二羥基乙酸鹽比色法測定飼料中色氨酸的含量

李永才

摘要：采用二羥基乙酸鹽比色法測定飼料中色氨酸的含量。測得色氨酸的RSD為1.89%～3.23%，平均回收率為92.50%～93.40%。該方法所需儀器簡單，操作方便，靈敏度較高，測定結果準確，可用于飼料中色氨酸含量的測定。

關鍵詞：二羥基乙酸鹽；比色法；色氨酸；飼料

中圖分類號：S816.17 文獻標識碼：A 文章編號：1674-1161（2018）04-0043-02

飼料中的色氨酸是動物維持生命和生長所必需的氨基酸，其含量被用作評價飼料營養(yǎng)品質的重要指標。目前主要采用氨基酸自動分析儀、高效液相色譜、離子交換層析、熒光等方法測定飼料中色氨酸的含量，但上述方法均存在儀器價格昂貴的問題，使其應用受到一定限制。而比色法所需儀器簡單、價格便宜，便于普及推廣。

1 材料與方法

1.1 原理

在濃硫酸存在下，三價鐵離子可將乙酸氧化成二羥基乙酸，二羥基乙酸又與經木瓜蛋白酶水解后從蛋白質中解離出來的色氨酸的吲哚環(huán)反應，生成紅紫色化合物，其顏色深淺與色氨酸的含量成正比。

1.2 儀器

日立U-3010紫外分光光度計：日本日立公司。

1.3 試劑

1.3.1 0.1 mol/L HAC—NaAC緩沖液（pH 7.0） 將0.1 mol/L HAC與NaAC溶液按1∶178混合。

1.3.2 木瓜酶水解液 稱取400 mg木瓜蛋白酶，放入小研缽中，加少量0.1 mol/L HAC—NaAC緩沖液，充分研磨使其呈勻漿狀，轉移到100 mL容量瓶中，用HAC—NaAC緩沖溶液沖洗研缽并倒入容量瓶中，最后用HAC—NaAC緩沖液稀釋至刻度。

1.3.3 混合顯色液 將0.03%氯化鐵乙酸液與15 mol/L硫酸液于使用前1～2 h等體積混合。

1.3.4 色氨酸標準貯備液 準確稱取20 mg DL-色氨酸（經105 ℃恒重），加幾滴0.1 mol/L氫氧化鈉及少量水溶解后，定量轉移到200 mL容量瓶中，加水至刻度，混勻，貯于冰箱中。

1.3.5 色氨酸標準工作液 分別吸取2.50，3.75，5.00，

6.25，7.50，10.00 mL色氨酸標準貯備液置于25 mL容量瓶中，用pH 7.0的HAC—NaAC緩沖液稀釋至刻度，配制成的標準工作液濃度分別為10，15，20，25，30，40 μg/mL。

1.4 測定方法

1.4.1 標準曲線繪制 分別精密吸取1 mL各濃度色氨酸標準工作液和1 mL pH 7.0的HAC—NaAC緩沖液（作空白）置于試管中，向各試管中加入5 mL混合顯色液，搖勻，放入65 ℃恒溫水浴中保溫15 min，冷卻至室溫，于545 nm處測定吸收值，得回歸方程為：A=-0.001 39+0.009 45 C，r=0.999 2。

1.4.2 樣品測定 稱取磨碎、混勻的樣品100 mg置于試管中，加入5 mL木瓜酶水解液，小心振蕩，使樣品完全浸濕又無顆粒粘于管壁，放入65 ℃恒溫箱中過夜。取出振搖，冷至室溫，離心，取1 mL上清夜，加5 mL混合顯色液，之后步驟同標準曲線繪制方法，計算得出樣品中色氨酸含量。

2 結果與討論

2.1 樣品中色氨酸含量測定結果

8種樣品中色氨酸含量的測定結果見表1。

2.2 精密度試驗結果

分別對3種樣品進行6次重復測定，考察方法的精密度，結果見表2。

由表2可知：該方法測定色氨酸含量的RSD為1.89%～3.23%。

2.3 回收率試驗結果

采用加樣回收法進行回收率試驗，結果見表3。

由表3可知：該方法平均回收率為92.50%～93.40%。

3 結論與討論

二羥基乙酸鹽比色法具有所需儀器簡單、操作方便、靈敏度較高、測定結果準確等特點，可用于測定飼料中色氨酸的含量。冰乙酸純度對該方法測定結果影響較大，宜用優(yōu)級純或冰乙酸加高錳酸鉀進行蒸餾；色氨酸標準貯備液可用1周，而色氨酸標準工作液應現(xiàn)用現(xiàn)配；脂肪含量大于5%的樣品應脫脂，否則測定結果偏低且不規(guī)則。

參考文獻

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