野生層迭靈芝馴化栽培研究初報*

張光亞，安 妮，吳建輝

(1.中華全國供銷合作總社昆明食用菌研究所，云南 昆明 650221；2.泰王國猜帕塔納基金會，泰國 曼谷 10700；3.云南物產(chǎn)進(jìn)出口集團(tuán)股份有限公司，云南 昆明 650011)

層迭靈芝Ganoderma lobatum，是靈芝科（Ganodermataceae） 靈芝屬 （Ganoderma） 的重要種之一。別名裂迭靈芝、層迭樹舌。模式種產(chǎn)地為美國。主要分布在中國、美國、泰國，國內(nèi)主要分布在云南、浙江、福建、廣東、海南、香港、河北等地[1-7]。2015年～2017年，在泰國猜帕納塔基金會清邁府芳縣基地，實(shí)施中國政府援泰國國王山地開發(fā)計劃二期技術(shù)合作項目期間，偶然發(fā)現(xiàn)1朵特大的野生層迭靈芝，結(jié)合項目中的食用菌課題，開展了人工馴化栽培研究，并獲得成功，這也引起了泰國科教部門的重視，并受到泰國王室的贊揚(yáng)和肯定?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 野生層迭靈芝發(fā)現(xiàn)的地理位置與生態(tài)環(huán)境

2015年2月23日，在基地內(nèi)小山頂侍衛(wèi)樓住房旁30 m處的一顆腐朽的闊葉樹支干上，發(fā)現(xiàn)1朵大靈芝。經(jīng)初步認(rèn)定，為靈芝科、靈芝屬的層迭靈芝（Ganoderma lobatum），與現(xiàn)在廣泛栽培的靈芝為同屬的不同種。

第2天將生長于樹林中的層迭靈芝子實(shí)體完好地采下，并將靈芝根部的腐木基質(zhì)取下裝入小塑料袋內(nèi)帶回研究。經(jīng)測量，層迭靈芝子實(shí)體生長在離地面高約1.5 m的樹木支干處，該樹生長于北緯19°57′55″，東經(jīng) 99°9′31″，海拔約 579 m 的地方。形態(tài)特征（圖1～圖5）：層迭3層，最上層子實(shí)體的芝蓋直徑為22 cm×18 cm，厚0.8 cm～1.2 cm，第二層子實(shí)體芝蓋不規(guī)則，形如人像，寬約10 cm，厚1.4 cm，第三層的子實(shí)體芝蓋直徑為16.5 cm×8.5 cm，厚1.5 cm。

圖1 層迭靈芝的生長地點(diǎn)

圖2 采下的層迭靈芝標(biāo)本

圖3 摘取層迭靈芝子實(shí)體后的枯樹

圖4 層迭靈芝子實(shí)體生長的枯樹腐木基質(zhì)

圖5 層迭靈芝生長的濃密樹林

所采集的標(biāo)本，于2015年12月2日經(jīng)中國科學(xué)院昆明植物研究所真菌分類學(xué)家楊祝良研究員鑒定為：靈芝科（Ganodermataceae） 靈芝屬（Ganoderma） 層迭靈芝，拉丁學(xué)名：Ganoderma lobatum（Schwein.）G.F.Atk.，中文名：層迭靈芝。植物鑒定證明編號：KUN-2015-185。

1.2 層迭靈芝的馴化栽培

1.2.1 菌種分離與純化

層迭靈芝是靈芝屬的1個重要種，但筆者未見其栽培成功的報道。

分離所用培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g（浸出汁）、葡萄糖20 g、瓊脂20 g，水1 000 mL，pH自然。

母種分離與純化：自2月25日起，即開始了純菌種的分離培養(yǎng)。但由于這個層迭靈芝子實(shí)體生長時間太久，已完全干縮死亡，從子實(shí)體和孢子上難以分離出菌種。唯一途徑是從腐木基質(zhì)中獲得其菌種。選擇0.5 cm～1 cm大小含有大量菌絲的腐木基質(zhì)，用升汞和酒精分別消毒后，用蒸餾水沖洗，在超凈工作柜內(nèi)移入試管PDA斜面或培養(yǎng)皿平面上，在28℃～30℃的電熱培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d～7 d，培養(yǎng)基上長出濃密的白色層迭靈芝菌絲，但也發(fā)現(xiàn)綠霉、青霉、酵母等多種雜菌的菌絲。經(jīng)過多次地挑選、分離、棄雜棄劣、純化培養(yǎng)，終于獲得了層迭靈芝的純菌種，命名為泰G1號（圖6～圖10）。

1.2.2 塑料袋馴化栽培層迭靈芝

2015年5月16日，開始用木屑袋料和椴木進(jìn)行層迭靈芝栽培試驗研究。

圖6 母種玻璃試管和325 mL小瓶培養(yǎng)基

圖7 分離純化的層迭靈芝母種

圖8 層迭靈芝325 mL玻璃瓶母種

圖9 層迭靈芝生產(chǎn)用750 mL玻璃瓶原種

圖10 長勢良好的層迭靈芝原種

木屑袋料栽培：培養(yǎng)基配方為木屑76%（1/3細(xì)木屑，2/3粗木屑）、細(xì)米糠14%、玉米粉8%、石膏1%、石灰0.5%、火山灰0.5%。聚乙烯塑料折角袋規(guī)格：短袋寬16.5 cm（扁寬），長31.5 cm，厚0.04 mm～0.05 mm，長袋扁寬 15 cm～17 cm，長 55 cm，厚0.04 mm～0.05 mm。菌棒制作流程為拌料、裝袋、滅菌、冷卻、接種、菌絲培養(yǎng)。栽培流程為發(fā)好菌的菌棒覆土、管理、采芝、干燥等（圖11）。

圖11 發(fā)菌培養(yǎng)的層迭靈芝泰G1號木屑菌棒

第1批泰G1號菌種采用細(xì)木屑短袋栽培，53 d現(xiàn)蕾。接種時打孔，菌絲生長速度快，故現(xiàn)蕾早；第2批泰G1號菌種采用細(xì)木屑短袋栽培，73 d現(xiàn)蕾；第3批泰G1號菌種采用2/3粗木屑和1/3細(xì)木屑短袋栽培，59 d現(xiàn)蕾。采用粗、細(xì)木屑比純細(xì)木屑提早14 d現(xiàn)蕾（圖12）。

層迭靈芝由試驗栽培進(jìn)入生產(chǎn)栽培時，袋栽規(guī)格由短聚乙烯折角袋栽培改為長袋栽培。栽培試驗表明，材質(zhì)致密的木屑料栽培層迭靈芝產(chǎn)量高；培養(yǎng)料中添加玉米粉所栽培層迭靈芝菌絲粗壯，長勢良好；層迭靈芝比其他大量栽培的靈芝品種適宜溫度高2℃～3℃。

1.2.3 層迭靈芝段木馴化栽培試驗

試驗樹種為芒果木、荔枝木、龍眼木、酸角木等木質(zhì)堅硬的樹種。栽培椴木的制作：采用伐木后10 d～15 d內(nèi)，直徑8 cm～10 cm的樹木，切成長15 cm的木椴，直徑15 cm以上切成長25 cm～30 cm的木椴。用兩頭開口的，厚度為0.055 mm～0.06 mm的聚乙烯塑料袋，裝入切好的木椴，兩頭用撕裂膜帶扎緊，然后裝入常壓滅菌柜內(nèi)滅菌。滅菌后溫度降至40℃以下時，在無菌狀態(tài)下進(jìn)行搶溫接種。在30℃～32℃的溫度條件下發(fā)菌培養(yǎng)。發(fā)菌培養(yǎng)80 d～95 d（具體視椴木的發(fā)菌情況而定）脫袋，然后覆土栽培（圖13～圖15）。

經(jīng)過5個批次的木屑、椴木栽培的重復(fù)試驗，均獲得大量子實(shí)體，且形狀比較穩(wěn)定。經(jīng)過馴化培

圖12 泰G1號菌種不同生長階段的子實(shí)體

圖13 剛接種的層迭靈芝泰G1號椴木菌棒

圖14 正在發(fā)菌培養(yǎng)的層迭靈芝G1椴木菌棒

圖15 培養(yǎng)好的層迭靈芝泰G1號椴木菌棒

育出的層迭靈芝子實(shí)體，幼嫩時，白邊套黑底；子實(shí)體成熟時，體態(tài)大型，剛勁有力，具有特殊的清香味，適口性強(qiáng)，頗受人們的歡迎。在試驗成功的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了上萬個菌棒的生產(chǎn)栽培研究，都取得理想的結(jié)果（圖16～圖19）。

圖16 椴木栽培的層迭靈芝子實(shí)體

圖17 椴木栽培的層迭靈芝子實(shí)體

圖18 科技示范苑椴木栽培層迭靈芝

圖19 科技示范苑代料栽培層迭靈芝

2 層迭靈芝泰G1號品種成分的檢測分析結(jié)果

2.1 泰國瑪希隆大學(xué)藥學(xué)學(xué)院商品質(zhì)量檢測中心的測試結(jié)果

泰國瑪希隆大學(xué)藥學(xué)學(xué)院商品質(zhì)量檢測中心的檢測報告見圖20。

圖20 泰國瑪希隆大學(xué)藥學(xué)學(xué)院商品質(zhì)量檢測中心的檢測報告

圖20結(jié)果表明，靈芝三萜含量為（0.8±0.01） % （w·w-1，n＝3，RSD＝0.79%）；靈芝多糖含量為 （1.4±0.01） % （w·w-1，n＝3，RSD＝0.83%）。樣品編號為H59-208，報告編號為RH59-105，檢測日期為2016年8月29日，送檢單位為援泰國國王山地開發(fā)計劃二期技術(shù)合作項目。

2.2 上海市農(nóng)科院食用菌研究所測試結(jié)果

2.2.1 靈芝三萜含量

靈芝三萜指紋圖譜見圖21。

測試結(jié)果表明，三萜含量為5.32%。

2.2.2 靈芝多糖含量

測試結(jié)果表明，靈芝多糖含量2.39%。中國藥典規(guī)定靈芝產(chǎn)品的多糖含量不得低于0.5%。

2.2.3 核苷

層迭靈芝核苷的指紋圖譜見圖22。層迭靈芝核苷種類和含量與其他靈芝品種相差較大。核苷的具體含量見表1。

由圖22和表1可以看出，層迭靈芝核苷中含有尿嘌呤、胞苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、尿苷、鳥苷、胸苷和腺苷等11種成分；而赤芝中僅含有尿嘧啶、次黃嘌呤、黃嘌呤、尿苷和腺嘌呤等5種成分。層迭靈芝中核苷含量除黃嘌呤（0.027 μg·mg-）1稍低于赤芝 （0.046 μg·mg-）1外，其余各核苷酸含量均遠(yuǎn)高于赤芝。

2.2.4 層迭靈芝與其他靈芝品種三萜含量比較

圖21 靈芝三萜的指紋圖譜

圖22 層迭靈芝的核苷的指紋圖譜

表1 核苷含量測定結(jié)果

比較結(jié)果顯示，江蘇野生赤芝三萜含量為0.343%，RSD為1.240%；廣東段木栽培赤芝三萜含量為0.258%，RSD為0.821%；福建段木栽培赤芝三萜含量為0.135%，RSD為2.050%；福建段木栽培松杉靈芝三萜含量為0.237%，RSD為1.790%。

3 層迭靈芝

3.1 袋料栽培的子實(shí)體類似樹舌或無柄靈芝

袋料木屑栽培的層迭靈芝子實(shí)體，與層迭靈芝野生子實(shí)體的形象差異較大，無層迭特征，初看上去以為是樹舌或無柄靈芝。

3.2 椴木栽培的子實(shí)體具有野生層迭靈芝子實(shí)體的特征

椴木栽培的層迭靈芝子實(shí)體完全具有野生層迭靈芝子實(shí)體分層的形態(tài)，子實(shí)體大型具體見圖23，椴木栽培的子實(shí)體比代料栽培的子實(shí)體大得多，其子實(shí)體的直徑超過25 cm。

3.3 化學(xué)成分與其他靈芝品種差異極大

圖23 椴木栽培具有層疊特征的層迭靈芝子實(shí)體

據(jù)劉偉[9]研究顯示，與赤芝比較，層迭靈芝中三萜類化合物種類比赤芝少，但中等極性三萜類化合物的含量比赤芝高，糖醇、核苷、蛋白質(zhì)和氨基酸含量比赤芝豐富，赤芝中多糖含量為（2.67±0.06） %，層迭靈芝中多糖含量為（3.60±0.10） %；赤芝的蛋白質(zhì)含量為8.97%，層迭靈芝的蛋白質(zhì)含量為15.2%，是赤芝的1.7倍；赤芝中核苷含量除黃嘌呤稍高于層迭靈芝外，其余各核苷含量均遠(yuǎn)低于層迭靈芝。赤芝必需氨基酸含量為（4.83±0.20）μg·g-1，層迭靈芝必需氨基酸含量為 （9.44±0.21）μg·g-1；赤芝氨基酸總含量為 （0.273±0.02） μg·g-1，層迭靈芝氨基酸總含量為 （0.448±0.01） μg·g-1。特別是從層迭靈芝中分離到6個三萜類化合物，其中樹舌環(huán)氧酸E和G的抗腫瘤效果較好[9]。

4 結(jié)果與討論

4.1 層迭靈芝泰G1號經(jīng)濟(jì)價值和研究價值顯著

目前，關(guān)于層迭靈芝的栽培和產(chǎn)品開發(fā)研究報道較少。層迭靈芝泰G1號與靈芝其他品種，既有很大的相似性，又有很大的差異性，因此在開發(fā)利用中有較大的互補(bǔ)性。層迭靈芝泰G1號品種，在生產(chǎn)栽培中表現(xiàn)出比靈芝其他品種更耐高溫、抗逆性更強(qiáng)以及內(nèi)含物豐富獨(dú)特的特點(diǎn)，值得引起重視和進(jìn)一步研究。

4.2 層迭靈芝泰G1號的馴化栽培研究，展示出食用菌產(chǎn)業(yè)在國家戰(zhàn)略“一帶一路”中的廣闊前景

中國政府援泰國國王山地開發(fā)計劃二期技術(shù)合作項目，實(shí)質(zhì)上就是山區(qū)的扶貧脫貧計劃，就是“一帶一路”戰(zhàn)略的一個具體行動，受到了泰國山區(qū)農(nóng)民的熱烈歡迎和泰國政府的高度重視。2016年9月14日泰國詩琳通公主視察該項目的食用菌科技示范苑時，表現(xiàn)出了極大的興趣，她說：“非常好，泰中雙方要長期合作”，并為項目題詞“科技促民富”。

圖24 詩琳通公主視察食用菌示范苑