活化誘導(dǎo)胞嘧啶核苷酸脫氨酶對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞表型的影響

李 琦，馬 哲，周治彥，吳遙西，陳金火，金應(yīng)霞，宋 鵬，程 帆，李浩勇，，梁培育

(1.海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院泌尿外科，海南?？?570102；2.武漢大學(xué)人民醫(yī)院泌尿外科，湖北武漢 430060；3.武漢大學(xué)人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，湖北武漢 430060)

活化誘導(dǎo)胞嘧啶核苷酸脫氨酶(activation-induced cytosine deaminase，AID)是脫氨酶家族的一員，具有通過其突變活性介導(dǎo)人體抗體多樣性的功能,研究發(fā)現(xiàn)在胃癌和皮膚癌細(xì)胞中也檢測(cè)到了AID的表達(dá),AID可以通過類別轉(zhuǎn)換重組(class switch recombination，CSR)、體細(xì)胞高頻突變(somatic hypermutation，SHM)等特性介導(dǎo)多種原癌以及抑癌基因發(fā)生突變[1-2]。本研究旨在探討AID在膀胱癌組織中的表達(dá)以及抑制其表達(dá)對(duì)膀胱癌細(xì)胞株T24在增殖、遷移、侵襲以及凋亡方面的影響。

1 材料與方法

1.1組織樣本臨床標(biāo)本來自武漢大學(xué)人民醫(yī)院病理科2016年6月至2017年2月收集的16例根治性膀胱全切術(shù)的膀胱組織。標(biāo)本切除后迅速分別放入多聚甲醛固定液或液氮中，分別用于免疫組化和蛋白質(zhì)印跡法(Western bolt)實(shí)驗(yàn)。

1.2細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)T24細(xì)胞購買自武漢普諾賽生命科技有限公司。實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞(轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染的T24細(xì)胞)均置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中(5% CO2、37℃環(huán)境下)，使用含10%胎牛血清和1%雙抗(青霉素、鏈霉素)的細(xì)胞凍存培養(yǎng)基(RPMI)1 640培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。所用細(xì)胞在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)致70%～80%融合度時(shí)用胰酶消化并收集用于相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

1.3細(xì)胞轉(zhuǎn)染及單克隆細(xì)胞的篩選將T24細(xì)胞以5×104/孔接種于6孔板，分為shAICDA-T24組和陰性對(duì)照組(negative control-T24,NC-T24)，細(xì)胞貼壁后將LV-AICDA -RNAi或Negative scrambled(無義序列)慢病毒溶液(30 μL/孔)、Polybrene(聚凝胺溶液)(0.5 μL/孔)分別加入shAICDA組和NC組進(jìn)行轉(zhuǎn)染，18 h后更換1 640完全培養(yǎng)基繼續(xù)轉(zhuǎn)染至72 h，使用熒光倒置顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染情況。從轉(zhuǎn)染后的T24細(xì)胞中隨機(jī)選取100個(gè)細(xì)胞利用含20%胎牛血清的RPMI 1 640培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，20 d后當(dāng)出現(xiàn)肉眼可見的細(xì)胞簇后，用熒光倒置顯微鏡進(jìn)行觀察，選取帶有綠色熒光的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至24孔板中分別進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到90%融合度時(shí)，轉(zhuǎn)移至6孔板進(jìn)行培養(yǎng)。以備后用。

1.4蛋白質(zhì)提取以及WesternBolt試驗(yàn)隨機(jī)選取12例樣本中6例黏膜層加入適量提取液(合適比例的放射免疫沉淀試驗(yàn)(radio immuno precipitation assay，RIPA)裂解液、苯甲基磺酰氟(phenylmethylsulfonyl fluoride，PMSF)、PhosSTOP(磷酸酶抑制劑混合物)于液氮中進(jìn)行研磨，充分裂解后于冰上進(jìn)行超聲碎蛋白，隨后置于離心機(jī)，在4℃，12 000 r/min條件下離心15 min，取上清，使用酶標(biāo)儀進(jìn)行濃度測(cè)定，按4∶1比例加入5×上樣緩沖液，100℃煮蛋白10 min，冷卻后放入-80℃冰箱保存，待用；細(xì)胞蛋白提取與上述過程基本相同，胰酶消化細(xì)胞3 min，終止消化，1 000 r/min離心5 min，棄上清，磷酸緩沖液(phosphate buffer saline，PBS)洗滌2遍，加入適量提取液(合適比例的RIPA裂解液、PMSF、PhosSTOP)，后步驟與組織蛋白提取相同。取100 μg蛋白樣品(樣品來源：組織、shAICDA-T24、NC-T24或T24)經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，轉(zhuǎn)膜1.5 h、封閉2 h，按抗體說明書稀釋一抗，4℃孵育過夜，洗膜后加入1∶15 000稀釋倍數(shù)的對(duì)應(yīng)熒光二抗室溫孵育2 h。用Licor dyssey(奧德賽)雙通道紅外成像系統(tǒng)(美國Li-COR公司)檢測(cè)雜交信號(hào),用image J軟件分析AID與β-Actin(肌動(dòng)蛋白)的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果重復(fù)3次，取平均值。

1.5免疫組織化學(xué)染色委托武漢大學(xué)人民醫(yī)院病理科對(duì)所取得的12例臨床樣本中的6例進(jìn)行包埋切片。然后進(jìn)行脫蠟和水化，PBS洗滌后進(jìn)行抗原修復(fù)，切片冷卻至室溫后PBS洗滌2遍，每次5min。加3% H2O2進(jìn)行過氧化物酶滅活，PBS洗滌2遍，封閉液室溫封閉15 min，滴加一抗，4℃過夜。PBS洗滌3遍，室溫孵育二抗30 min。滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素(PBS稀釋)，37℃孵育10～30 min，PBS洗滌3遍，滴加DAB(辣根過氧化物酶顯色試劑盒)顯色劑顯色。自來水充分沖洗、復(fù)染、封片、正置顯微鏡觀察拍照。

1.6實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞株增殖能力(cellcountingkit-8，CCK-8) 胰酶消化并收集shAICDA-T24、NC-T24以及T24細(xì)胞，以每孔5 000個(gè)細(xì)胞接種至96孔板中，每組細(xì)胞設(shè)3個(gè)副孔，以細(xì)胞貼壁時(shí)間設(shè)為0 h，分別取24、48、72 h為檢測(cè)點(diǎn)。檢測(cè)前，每孔分別加入CCK-8試劑(10 μL/孔)，置于37 ℃恒溫箱反應(yīng)1.5 h后，用PerkinElmer Victor31420 Multilabel Counter酶標(biāo)儀(美國PerkinElmer公司)檢測(cè)各孔在450～490 nm處吸光度(A)，取平均值以平均A值表示細(xì)胞增殖數(shù)量，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.7流式細(xì)胞數(shù)檢測(cè)細(xì)胞株凋亡胰酶消化細(xì)胞并用PBS洗滌兩遍，離心后用1×的BindingBuffer(結(jié)合緩沖液)重懸，稀釋至1×106/ mL，取100 μL(1×105個(gè)細(xì)胞/樣品)懸液移至5 mL的培養(yǎng)管中，分別加入5 μL的PE Annexin V和7-AAD染液，柔和震蕩培養(yǎng)管，避光25℃孵育15 min，孵育結(jié)束后每管加1×的Binding Buffer 400 μL，隨后用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.8劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞株遷移能力將shAICDA-T24、NC-T24和T24細(xì)胞接種于6孔板中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后生長(zhǎng)至大于80%時(shí)，更換無血清培養(yǎng)基饑餓24 h，然后于孔板中央進(jìn)行劃痕，PBS洗去劃下細(xì)胞后繼續(xù)加入RPMI-1 640無血清培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，于0 h和24 h利用倒置顯微鏡拍照，并用image J軟件進(jìn)行遷移細(xì)胞分析痕道修復(fù)率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)3次。

1.9Transwell(細(xì)胞小室實(shí)驗(yàn))檢測(cè)細(xì)胞株侵襲能力將BD Matrixgel基質(zhì)膠與無血清培養(yǎng)基按1∶8稀釋，混合均勻后加入置于24孔板中的Transwell小室中，每個(gè)小室加混合液100 μL，溫箱放置2 h，于放置小室的孔板中加入含2%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基600 μL，將用無血清RPMI-1640培養(yǎng)基稀釋的shAICDA-T24、NC-AICDA以及T24細(xì)胞按組別加入小室中，每組細(xì)胞設(shè)3個(gè)副孔。24 h后，每個(gè)小室經(jīng)過PBS洗滌、多聚甲醛固定、蘇木素染色、洗滌、風(fēng)干后，使用倒置顯微鏡對(duì)小室底部進(jìn)行拍照，對(duì)每組細(xì)胞隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)算平均值，進(jìn)行組間對(duì)比。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2 結(jié) 果

2.1AID在膀胱癌以及癌旁正常組織的表達(dá)通過Western bolt和免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AID在膀胱癌以及癌旁組織中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，在膀胱癌組織中，AID的表達(dá)量顯著高于癌旁組織，并且在收集的12例臨床樣本中，均檢測(cè)到了AID的表達(dá)(6例用于Western bolt，6例用于免疫組化)，除此之外，癌旁組織中則幾乎不存在AID的表達(dá)。其中，在Western bolt中，膀胱癌組織中AID的相對(duì)表達(dá)量為0.98±0.19，而癌旁組織中AID表達(dá)量平均值為0.16±0.05(圖1A、B)，組間差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在免疫組化實(shí)驗(yàn)中(圖1 C)，由于單純計(jì)算陽性區(qū)域面積會(huì)忽略染色強(qiáng)度對(duì)結(jié)果的影響，所以我們使用Image Pro Plus對(duì)圖片陽性染色部分進(jìn)行平均吸光度值檢測(cè)(圖1D)，其中癌組織的平均吸光度值為0.668±0.085，而癌旁組織的平均吸光度值為0.167±0.046，組間差異顯著(P<0.05)，并且根據(jù)染色情況可以看出AID主要表達(dá)于癌變的尿路上皮細(xì)胞。

圖1AID在膀胱癌及癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)

A、B：Western bolt條帶圖及其柱狀圖(膀胱癌組織AID表達(dá)量顯著高于癌旁組織，*P<0.05)；C：免疫組織化學(xué)染色結(jié)果(×200)(藍(lán)染部分為細(xì)胞核，褐染部分為目的蛋白。膀胱癌組織的陽性染色面積及染色強(qiáng)度均顯著高于癌旁組織，*P<0.05)；D：整體樣本的吸光度值對(duì)比(*P<0.05)。

2.2轉(zhuǎn)染后AID的表達(dá)以設(shè)計(jì)的shRNA序列通過慢病毒為載體對(duì)T24細(xì)胞中AID的表達(dá)進(jìn)行抑制(圖 2A)，因之后進(jìn)行了單克隆細(xì)胞的篩選，能夠高效抑制AID的表達(dá)，所以并未對(duì)轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。其中shAICDA-T24為實(shí)驗(yàn)組，NC-T24為陰性對(duì)照組，T24細(xì)胞為空白對(duì)照組，分別對(duì)3個(gè)組別的細(xì)胞通過Western bolt(圖2B、C)進(jìn)行AID表達(dá)量的檢測(cè)。在Western bolt中，實(shí)驗(yàn)組中AID表達(dá)水平相對(duì)于陰性對(duì)照組下降約27%，相對(duì)于空白對(duì)照組下降約35%，其中空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，而實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。隨后，我們對(duì)多克隆轉(zhuǎn)染的T24細(xì)胞進(jìn)行多克隆篩選，其中克隆4中AID的表達(dá)水平相對(duì)于其他單克隆組下降幅度最為顯著(圖2 D、E)，相對(duì)于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組，克隆4中的AID表達(dá)水平分別下降約73%和78%(P<0.05)。因此，我們選取克隆4作為實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞(shAICDA-T24)進(jìn)行隨后的實(shí)驗(yàn)。

圖2Westernbolt檢測(cè)RANi抑制T24細(xì)胞前后AID的相對(duì)表達(dá)量及進(jìn)行單克隆細(xì)胞的篩選

A：熒光倒置顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞情況(綠色熒光為被慢病毒感染的細(xì)胞，×100);B、C：蛋白質(zhì)水平檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后T24細(xì)胞中AID的相對(duì)表達(dá)量及其柱狀圖(RANi抑制后T24細(xì)胞中AID的表達(dá)量顯著降低,*P<0.01);D、E：篩選單克隆細(xì)胞株檢測(cè)AID的相對(duì)表達(dá)量及其柱狀圖(*P<0.01)。

2.3AID對(duì)膀胱癌細(xì)胞株(T24)增殖和凋亡的影響通過CCK-8實(shí)驗(yàn)分別于0、24、48、72 h通過酶標(biāo)儀檢測(cè)3組細(xì)胞于450 nm波長(zhǎng)處的A值，比較轉(zhuǎn)染前后各組細(xì)胞的增殖情況(圖3A、B)。3組細(xì)胞在0 h吸光度無差異性(P>0.05),而在24、48、72 h處，NC組與空白對(duì)照組增殖情況相同(P>0.05),但實(shí)驗(yàn)組與NC組差異性顯著(P<0.05)。表1為3組細(xì)胞于4個(gè)檢測(cè)點(diǎn)處增殖情況的具體信息。根據(jù)此實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們認(rèn)為，抑制AID的表達(dá)導(dǎo)致T24細(xì)胞增殖能力的下降。隨后我們利用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)T24、NC-T24和shAICDA-T24三組細(xì)胞的凋亡率進(jìn)行檢測(cè)(圖3C)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在早期凋亡、晚期凋亡以及總體凋亡率方面，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞均顯著高于空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組(P<0.05),并且凋亡主要集中在晚期。

表1 T24組、NC-T24組和shAICDA-T24組的A值變化

2.4AID對(duì)膀胱癌細(xì)胞株(T24)遷移以及侵襲的影響根據(jù)近期關(guān)于AID的文獻(xiàn)報(bào)道，AID可增強(qiáng)人類乳腺癌細(xì)胞ZR75.1上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)相關(guān)蛋白的表達(dá)量，從而促進(jìn)了腫瘤的侵襲性。由此我們推測(cè)，在膀胱腫瘤中，AID可能也起到了同樣的作用。因此，我們通過劃痕以及Transwell實(shí)驗(yàn)來探索AID對(duì)膀胱癌細(xì)胞株(T24)遷移以及侵襲性的影響。在劃痕實(shí)驗(yàn)中(圖4A、B)，shAICDA-T24組的傷口愈合率顯著低于空白對(duì)照組以及NC組，而空白對(duì)照組和NC的修復(fù)率無明顯差異；而在Transwell實(shí)驗(yàn)中，在鏡下可以清晰的觀察到空白對(duì)照組穿過小室底膜的細(xì)胞數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于實(shí)驗(yàn)組(圖4C、D)。由此可以推斷，AID促進(jìn)了膀胱癌遷移和侵襲的能力。

圖3轉(zhuǎn)染后3組T24細(xì)胞的增殖以及凋亡情況

A：增殖[與T24細(xì)胞組和NC組相比，轉(zhuǎn)染后T24細(xì)胞增長(zhǎng)明顯減慢(P<0.05)]；B：3組細(xì)胞在0 h以及24、48、72 h處的A值對(duì)比(在3個(gè)檢測(cè)點(diǎn)處，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞A值明顯低于空白組以及NC組，*P<0.05；并且空白組和實(shí)驗(yàn)組之間不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性，P>0.05)；C：T24、NC-T24和shAICDA-T24的早期、晚期以及總體凋亡(早凋+晚凋)情況(空白對(duì)照組與陰性對(duì)照組不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P>0.05；而實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，*P<0.05)。

圖4 顯微鏡下的痕道修復(fù)和細(xì)胞穿透情況以及兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中3組細(xì)胞差異性對(duì)比

A、B： 在劃痕試驗(yàn)中痕道修復(fù)(×100)及其柱狀圖，空白對(duì)照組的傷口愈合率為(66.4±2.9)%，NC組的修復(fù)率為(63.5±2.7)%，shAICDA-T24組的修復(fù)率為(25.3±2.7)%。其中，空白對(duì)照組及NC組均與shAICDA-T24組存在顯著差異(*P<0.05)。C、D：不同放大倍數(shù)(×100、×400)下觀察細(xì)胞侵襲情況及其柱狀圖。3組細(xì)胞分別隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)(×400)，并取平均值做柱狀圖?？瞻讓?duì)照組細(xì)胞數(shù)為(47.7±4.5)，NC組細(xì)胞數(shù)為46.7±6.5，而實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)為15±2.9。其中，空白對(duì)照組及NC組均與shAICDA-T24組之間差異顯著(*P<0.05)。

3 討 論

AID是脫氨酶家族的一員，其功能涉及DNA/RNA的編輯[3]，與基因誘導(dǎo)突變顯著相關(guān)，它能將脫氧胞嘧啶轉(zhuǎn)化成脫氧尿嘧啶，從而能夠通過修改靶基因的序列而產(chǎn)生對(duì)人體各種有利的作用和效應(yīng)[4]。其主要功能是啟動(dòng)人體第二抗體多樣化的進(jìn)程[5]。在獲得性免疫應(yīng)答過程中，點(diǎn)突變?cè)诿庖咔虻鞍谆虻闹劓溑c輕鏈的可變區(qū)累積，最終增加了免疫球蛋白抗原結(jié)合區(qū)的可變性和抗原-抗體反應(yīng)的親和力[6]，所以，AID是人類免疫系統(tǒng)最重要的因子之一。然而，AID同樣具有誘導(dǎo)人類核酸修改和雙鏈DNA斷裂的作用[7]，與AID在免疫系統(tǒng)中對(duì)機(jī)體良好的有利作用相比，AID的過度表達(dá)可能會(huì)影響腫瘤相關(guān)基因(原癌基因、抑癌基因)表達(dá)的改變。去甲基化是AID近年來被發(fā)現(xiàn)的另外一個(gè)特征[5-8]，有研究證實(shí)，當(dāng)AID與CpG島的甲基化位點(diǎn)持續(xù)相互作用時(shí)，則會(huì)導(dǎo)致濾泡性淋巴瘤的惡化[9]。KITAMURA等[10]對(duì)AID轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小鼠體內(nèi)AID的表達(dá)總是能導(dǎo)致肺形態(tài)學(xué)損傷，這種損傷與人體的不典型腺瘤增生(atypical adenomatous hyperplasia，AAH)類似，這種增生是細(xì)支氣管肺泡癌的癌前病變。從肺泡表面活性蛋白來判斷，與人類AAH類似，小鼠AAH樣損傷導(dǎo)致了肺泡的分化，在電子顯微鏡下，小鼠AAH樣損傷顯著具有黏液細(xì)胞的特征，即發(fā)生了細(xì)胞化生。MUNOZ等[11]據(jù)此利用人類乳腺癌細(xì)胞ZR75.1進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)通過抑制AID的表達(dá)，人類乳腺癌細(xì)胞ZR75.1的EMT相關(guān)蛋白表達(dá)量發(fā)生了顯著降低。并且還有學(xué)者提出，AID可能通過抗原漂移從而使腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸[12]。以上學(xué)者研究均證實(shí)，AID通過其致突變活性具有導(dǎo)致惡性疾病發(fā)生和發(fā)展的潛能。

在本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，AID同樣表達(dá)于膀胱癌組織，而在癌旁組織中，卻很難檢測(cè)到AID的表達(dá)。在對(duì)人類膀胱癌細(xì)胞株(T24)的檢測(cè)中也發(fā)現(xiàn)了AID的表達(dá)。通過抑制AID的表達(dá)后，T24細(xì)胞增殖能力顯著降低，而在劃痕實(shí)驗(yàn)以及Transwell實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于NC組，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的遷移以及侵襲能力同樣受到了明顯的抑制。由此我們推測(cè)在膀胱癌中AID同樣也發(fā)揮了其促進(jìn)惡性疾病進(jìn)展的功能。在前期課題中我們發(fā)現(xiàn)，人類免疫球蛋白G(immunoglobulin G，IgG)具有促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞增殖并且抑制其凋亡的作用[13]，但目前仍沒有研究表明IgG表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。而如上文所述，AID啟動(dòng)了人類第二抗體多樣化的進(jìn)程，通過CRS可導(dǎo)致不同免疫球蛋白的相互轉(zhuǎn)換[14]。BCR信號(hào)與TLR信號(hào)協(xié)同作用可以通過NF-κB通路來誘導(dǎo)AID和CSR[15]。用抗CD79a的單克隆抗體(monoclonal antibody,mAb)阻斷BCR后，AID的表達(dá)量明顯下降，CRS介導(dǎo)產(chǎn)生的IgG1也隨之減少，尤其是分泌型免疫球蛋白G1(secretion IgG1，sIgG1)[16]。綜合本次研究的發(fā)現(xiàn)和前期課題的結(jié)果我們推測(cè)在尿路上皮細(xì)胞內(nèi)AID可能通過激活重組激活基因-1(recombination activating gene 1,RAG-1)編輯調(diào)控IgG1基因過程中而促進(jìn)膀胱腫瘤的進(jìn)展[17]。

綜上所述，AID在免疫系統(tǒng)中的作用已相對(duì)明朗，但是在腫瘤領(lǐng)域中，對(duì)AID的研究目前還處于初期階段，具體生物學(xué)效應(yīng)和作用機(jī)制尚不明確。本研究結(jié)果表明，AID在膀胱癌中具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖及侵襲的作用，可能是臨床治療膀胱癌的潛在靶點(diǎn)，在今后的研究中我們將針對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行更為深入的研究，旨在為膀胱癌的臨床治療提供新的依據(jù)。