外泌體形成分泌調控及其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用

翁新憲,周 轉,張治寶,2,廖朝亮,楊力芳*

（1.中南大學腫瘤研究所,中國湖南長沙410078;2.中南大學湘雅醫(yī)院,中國湖南長沙410008）

外泌體（exosome）是具有雙層膜結構的胞外膜性囊泡,直徑范圍30～200 nm,電鏡下呈現杯托樣結構[1,2]。近年來的研究表明,腫瘤微環(huán)境與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。腫瘤細胞不僅可以通過細胞與細胞直接接觸或釋放可溶性細胞因子的方式發(fā)揮功能,還可以通過分泌外泌體實現與腫瘤微環(huán)境中其他細胞之間的聯(lián)系,介導多種生物學效應。外泌體載有特異性生物學物質,其中脂質成分包含有鞘脂、膽固醇、神經酰胺以及花生四烯酸和前列腺素等信號分子;常見的蛋白質包括膜轉運和融合蛋白（GTP酶,膜聯(lián)蛋白,flotillin）、四跨膜蛋白（CD9,CD63,CD81,CD82）、伴侶分子（Hsp70,Hsp90）、多囊內體合成蛋白（Alix,TSG101）、細胞骨架蛋白（Actin,Tubulin）和脂質相關蛋白質;此外,還涉及DNA、mRNA、microRNA、中間代謝產物等。這些物質不僅能反映其來源細胞類型,更重要的是,還與其來源細胞的生理功能或病理改變密切相關。外泌體與受體細胞融合,傳遞信息分子,誘發(fā)相關的信號通路,執(zhí)行多種重要的生物學功能[3,4]。外泌體不僅具有細胞間物質轉運和信息傳遞的生理功能,還具有促進腫瘤發(fā)生進展、免疫逃≥、血管生成、藥物及放射抵抗等功能[5]。本文著重探究外泌體的形成、分泌機制及其在腫瘤發(fā)生發(fā)展研究中的進展。

1 外泌體形成機制

1.1 外泌體的形成

目前,對外泌體形成的機制已有比較充分的認識。首先,胞膜通過內吞作用形成小囊泡即內吞室,內吞室相互融合形成早期內體（early endosome,EE）并進入內體循環(huán)。隨后,早期內體進一步成熟,轉化為晚期內體（late endosome,LE）,此時,內體膜返褶逆出芽形成腔內囊泡（intraluminal vesicle,ILV）[6,7]。富含ILV的內體稱為多囊內體（multivesicular body,MVB）。含有 CD63、LAMP1、LAMP2以及晚期內體標志的MVB與細胞質膜融合,釋放其內ILV至胞外,形成外泌體[8,9]（圖1）。外泌體形成機制主要有內體運輸分選復合物（endosomal sorting complex required for transport,ESCRT）依賴和ESCRT非依賴兩種形式（圖2）。

圖1 外泌體形成與分泌過程PM:細胞膜;ILV:腔內囊泡;MVB:多囊內體。Fig.1 Exosome biogenesis and secretionPM:Plasma membrane;ILV:Intraluminal vesicle;MVB:Mul-tivesicular body.

1.2 ESCRT依賴的形成機制

外泌體形成過程中ESCRT募集泛素化的蛋白質到質膜上,促使MVB釋放其內ILV至胞外。ESCRT在外泌體形成過程中的功能最初是從蛋白質組學的研究中提出[10]。ESCRT包含4種復合體及相關輔助蛋白質,ESCRT-0識別并募集大多數蛋白質,ESCRT-Ⅰ和ESCRT-域誘導出芽,ESCRT-Ⅲ促使囊泡分離,而輔助蛋白質（VTA1、ALIX、VPS4等）尤其是VPS4,r促使ESCRT之間發(fā)生不斷分離和再結合的循環(huán)過程。這些物質在外泌體形成的過程中各顯其能[11]。

相關研究發(fā)現,ESCRT-0的成員Hrs（hepatocyte growth factor-regulated tyrosine kinase substrate）能識別被泛素標記的蛋白質,并與ESCRT-0的另一組分信號轉導配適分子（signal transducing adaptor molecule,STAM）相互作用。抑制Hrs表達[12～14],或者敲除STAM1[15],均能使外泌體的形成減少。此外,ESCRT-Ⅰ成員腫瘤易感基因101（tumor susceptibility gene 101,TSG101）的缺失也能使外泌體的形成量減少[16]。人們在乳腺癌中發(fā)現,ESCRT-Ⅲ成員CHMP4的缺失會使外泌體的形成減少[17]。這些研究充分說明了ESCRT在外泌體形成中的關鍵作用。

有研究報道,輔助蛋白質ALIX可促進內體出芽形成腔內囊泡從而增加外泌體的形成量[17]。但在HeLa-CIITA細胞中,敲除ALIX能夠增加MHC class域在胞質中的積累,對外泌體的形成沒有影響[15]。VPS4參與腔內囊泡形成的最后一步,促使膜或ESCRT-Ⅲ復合體的分離[18]。在HeLa-CIITA細胞中抑制VPS4B的功能可使外泌體的形成增多[15],然而,在乳腺癌細胞中同時沉默VPS4A和VPS4B之后exosome的形成增加,沉默VPS4A、VPS4B兩者中任何一個,對exosome的形成沒有太大影響[17]。在RPE1細胞中同時抑制VPS4A、VPS4B能抑制exosome的分泌[16]。這些研究提示以不同細胞為實驗模型其外泌體生成存在異質性。

1.3 ESCRT非依賴的形成機制

近年來,研究者發(fā)現除了經典的ESCRT依賴機制,細胞還可以通過ESCRT非依賴機制輔助生成ILV及MVB,包括脂質、四跨膜蛋白家族分子或熱休克蛋白（heat-shock protein,HSP）。Trajkovic等[19]首次證實了外泌體形成的ESCRT非依賴機制。他們在實驗模型中敲降ESCRT,發(fā)現含有脂質蛋白（proteolipid protein,PLP）的外泌體能正常形成。中性鞘磷脂酶（neutral sphingomyelinase,nSMase）水解鞘磷脂生成神經酰胺（ceramide）,進一步的研究發(fā)現抑制該酶的作用可減少神經酰胺的生成,進而降低MVB膜的內向生芽作用,減少外泌體的形成,提示神經酰胺以不依賴ESCRT的作用而形成外泌體。Kosakan和Chairoungdua團隊應用nSMase抑制劑GW4869作用于HEK293細胞可減少內含PLP外泌體的分泌,其過程不依賴于ESCRT,而需要神經酰胺的合成[20,21]。膽固醇是MVB的一個重要組成成分[22],同時也富含于外泌體外膜[23]。在少突膠質細胞中,通過藥物或基因誘導膽固醇在晚期MVB中累積,能促進包含flotillin-2、ALIX、CD63和膽固醇的外泌體分泌,這個過程依賴于flotillin-2[24]。磷脂酶D2（phospholipases D2,PLD2）能將磷脂酰膽堿水解成磷脂酸,研究報道外泌體的形成需要PLD2的參與[25,26]。

研究發(fā)現,四跨膜蛋白家族與外泌體內含物的分選有關。人們應用nSMase抑制劑GW4869作用腫瘤細胞系,觀察到多種典型的外泌體蛋白質（CD63、CD81 或 TSG101）和 miRNA 的分泌減少[12,27]。在人黑色素瘤細胞中,CD63能分選黑色素蛋白使其進入ILV,這個過程既不依賴神經酰胺途徑也不依賴 ESCRT 途徑[28]。TSPAN8[29]和 CD81[30]也可分選一系列配體等進入外泌體。在HEK293細胞中,過表達CD9或CD82能促進外泌體形成[21]。

此外,分子伴侶HSP70可募集轉鐵蛋白受體（transferrin receptor,TFR）到外泌體中[31],并結合胞漿蛋白KFERQ,進一步將胞漿蛋白轉運到ILV[32]。

以上信息提示,外泌體形成與ESCRT非依賴機制的關系是生命科學的熱點之一,隨著研究的深入,ESCRT非依賴機制輔助生成外泌體還需更多的實驗來充分證實其功能效應。

2 外泌體的分泌調節(jié)

除了外泌體形成的調控機制外,外泌體分泌的調節(jié)也是一個重要的科學問題。研究發(fā)現,細胞內形成MVBs后,不同亞群的MVBs有不同的降解途徑,分泌型MVB與細胞質膜融合釋放外泌體;降解型MVB與溶酶體融合,導致MVB及其內含物降解[8]。近年來,對外泌體分泌至胞外過程的研究逐漸增多,其主要依賴Rab家族[33]和SNARE家族的協(xié)助作用（圖2）。

2.1 Rab家族與外泌體分泌

Rab蛋白是存在于質膜和細胞器膜中的一類調節(jié)型的小分子,是鳥苷酸三磷酸酶（GTPase）結合蛋白Ras超家族中最大的亞家族,能調控囊泡轉運的不同階段,比如囊泡的出芽、囊泡和細胞內細胞器的運動、囊泡的銜接,從而促進膜的融合。Rab蛋白作為胞內的運輸蛋白質,在調控胞吞和胞吐過程中發(fā)揮重要作用[34]。

蛋白質組學分析發(fā)現外泌體中含有Rab家族蛋白[10]。第一個報道與外泌體分泌相關的Rab蛋白是Rab11,在白血病研究中發(fā)現,Rab11能調控外泌體分泌[35],過表達Rab11突變質粒,外泌體分泌減少[36]。在中性粒細胞[37]和原代少突膠質細胞[38]中,人們發(fā)現抑制Rab35的表達能減少外泌體分泌。后續(xù)在人RPE1細胞中也證實外泌體分泌需要Rab11或Rab35的參與[16]。在HeLa細胞中,沉默 Rab2B、Rab5A、Rab9A、Rab27A、Rab27B均能減少外泌體分泌,其中Rab27A和Rab27B的缺失減少效應更明顯,而Rab11A或Rab7的缺失對外泌體分泌無影響[39]。但是在MCF-7細胞中,包含同線蛋白和ALIX的外泌體分泌卻需要Rab7 的參與[17]。在黑色素瘤[40]、乳腺癌[41]中沉默Rab27A,外泌體分泌減少。而在人乳腺癌細胞MDA-MB-231中,Rab27A的缺失并不會減少外泌體分泌,但是同時敲除Rab27A和Rab27B會減少外泌體分泌[42]。大量研究證實Rab家族在外泌體膜融合過程中起重要作用,這為后續(xù)探索外泌體分泌的研究者們提供了思路。

2.2 SNARE家族與外泌體分泌

可溶性NSF附著蛋白受體（soluble NSF-attachment protein receptor,SNARE）家族是外泌體分泌中另一個重要的調節(jié)分子,是由多種蛋白質組成的復合體。兩個負載不同成分的細胞進行精準對接之后,SNARE有助于脂質雙分子層融合[43]。在不同類型的細胞中,SNARE蛋白SNAP-23、VAMP-7和VAMP-8參與鈣離子調控的溶酶體分泌物與細胞膜的融合[44～46]。在HEK293細胞中,SNARE蛋白復合體中的Ykt6促進裝載成形素WNT3A的外泌體分泌[13]。在果蠅MVB中,人們也檢測到Ykt6蛋白的存在[47]。研究報道,突觸融合蛋白1A（syntaxin 1A,STX1A）也能作用于外泌體分泌機制[48]。由于SNARE介導細胞器膜融合的異質性,其作用還需在多個模型中驗證。

2.3 其他

Hyenne等[49]在秀麗隱桿線蟲和乳腺癌細胞中發(fā)現,Ral-1（Ras-related GTPase）定位于MVB膜表面,與MVB的形成、MVB和細胞膜的融合有關。該課題組還發(fā)現Ral-1的下游蛋白質——突觸融合蛋白5（syntaxin 5,STX5）在MVB膜與細胞膜融合的過程中也同樣發(fā)揮重要的作用,敲除STX5之后,MVB外膜不再與細胞膜融合,使得MVB在細胞內累積,與此同時,該過程需要RalA、RalB的參與。Yang等[50]在MCF-7細胞中發(fā)現,Rab3D能促進外泌體分泌。在T細胞中過表達甘油二酯激酶α（diacylglycerol kinaseα,DGKα）能抑制外泌體分泌,而遏阻DGKα的表達r能促進外泌體分泌[51],提示DGKα是MVB形成的負調控因子。總之,細胞中可能還存在許多效應分子與外泌體分泌調控有關,更深入探討跨膜分泌、細胞外分泌等途徑機制,將有助于對外泌體的全面認識。

3 受體細胞攝取外泌體的機制

外泌體形成分泌至胞外后被受體細胞攝取的過程也涉及到多種調節(jié)機制。外泌體表面分子與受體細胞質膜表面分子特異性結合介導了其與受體細胞的融合。研究證明,連接蛋白如整合素蛋白、細胞黏附分子能調控外泌體與受體細胞膜融合。比如:樹突狀細胞膜上LFA-1分子可與外泌體表面的ICAM-1特異結合[52],腫瘤細胞來源的外泌體表面表達的TSPAN8可與內皮細胞或前列腺癌細胞的ICAM-1結合[52],受體細胞表面CD169可與外泌體中高水平配體α2,3連接的唾液酸結合[53],腫瘤細胞產生的外泌體所表達的硫酸肝素糖蛋白可被受體細胞識別[54],巨噬細胞膜上的半凝素-5可識別紅細胞來源的外泌體[55]。此外,受體細胞內化外泌體同樣需要眾多分子參與。研究發(fā)現,受體細胞內化外泌體通過dynamin、PI3-kinase和actin聚合3種方式進行[38,56]。外泌體是細胞間重要的交流方式之一,在受體細胞攝取外泌體的機制研究中,除了通過分子間特異性結合介導的外泌體攝取外,更多其他作用方式還有待進一步的探索。

4 外泌體在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用

4.1 外泌體影響腫瘤細胞增殖和轉移

近年來,大量研究發(fā)現外泌體通過轉運不同的內含物調控受體腫瘤細胞的增殖和轉移。黑色素瘤相關研究發(fā)現,高侵襲性的黑色素瘤細胞通過外泌體分泌MET蛋白使骨髓祖細胞向表達c-Kit、Tie2和Met的表型轉化,并促進了腫瘤轉移前龕的形成,從而增加黑色素瘤的轉移[57]。鼻咽癌相關研究發(fā)現,LMP1陽性鼻咽癌細胞與陰性的細胞相比能夠產生更多的外泌體,轉運HIF1α蛋白至受體細胞,從而將高侵襲性的特性轉運到受體細胞,促進鼻咽癌的侵襲轉移[58]。KRAS是重要的致瘤蛋白[59],近期研究發(fā)現,大腸癌細胞可以通過外泌體在細胞間轉運KRAS蛋白,從而加速受體細胞增殖[60]。外泌體外膜蛋白參與介導腫瘤細胞的轉移傾向性。比如:乳腺癌細胞分泌的外泌體中富含整合素α6β4、α6β1 和αvβ5,分別作用于基質細胞、肺巨噬細胞和肝臟庫普佛細胞,可促進Src活化和促炎癥S100基因表達,從而促進乳腺癌細胞的肺和肝臟的傾向性轉移[61]。

外泌體轉運RNA促進腫瘤細胞的增殖和轉移。乳腺癌細胞攝取星型角質細胞,分泌含有PTEN-targeted-miRNAs的外泌體,促使PTEN表達下降,繼而引起CCL2分泌升高,CCL2招募IBA1型骨髓細胞,后者能夠促進轉移腫瘤細胞增殖和抑制凋亡,最終促使乳腺癌細胞發(fā)生腦轉移[62]。研究證明外泌體不僅可以轉運成熟的miRNA還可以促進miRNA成熟,乳腺癌細胞分泌的外泌體具有自主促進前體miRNA成熟的能力,刺激周圍非致瘤性上皮細胞形成腫瘤[63]。此外,外泌體也可轉運lncRNA,肝癌細胞通過外泌體分泌攜帶lncTUC339轉運至受體細胞,促進周圍受體細胞增殖、克隆形成等,進而促進肝癌的進展[64]。HeLa和MCF-7細胞分泌的外泌體富含有l(wèi)ncRNA（MALAT1、HOTHAI和GAS5）,它們作用于受體細胞后,可以誘導其腫瘤表型[65,66]。

外泌體轉運代謝產物促進腫瘤細胞的增殖和轉移。腫瘤成纖維細胞是大多數實體腫瘤微環(huán)境中主要的細胞成分,前列腺癌研究發(fā)現,病人組織來源的腫瘤相關成纖維細胞分泌的外泌體可以引起受體腫瘤細胞發(fā)生代謝重編程,抑制腫瘤細胞線粒體氧化磷酸化而促進糖酵解和谷氨酰胺依賴性還原羧化。進一步通過代謝組學分析發(fā)現,外泌體轉運氨基酸、脂質、三羧酸循環(huán)中間代謝產物至受體腫瘤細胞,促進其在營養(yǎng)缺乏條件下的生長[67～69]。這些研究明確了外泌體在腫瘤增殖、轉移中的作用。不斷發(fā)現新的外泌體轉運內含物在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用與分子機制,是目前腫瘤研究的熱點領域之一。

4.2 外泌體參與免疫系統(tǒng)的調節(jié)

腫瘤細胞產生的外泌體具有影響免疫系統(tǒng)從而促進腫瘤演進的作用。腫瘤細胞產生的外泌體富含CD95L、TRAIL和galectin9等分子,這些分子被受體T細胞攝取后,導致T細胞發(fā)生凋亡[70]。此外,腫瘤細胞來源的外泌體可影響抗原提呈細胞的功能,腫瘤細胞產生的外泌體富含PGE2、TGFβ、HSP72和miRNA等成分,被單核細胞攝取后,可以誘導其向骨髓來源的抑制性細胞（myeloidderived suppressor cells,MDSCs）表型轉化[71]。腫瘤細胞來源的外泌體可以阻斷樹突細胞（dendritic cell,DC）的成熟,該效應是通過TGF-β途徑實現的[72]。肺癌的相關研究報道,巨噬細胞攝取肺癌細胞分泌的含有miRNA的外泌體,靶向結合Toll樣受體mRNA并使其降解,從而減少Toll樣受體的表達,促進巨噬細胞分泌促炎癥因子,最終導致腫瘤的全身轉移[53]。大腸癌細胞分泌的外泌體中含有誘導凋亡、壞死的Fas蛋白,可以誘導受體T細胞發(fā)生凋亡[73]。研究還發(fā)現腫瘤細胞來源的外泌體轉運EGFR至巨噬細胞,誘導巨噬細胞抑制表型,具體機制是EGFR激活MEKK2,繼而磷酸化IRF3抑制IFN-Ⅰ產生,最終使得巨噬細胞抗腫瘤免疫應答減弱[74]。這些研究以外泌體為切入點,為深入探討腫瘤免疫和逃≥機制開創(chuàng)了新的視角。

4.3 外泌體參與腫瘤藥物抵抗

腫瘤藥物治療特別是靶向個體化治療是目前腫瘤治療的新手段,而了解腫瘤藥物抵抗r是提高治療療效的關鍵問題之一。近年來,隨著外泌體研究進展,人們發(fā)現外泌體參與了腫瘤藥物治療抵抗。外泌體介導發(fā)生藥物抵抗的機制主要分為3種（圖3）:第一種是腫瘤細胞通過外泌體介導藥物排出,從而降低胞內藥物濃度,誘發(fā)藥物抵抗。如:卵巢癌的藥物抵抗研究發(fā)現,順鉑抵抗的卵巢癌細胞與敏感細胞相比,外泌體的分泌量提升2.6倍,并且富含順鉑,這提示順鉑抵抗的卵巢癌細胞利用外泌體向胞外排除藥物[75]。前列腺癌細胞對docetaxel的抵抗機制研究發(fā)現,外泌體通過轉運多藥抵抗蛋白（MDR-1）至敏感腫瘤細胞,而MDR-1分子可以將藥物泵至胞外,從而發(fā)揮藥物抵抗作用[76,77]。除了抵抗細胞來源的外泌體,腫瘤微環(huán)境中間質干細胞分泌的外泌體也可作用于大腸癌細胞,通過CaM-Ks/Raf/MEK/ERK通路使外泌體高表達MDR-1、肺抵抗蛋白（LRP）,從而促進大腸癌細胞對化療藥物5-fluorouracil的抵抗[78]。

第二種機制是腫瘤細胞可以通過外泌體分泌蛋白質,中和胞外的蛋白質抗體藥物。乳腺癌細胞對HER2抗體trastuzumab抵抗的研究發(fā)現,抵抗的腫瘤細胞通過外泌體向胞外分泌HER2,HER2與抗體藥物結合,減少抗體藥物與腫瘤細胞作用的藥物濃度,從而促進乳腺癌的藥物抵抗[79]。

第三種機制是細胞之間通過外泌體交流,賦予了敏感腫瘤細胞抗藥特性。舒尼替尼抵抗是導致腎細胞癌治療失敗的重要原因,研究發(fā)現舒尼替尼抵抗的細胞產生的外泌體與敏感細胞相比表現出lncARSR高表達。進一步研究發(fā)現,外泌體可以將lncARSR傳遞至受體敏感腫瘤細胞,致使癌細胞產生舒尼替尼抵抗,具體機制是lncARSR被受體細胞攝取后,可以充當miR-34/miR-449的ceRNA,減弱miR-34/miR-449對AXL和c-MET的調控,促進細胞AXL和c-MET的表達[80]。腫瘤細胞休眠有助于其抵抗化療藥物的作用,乳腺癌細胞誘導腫瘤相關成纖維細胞釋放富含miR-222/miR223的外泌體,促進乳腺癌細胞休眠,并提升其藥物抗性[81]。

4.4 外泌體參與腫瘤的放射抵抗

電離輻射損傷細胞DNA是治療腫瘤的有效方式之一[83]。盡管放射治療方法普遍使用,但是放射抵抗一直限制著腫瘤的治療效果。最新的研究發(fā)現,外泌體促進細胞間信息交流,參與腫瘤的放射抵抗。例如在肺癌研究中,照射處理組腫瘤細胞與未照射組相比,其產生的外泌體中miR1246含量更高。采用miR1246類似物或阻斷劑處理表明,細胞外miR1246增強肺癌細胞的增殖,并產生放射抵抗;進一步螢光素酶報告基因活性實驗確定miR1246是通過抑制靶標DR5表達發(fā)揮作用[84]。乳腺癌相關研究發(fā)現,腫瘤間質細胞可以產生富含非編碼RNA的外泌體,其通過識別乳腺癌細胞膜表面模式識別受體RIG-1而激活受體細胞的STAT1抗病毒信號通路,從而使乳腺癌細胞具有放射抵抗[85]。頭頸部腫瘤的研究中,來源于照射處理細胞的外泌體增強受體細胞的放射抵抗,這可能是由于受體細胞DNA雙鏈斷裂修復增強的存活效應[78]。這些研究充分證明了外泌體介導的細胞間分子交流在腫瘤放療抵抗中的重要性。

5 總結與展望

細胞分泌產生外泌體,不僅是細胞排除物質的一種方式,更是腫瘤微環(huán)境中細胞之間交流的途徑。本文闡述了外泌體形成與分泌調節(jié)的相關機制,以及外泌體作為細胞間通訊的重要介質,參與腫瘤微環(huán)境中多種細胞之間的生物信號傳遞及腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程。

外泌體除了在腫瘤進展中發(fā)揮重要作用之外,還可作為腫瘤診斷和治療的潛在工具。通過液體活檢技術[86]在血漿、血清及腹水等人體體液中獲取外泌體,能反映其來源細胞的特征改變。Chen等[87]報道,膀胱癌患者和非癌癥患者尿液中分離出的外泌體有24個差異表達蛋白質,其中外泌體來源的腫瘤相關鈣信號轉導因子2（tumor-associated calcium signal transducer 2,TACSTD2）是一種在許多癌癥中過表達的細胞表面糖蛋白,可作為診斷膀胱癌的生物標志物,膀胱癌患者分泌的外泌體中TACSTD2水平高于對照組病例。從不同體液中分離富集外泌體及其內含物,有利于識別生物標志物的信號,是一種非侵入性的腫瘤診斷手段。而且,基于外泌體的靶向療法和抑制外泌體分泌更是一種新型治療策略,抑制外泌體分泌可阻止致癌分子轉運到腫瘤微環(huán)境,進而減少血管生成和腫瘤轉移。目前,將外泌體設計為藥物遞送載體裝載遞送治療性抗癌藥物以及將樹突細胞衍生的外泌體作為免疫療法的疫苗等研究均已進入臨床試驗。

盡管已有研究闡述了與外泌體形成分泌相關的分子,但由于該過程依賴于實驗模型以及機體的特性,同時需經歷一個多階段多層次的調控過程,因而其具體機制仍未得到闡明。鑒于目前研

圖3 外泌體參與腫瘤藥物抵抗的途徑（改編自文獻[82]）Fig.3 Exosomes involved in cancer drug resistance（Adapted from reference[82]）

究外泌體的作用機制均在體外實驗體系中完成,且細胞培養(yǎng)上清抽取與定量外泌體的實驗方法尚未得到一致的定論,因而對外泌體相關功能的研究只是模擬一個近乎體內的環(huán)境,況且個體差異性也會導致外泌體的功能呈現異質性。外泌體作為目前研究的熱門領域,其形成與分泌機制還需更進一步的深入探索,可以預期的是如果體內實驗體系應用于外泌體功能研究中,將更透徹地了解其在機體內發(fā)揮功能的形式,為腫瘤治療提供更有利的理論依據。