要采用ELISA檢測方法，該檢測方法具有快速、簡便、敏感性高等優(yōu)點(diǎn)，OIE（世界動(dòng)物衛(wèi)生組織）將其作為診斷豬偽狂犬病的首選血清學(xué)方法，美國也將其作為檢測豬偽狂犬病的法定檢測方法之一[4]。

經(jīng)過兩年持續(xù)不斷的檢測淘汰方法，公豬群在2016年達(dá)到偽狂犬病gE抗體陰性狀態(tài)，這一結(jié)果也為后續(xù)母豬群進(jìn)行凈化提供了有力保障，避免母豬使用陽性公豬精液被感染的風(fēng)險(xiǎn)。母豬群在2015年偽狂犬病gE抗體陽性率為3.8%，經(jīng)過凈化，在2017年陽性率降至0，這也說明，當(dāng)母豬群感染抗體陽性率較低時(shí)（＜5%），采用檢測淘汰陽性母豬的方法，是比較經(jīng)濟(jì)快速的凈化方法。有學(xué)者經(jīng)過4年凈化在72家規(guī)?；i場中有14家豬場野毒感染抗體陽性率降為0[5]。該場后備豬群均為本場選留，在2016年也達(dá)到了偽狂犬病gE抗體陰性狀態(tài)，這與該場主要是自繁自養(yǎng)，未從國內(nèi)引過種豬，并且在后備豬入群前進(jìn)行了嚴(yán)格的免疫抗體與感染抗體檢測有關(guān)，在對(duì)后備豬進(jìn)行檢測后，淘汰偽狂犬病gE抗體陽性豬只，對(duì)偽狂犬病gB抗體陰性豬只進(jìn)行補(bǔ)免偽狂犬病gE基因缺失活疫苗，2周后重新采血進(jìn)行偽狂犬病gB抗體檢測，gB抗體陽性豬只留種，仍為陰性者不留種用。

該場之所以取得了比較徹底的豬偽狂犬病凈化成果，主要與以下幾方面有關(guān)：一、實(shí)行了嚴(yán)格的全進(jìn)全出制度，豬群轉(zhuǎn)出后對(duì)圈舍進(jìn)行徹底的清洗消毒，并且加強(qiáng)了場內(nèi)外的生物安全措施，降低了偽狂犬病病毒在豬群間傳播的風(fēng)險(xiǎn)；二、該場2013年最后一次從美國引進(jìn)種豬，未從國內(nèi)種豬場進(jìn)行過引種，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)的模式，后備公母豬均為本場選留，避免了引種時(shí)從外場帶進(jìn)病毒的風(fēng)險(xiǎn)；三、堅(jiān)持對(duì)豬群免疫抗體及感染抗體的監(jiān)測，及時(shí)了解豬群免疫抗體消長規(guī)律，適時(shí)調(diào)整免疫程序。對(duì)檢測到的偽狂犬病gE抗體陽性豬及時(shí)淘汰，避免其傳播病毒，感染其他豬只；四、及時(shí)調(diào)整免疫程序，通過對(duì)豬群免疫抗體及感染抗體進(jìn)行監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，豬場肥育后期會(huì)出現(xiàn)部分豬偽狂犬病gE抗體轉(zhuǎn)陽現(xiàn)象，本場將119日齡免疫科前公司偽狂犬病gE基因缺失滅活疫苗改為免疫梅里亞公司偽狂犬病gE基因缺失活疫苗，豬群偽狂犬病gE抗體轉(zhuǎn)陽現(xiàn)象得到有效控制。調(diào)整后的免疫程序?yàn)椋鹤胸i群1日齡滴鼻免疫梅里亞偽狂犬病活疫苗，70、98、119日齡肌注免疫梅里亞偽狂犬病活疫苗，147日齡肌注免疫武漢科前偽狂犬病滅活疫苗，后備豬配種前肌注1頭份偽狂犬病活疫苗，種公母豬每年普防4次，每次肌注1頭份偽狂犬病活疫苗。

規(guī)模化豬場進(jìn)行豬偽狂犬病凈化時(shí)應(yīng)充分考慮本場的免疫程序、生物安全、免疫抗體的消長規(guī)律等多方面的因素，同時(shí)不能忽視飼養(yǎng)管理在疫病凈化工作中所起的作用，以及豬場中其他疾病如豬瘟、藍(lán)耳病、圓環(huán)病毒病等影響，應(yīng)采取綜合防控措施才會(huì)在偽狂犬病凈化的工作中取得良好效果。