40%阿維菌素干懸浮劑的HPLC分析

李 飛，韓沖沖，李保同

（江西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，南昌 330045）

阿維菌素（abamectin）是由日本北里大學(xué)和美國Merck公司開發(fā)的一類具有殺蟲、殺螨和殺線蟲活性的十六元大環(huán)內(nèi)酯類化合物[1]，已廣泛用于水稻、煙草、果樹和蔬菜等作物上害蟲和螨類的防治[2-4]。目前國內(nèi)已有阿維菌素水乳劑、微乳劑的HPLC分析方法報(bào)道[5-6]，但多采用甲醇＋水體系為流動(dòng)相，分析時(shí)間往往較長。本文采用乙腈＋水為流動(dòng)相，對綠色環(huán)保新制劑40%阿維菌素干懸浮劑中的有效成分進(jìn)行HPLC分析，方法操作簡便，可以快速準(zhǔn)確地對阿維菌素進(jìn)行定量分析。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試劑

乙腈（色譜純）；96.0%阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品（農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所提供）；40%阿維菌素干懸浮劑（江西納農(nóng)新田科技有限公司）。

1.2 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀，帶DAD檢測器（美國Agilent科技有限公司）；色譜柱：Zorbax E-clipse XDB-C1（8150 mm×4.6 mm，5 μm）不銹鋼柱；0.22 μm有機(jī)濾膜；超聲波清洗器；紫外可見分光光度計(jì)。

1.3 色譜條件

流動(dòng)相：V（乙腈）∶V（水）=80∶20；流速為1 mL/min；檢測波長為245 nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣量為20 μL。在此條件下，阿維菌素B1a保留時(shí)間為7.137 min，阿維菌素B1b保留時(shí)間為4.056 min。阿維菌素B1a和B1b標(biāo)樣溶液液相色譜圖見圖1。

圖1阿維菌素標(biāo)樣溶液液相色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取0.010 8 g阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，適量乙腈溶解，超聲波水浴助溶15 min，冷卻至室溫，然后用乙腈定容，配制成200 mg/L母液，備用。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取0.025 0 g試樣（精確至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加入乙腈，超聲波水浴助溶，冷卻至室溫，然后用乙腈定容，過0.22 μm有機(jī)濾膜，備用。

1.4.3 測定

在上述液相色譜條件下，待儀器泵的壓力和基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，待相鄰2針峰面積變化小于1.5%時(shí)，按標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣。

1.4.4 計(jì)算

根據(jù)標(biāo)樣溶液和試樣溶液中阿維菌素（B1a＋B1b）的峰面積，按外標(biāo)法定量計(jì)算試樣溶液中阿維菌素（B1a＋B1b）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%），計(jì)算公式如下。

式中：A1為標(biāo)樣溶液中阿維菌素（B1a＋B1b）峰面積的平均值；A2為試樣溶液中阿維菌素（B1a＋B1b）峰面積的平均值；m1為阿維菌素（B1a＋B1b）標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量（g）；m2為試樣的質(zhì)量（g）；P為阿維菌素（B1a＋B1b）標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

通過DAD二極管陣列檢測器進(jìn)行全波長掃描，獲得阿維菌素紫外吸收譜圖（圖2）。從圖中看出，阿維菌素在245 nm附近響應(yīng)值最大。因此選擇245 nm為檢測波長。

阿維菌素可以使用甲醇＋水體系和乙腈＋水體系為流動(dòng)相。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，以乙腈＋水體系為流動(dòng)相，峰形尖銳，保留時(shí)間更短，且與雜質(zhì)峰分離效果好，吸收峰在7.13min和4.06min附近。故選擇乙腈＋水體系為流動(dòng)相，兩者體積比為80∶20，流速為1mL/min。

圖2 阿維菌素紫外吸收譜圖

2.2 方法線性關(guān)系測定

用流動(dòng)相將200 mg/L標(biāo)樣溶液母液逐級(jí)稀釋為質(zhì)量濃度0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、20 mg/L的標(biāo)樣溶液，在上述色譜檢測條件下，用外標(biāo)法（峰面積）進(jìn)行定量分析。以待測阿維菌素的質(zhì)量濃度為x軸，以色譜峰的峰面積為y軸，作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。方法的線性回歸方程y=34.942 0 x-0.021 2，R2=0.999 9（圖3）。結(jié)果表明：在質(zhì)量濃度0.01～20 mg/L時(shí)，阿維菌素峰面積與質(zhì)量濃度線性關(guān)系良好。該方法可用于阿維菌素的分析和檢測。

圖3 方法的線性關(guān)系圖

2.3 方法精密度測定

從同一阿維菌素制劑產(chǎn)品中稱取5份試樣，在上述色譜條件下測定阿維菌素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，得到標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)，結(jié)果見表1。方法的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.43，變異系數(shù)為1.06%，變異系數(shù)滿足國際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會(huì)（CIPAC）的要求（＜1.71%）。

表1 40%阿維菌素干懸浮劑精密度測定結(jié)果

2.4 方法準(zhǔn)確度測定

準(zhǔn)確稱取5份已知含量的40%阿維菌素干懸浮劑試樣，分別置于50 mL容量瓶中，每份試樣中加入一定量的阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品，在上述色譜條件下測定。阿維菌素的回收率為99.39%～102.11%，平均回收率為100.37%（見表2）。

表2 40%阿維菌素干懸浮劑回收率測定結(jié)果

3 結(jié)論

本方法以C18反相色譜柱為分離柱，乙腈＋水（體積為80∶20）為流動(dòng)相，245 nm為檢測波長，測定40%阿維菌素干懸浮劑中有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。方法具有操作簡便，分離效果好，線性關(guān)系良好，準(zhǔn)確度和精密度高等優(yōu)點(diǎn)，適用于制劑中阿維菌素的定量分析。