不同因素對豬瘟疫苗免疫效果的影響

代洪波，林 艷，周遠(yuǎn)成，陰文奇

（1.畜禽生物制品四川省重點實驗室，四川 成都 610200；2.四川省動物生物制品工程技術(shù)研究中心，四川 成都 610200）

豬瘟是一種高度接觸性傳染病，不同品種、不同年齡段的豬均易感，并且死亡率極高，每年給我國養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，豬瘟活疫苗免疫是防治該病的唯一有效途徑。我國已經(jīng)實施了幾十年的豬瘟疫苗強(qiáng)制免疫，然而豬瘟的防控壓力依然巨大，豬瘟疫苗免疫效果不佳甚至免疫失敗的情況時有發(fā)生。豬瘟疫苗的免疫效果不僅受疫苗質(zhì)量的影響，同時還受到母源抗體、動物體況、免疫抑制性疾病等一系列因素的影響[1]。如何提高仔豬豬瘟疫苗首次免疫后的抗體水平、縮短仔豬抗體保護(hù)空窗期，已經(jīng)成為困擾我國規(guī)?；B(yǎng)豬的一大難題[2-3]。本試驗分別開展不同劑量豬瘟疫苗免疫試驗與不同母源抗體水平免疫試驗，評價抗原量與母源抗體水平對豬瘟疫苗免疫效果的影響。同時結(jié)合規(guī)?；B(yǎng)殖場的實際案例，探討如何縮短仔豬抗體保護(hù)空窗期等問題。

1 不同劑量免疫試驗

1.1 試驗時間、地點與試驗動物

試驗于2017年12月至2018年1月在四川某公司實驗動物房進(jìn)行。篩選4~5周齡豬瘟ELISA抗體陰性試驗仔豬20頭。

1.2 試劑與疫苗

豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒，購自IDEXX公司。豬瘟細(xì)胞源活疫苗（15 000 RID/頭份），由四川華神獸用生物制品有限公司提供。

1.3 分組與接種

選用20頭豬瘟抗體陰性仔豬，隨機(jī)分為4組，每組5頭。A組：每頭仔豬肌肉注射30 000 RID的豬瘟細(xì)胞苗；B組：每頭仔豬肌肉注射15 000 RID的豬瘟細(xì)胞苗；C組：每頭仔豬肌肉注射7 500 RID的豬瘟細(xì)胞苗；D組：不接種，作為對照組。

1.4 采血與抗體檢測

所有試驗豬，分別在免疫后 14 d、21 d、28 d、35 d采血分離血清，用豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒進(jìn)行抗體檢測。

1.5 結(jié)果與討論

不同劑量免疫試驗豬瘟抗體檢測結(jié)果見表1。對照組（D組）試驗過程中豬瘟抗體檢測結(jié)果均為陰性。

C組（7 500 RID/頭）免疫后28 d豬瘟ELISA抗體全部轉(zhuǎn)陽，阻斷率均值69.4%；免疫后35 d阻斷率均值上升至78.8%。B組（15 000 RID/頭）免疫后28 d豬瘟ELISA抗體全部轉(zhuǎn)陽，阻斷率均值71%，比C組高1.6個百分點；免疫后35 d阻斷率均值82.8%，比C組高4個百分點。A組（30 000 RID/頭）免疫后21 d豬瘟ELISA抗體全部轉(zhuǎn)陽，比B組與C組提前7 d；免疫后28 d阻斷率均值77.6%，比B組高6.6個百分點；免疫后35 d阻斷率均值84.6%，比B組高1.8個百分點。

分別以每頭7 500 RID、15 000 RID、30 000 RID劑量進(jìn)行豬瘟細(xì)胞苗免疫豬瘟抗體陰性仔豬，免疫后28 d即可產(chǎn)生高水平的ELISA抗體；提高豬瘟抗體陰性豬的免疫劑量，豬群ELISA抗體轉(zhuǎn)陽的時間提前；隨著豬瘟疫苗免疫劑量的提高，豬瘟ELISA抗體阻斷率均值有所上升。

表1 不同劑量免疫試驗豬瘟抗體檢測結(jié)果

2 不同母源抗體免疫試驗

2.1 試驗時間、地點與試驗動物

試驗于2018年4—6月在四川某公司動物實驗房進(jìn)行。篩選3~4周齡豬瘟母源抗體阻斷率60%~80%試驗豬10頭，豬瘟母源抗體阻斷率值40%~50%試驗豬5頭，豬瘟抗體陰性試驗豬10頭。

2.2 試劑與疫苗

豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒，購自IDEXX公司。豬瘟細(xì)胞源活疫苗（15 000 RID/頭份），由四川華神獸用生物制品有限公司提供。

2.3 分組與接種

將10頭豬瘟母源抗體阻斷率60%~80%試驗豬隨機(jī)分為2組，每組5頭，記為第1組與第2組；將豬瘟母源抗體阻斷率值40%~50%的5頭試驗豬記為第3組；將10頭豬瘟抗體陰性試驗豬隨機(jī)分為2組，每組5頭，記為第4組與第5組。第1組每頭肌肉注射30 000 RID豬瘟細(xì)胞苗；第2組至第4組每頭肌肉注射15 000 RID豬瘟細(xì)胞苗；第5組：不接種為對照組。一免后28 d，第1組至第4組分別以相同劑量進(jìn)行二免。

2.4 采血與抗體檢測

所有試驗豬，分別在一免后14 d、一免后28 d（二免前）、二免后14 d、二免后28 d采血分離血清，以豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒進(jìn)行抗體檢測。

2.5 結(jié)果與討論

不同母源抗體免疫試驗豬瘟抗體檢測結(jié)果見表2。對照組（第5組）試驗過程中豬瘟抗體檢測結(jié)果均為陰性。

第 1組（30 000 RID/頭）與第 2組（15 000 RID/頭）免疫前豬瘟母源抗體阻斷率均值70%以上，一免后14 d抗體阻斷率均值分別為64.4%與61%；一免后28 d阻斷率均值分別為44.6%與38.4%；二免后14 d阻斷率均值分別為67.2%與58.2%；二免后28 d阻斷率均值為77.8%與68.6%，相差9.2個百分點。

第3組（15 000 RID/頭）免疫前豬瘟母源抗體阻斷率均值43.8%，一免后14 d抗體阻斷率均值降低至41.6%；一免后28 d阻斷率均值為51.6%，陽性率100%；二免后14 d阻斷率均值上升至64.4%；二免后28 d阻斷率均值79.6%，比第2組高11個百分點。

第4組無豬瘟母源抗體，二免后28 d豬瘟ELISA抗體阻斷率均值為85.8%，比第1組高8個百分點，比第2組高17.2個百分點，比第3組高6.2個百分點。

高水平母源抗體組（阻斷率值60%以上）一免后14 d仍維持較高水平的母源抗體，二免后的豬瘟抗體水平受到較大影響，與無母源抗體組存在較大差異。低水平母源抗體（阻斷率值40%~50%）對一免后豬瘟疫苗抗體水平有一定影響，對二免后豬瘟疫苗抗體水平影響較小。在較高母源抗體的情況下，提高豬瘟疫苗的免疫劑量，可以在一定程度上改善豬瘟疫苗的免疫效果。

表2 不同母源抗體水平接種豬瘟疫苗ELISA抗體檢測結(jié)果

3 免疫程序調(diào)整試驗

3.1 試驗豬場

四川某規(guī)?；B(yǎng)殖場，經(jīng)產(chǎn)母豬3 000頭左右。

3.2 試驗前豬瘟疫苗免疫程序

后備豬：配種前間隔1個月進(jìn)行2次豬瘟疫苗免疫；經(jīng)產(chǎn)母豬：仔豬21日齡斷奶時跟胎免疫豬瘟疫苗；仔豬：28日齡豬瘟疫苗一免，60日齡豬瘟疫苗二免。母豬與仔豬的接種劑量均為1頭份/頭。

3.3 試驗前豬瘟抗體檢測

2018年3月對不同階段豬群采樣進(jìn)行豬瘟抗體檢測，結(jié)果顯示初產(chǎn)母豬陽性率100%，阻斷率均值73.9%；經(jīng)產(chǎn)母豬陽性率80%，阻斷率均值54.0%。2周齡仔豬陽性率60%，阻斷率均值44.7%；4周齡陽性率30%，阻斷率均值35.3%；6周齡豬瘟抗體全為陰性；8周齡陽性率上升至70%，阻斷率均值上升至41.2%。試驗前豬瘟抗體檢測結(jié)果見表3。

表3 試驗前豬瘟抗體檢測結(jié)果

結(jié)合免疫程序分析，初產(chǎn)母豬配種前完成2次豬瘟疫苗接種，豬瘟抗體水平較高；經(jīng)產(chǎn)母豬每頭接種1頭份，仔豬斷奶時豬瘟抗體水平不高，母源抗體持續(xù)時間有限；仔豬4周齡進(jìn)行豬瘟一免，6周齡時疫苗免疫抗體水平較低，而母源抗體消減，導(dǎo)致6周齡仔豬抗體檢測全部陰性；8周齡時豬瘟疫苗免疫抗體上升，陽性率與阻斷率均值有所提高。

3.4 豬瘟免疫程序調(diào)整

為提高6周齡左右豬群的豬瘟抗體水平，分別開展母豬免疫劑量調(diào)整試驗與仔豬免疫時間調(diào)整試驗。1）母豬試驗：免疫時間不變，將經(jīng)產(chǎn)母豬的免疫劑量調(diào)整為2頭份/頭，提高仔豬的母源抗體水平；2）仔豬試驗：免疫劑量不變，將仔豬的豬瘟疫苗免疫時間提前至21日齡，提高6周齡仔豬的豬瘟抗體水平。

3.5 采血與抗體檢測

母豬試驗：母豬產(chǎn)仔后，分別抽樣采集2周齡、4周齡、6周齡、8周齡仔豬血液樣本，母豬產(chǎn)后2周抽樣采血。仔豬試驗：分別采集3周齡（免疫前）、5周齡（免疫后14 d）、6周齡（免疫后21 d）、7周齡（免疫后28 d）仔豬血液樣本。以IDEXX公司豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒進(jìn)行檢測。

3.6 免疫程序調(diào)整后豬瘟抗體檢測結(jié)果

3.6.1 母豬試驗結(jié)果 共選用50頭母豬，將母豬免疫劑量調(diào)整為2頭份/頭，產(chǎn)仔后2周抽樣檢測，豬瘟ELISA抗體全部陽性，阻斷率均值77.9%。仔豬2周齡豬瘟母源抗體陽性率100%，阻斷率均值62.8%；4周齡母源抗體陽性率60%，阻斷率均值51.4%。仔豬4周齡每頭免疫1頭份豬瘟細(xì)胞苗，6周齡豬瘟抗體陽性率60%，阻斷率均值44.3%；8周齡陽性率上升至80%，阻斷率均值50.8%。母豬試驗豬瘟抗體檢測結(jié)果見表4。

將母豬的免疫劑量調(diào)整為2頭份/頭，與調(diào)整前相比，2周齡與4周齡仔豬的母源抗體水平有所提高。6周齡（免疫后14 d）豬瘟疫苗免疫產(chǎn)生的抗體水平有限，母源抗體仍維持在一定水平，可以給豬群提供一定的抗體保護(hù)；仔豬8周齡時，首次免疫的豬瘟疫苗已經(jīng)產(chǎn)生較高水平的豬瘟抗體。

表4 母豬試驗豬瘟抗體檢測結(jié)果

3.6.2 仔豬試驗結(jié)果 在母豬免疫劑量不變的條件下，共選用100頭仔豬在3周齡進(jìn)行豬瘟疫苗接種。仔豬3周齡（免疫前）母源抗體陽性率60%，阻斷率均值47.3%；5周齡（免疫后14 d）豬瘟抗體陽性率降低至50%，阻斷率均值42.2%；6周齡陽性率上升至60%，阻斷率均值45%；7周齡陽性率上升至80%，阻斷率均值49.9%。仔豬試驗豬瘟抗體檢測結(jié)果見表5。

在母源抗體水平有限的情況下，將豬瘟疫苗免疫時間提前至3周齡，仔豬6周齡時母源抗體消減，仔豬首次免疫的豬瘟疫苗已經(jīng)產(chǎn)生較高水平的豬瘟抗體，有效縮短了6周齡左右豬群豬瘟抗體的空窗期。

表5 仔豬試驗豬瘟抗體檢測結(jié)果

4 分析與討論

我國豬瘟疫苗的種類與生產(chǎn)廠家眾多，豬瘟疫苗的品質(zhì)主要與疫苗種類、生產(chǎn)工藝和抗原含量有關(guān)。豬瘟脾淋苗每頭抗原量不低于150 RID，細(xì)胞苗每頭抗原量不低于750 RID、傳代細(xì)胞苗每頭抗原量不低于7 500 RID。隨著我國豬瘟疫苗品質(zhì)的不斷提升，對豬瘟疫苗中牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）等外源污染越來越重視，豬感染BVDV后表現(xiàn)出亞臨床感染，其癥狀和病理變化類似于溫和型豬瘟[4]。豬瘟疫苗中污染BVDV，將干擾豬瘟疫苗的免疫效果，影響抗體水平[5]。本試驗分別以每頭7 500 RID、15 000 RID、30 000 RID劑量的豬瘟細(xì)胞苗免疫陰性仔豬，免疫后28 d全部產(chǎn)生較高水平的豬瘟抗體；隨著免疫劑量的提高，豬瘟抗體轉(zhuǎn)陽的時間提前，抗體阻斷率均值有所上升，但組間無顯著差異。與熊丁杰等[6]的試驗結(jié)果一致，在沒有母源抗體等因素影響的情況下，仔豬單次接種合理劑量的豬瘟活疫苗就能產(chǎn)生堅強(qiáng)的抗體保護(hù)。

在豬瘟疫苗使用過程中，母源抗體是影響仔豬免疫效果的最主要因素之一，在高水平母源抗體水平時進(jìn)行豬瘟疫苗免疫，母源抗體會與豬瘟疫苗發(fā)生中和作用，導(dǎo)致疫苗首次免疫效果較差。若在母源抗體消減后再進(jìn)行豬瘟疫苗免疫，將會產(chǎn)生較長時間的免疫空窗期，增加豬瘟病毒感染風(fēng)險。因此，有條件的規(guī)?；B(yǎng)豬場需要定期進(jìn)行豬瘟抗體檢測，根據(jù)仔豬母源抗體水平適當(dāng)調(diào)整免疫程序，以獲得高水平的群體保護(hù)。

此外，其他動物疫病感染，以及動物體況等因素均會對豬瘟疫苗免疫效果造成較大的影響。寧宜寶等[7]通過試驗證實，豬細(xì)小病毒、豬偽狂犬病病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒單獨或混合感染，均會對豬瘟疫苗的免疫效果產(chǎn)生一定的影響，當(dāng)豬群受到豬瘟強(qiáng)毒攻擊時，無法有效清除豬瘟強(qiáng)毒，造成持續(xù)感染與對外排毒。筆者在規(guī)?；i場開展豬瘟疫苗免疫試驗時發(fā)現(xiàn)，同一批相同劑量免疫的仔豬，部分試驗豬發(fā)生腹瀉疾病，腹瀉豬群的豬瘟抗體水平比其他豬低，并且抗體的離散度較大。規(guī)?；B(yǎng)殖場對豬瘟的防控，需要從疫苗品質(zhì)、免疫程序、飼養(yǎng)管理等眾多方面入手，做好每一個環(huán)節(jié)的把控，才能營造高水平的豬瘟抗體保護(hù)。