探討急性白血病患者骨髓液中血管緊張素-Ⅱ的表達(dá)及意義

倪文娟 張冬霞 劉學(xué)文 卓立霞 云雁 馮于 馬莉芳

腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是機體內(nèi)重要的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng), Ang-Ⅱ作為該系統(tǒng)重要的效應(yīng)分子, 其與兩個受體分子血管緊張素Ⅰ型(AT1R)受體和2型受體(AT2R)相互作用產(chǎn)生生物學(xué)作用［1］。研究發(fā)現(xiàn)Ang-Ⅱ能促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞生長［2］。相關(guān)研究表明, RAS與腫瘤有密切關(guān)系, 在乳腺癌、胰腺癌等腫瘤中均存在ATIR過表達(dá), 而ATIR拮抗劑治療能抑制腫瘤的生長［3］；AL患者的骨髓伴著血管新生情況,這預(yù)示著AL患者具體發(fā)病過程中血管新生充當(dāng)重要角色,且作用不容小覷, 其會受到很多種類細(xì)胞因子所調(diào)控、影響,其中Ang-Ⅱ、受體Tie-2都會對新生的腫瘤血管起到調(diào)節(jié)作用, 比如穩(wěn)定、成熟、重建。本研究將證實Ang-Ⅱ在AL患者中的表達(dá)及重要意義, 報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院血液內(nèi)科2015年1月～2017年12月收治的60例AL患者作為觀察組, 包括30例AML初發(fā)未治患者和30例ALL初發(fā)未治患者；另選取同期60例缺鐵性貧血患者作為對照組。觀察組患者男37例, 女23例, 年齡最大72歲, 最小6歲,中位年齡36歲；所有患者均得到臨床特點與形態(tài)學(xué)和細(xì)胞化學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)證實, 骨髓液中病理細(xì)胞≥80%, 診斷標(biāo)準(zhǔn)參照AML WHO分型(2001)/FAB分類法和WHO對ALL分型的修訂(2001), 且均排除合并心、肝、腎功能異常者, 感染、其他惡性腫瘤、自身免疫性疾病者。對照組患者男28例, 女32例, 年齡最大 50歲, 最小年齡18歲, 中位年齡35歲；排除腫瘤、肝腎疾病、免疫系統(tǒng)疾病、糖尿病、心血管疾病、其他血液系統(tǒng)類的疾病。兩組患者性別、年齡等一般資料比較一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。見表1。

表1 兩組患者一般資料比較(n,

表1 兩組患者一般資料比較(n,

注：兩組比較, P＞0.05；1mm Hg=0.133 kPa

項目 對照組(n=60) 觀察組(n=60)性別(男/女) 28/32 37/23年齡(歲) 35.30±7.01 36.63±6.87體重(kg) 67.02±8.85 66.38±10.60體質(zhì)量指數(shù)(kg/m2) 24.64±2.90 24.27±3.07收縮壓(mm Hg) 127.58±7.93 128.63±8.37舒張壓(mm Hg) 80.32±4.90 81.16±6.64身高(m) 1.65±0.07 1.65±0.08

1.2 方法 采用ELISA測定兩組患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量。選取髂后上棘為穿刺點, 抽吸0.2、4 ml骨髓液2管,0.2 ml用于制片7張, 送檢細(xì)胞形態(tài)學(xué)及細(xì)胞化學(xué)染色檢查, 4 ml用5%乙二胺四乙酸(EDTA)干粉管抗凝, 室溫靜置30 min, 2000 r/min離心10 min分離骨髓液和細(xì)胞, 骨髓液用ELISA(試劑盒購自美國R＆D System公司)檢測骨髓液Ang-Ⅱ含量情況, 一定要嚴(yán)格依據(jù)試劑盒上的說明書正確規(guī)范的操作, 對450 nm吸光度(A)數(shù)值科學(xué)的測定, 同時依據(jù)ELISA實驗最后得出的標(biāo)準(zhǔn)品相關(guān)A值以及濃度, 選擇“CurveExpert 1.3”實現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的規(guī)整繪制, 最后依照血清樣本所得OD值依次將Ang-Ⅱ具體濃度計算出來。所有AL患者均采用國家標(biāo)準(zhǔn)方案化療進(jìn)行治療。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 比較AML初發(fā)未治患者、ALL初發(fā)未治患者及缺鐵性貧血患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量。觀察AL患者的治療效果, 參考文獻(xiàn)［4］分為緩解、未緩解及死亡。比較化療后緩解患者和化療后未緩解患者的Ang-Ⅱ含量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SBPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。p＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AML初發(fā)未治患者、ALL初發(fā)未治患者及缺鐵性貧血患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量比較 AML初發(fā)未治患者骨髓中Ang-Ⅱ含量(24.70±5.02)ng/ml明顯高于ALL初發(fā)未治患者的(15.34±3.26)ng/ml及缺鐵性貧血患者的(6.54±3.54)ng/ml,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)；ALL初發(fā)未治患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量(15.34±3.26)ng/ml明顯高于缺鐵性貧血患者的(6.54±3.54)ng/ml, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (p＜0.01)。見表 2。

表2 AML初發(fā)未治患者、ALL初發(fā)未治患者及缺鐵性貧血患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量比較(, ng/ml)

表2 AML初發(fā)未治患者、ALL初發(fā)未治患者及缺鐵性貧血患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量比較(, ng/ml)

注：與AML初發(fā)未治患者比較, ap＜0.01；與ALL初發(fā)未治患者比較, bp＜0.01

類型 例數(shù) Ang-ⅡAML初發(fā)未治患者 30 24.70±5.02 ALL初發(fā)未治患者 30 15.34±3.26a缺鐵性貧血患者 60 6.54±3.54ab

2.2 AL患者的治療效果及化療后緩解患者和化療后未緩解患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量比較 AL患者中化療后緩解患者44例, 化療后未緩解患者10例, 早期因感染、出血等原因死亡患者6例?；熀缶徑饣颊吖撬枰褐蠥ng-Ⅱ含量(11.70±5.02)ng/ml低于化療后未緩解患者的(28.30±3.12)ng/ml, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。見表3。

表3 化療后緩解患者和化療后未緩解患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量比較( ng/ml)

表3 化療后緩解患者和化療后未緩解患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量比較( ng/ml)

注：與化療后未緩解患者比較, ap＜0.01

類型 例數(shù) Ang-Ⅱ化療后緩解患者 44 11.70±5.02a化療后未緩解患者 10 28.30±3.12

3 討論

血管新生指的是基于原有血管能夠有序且高度形成新血管的一個過程。多次進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)：如果白血病患者的骨髓微血管在密度上呈現(xiàn)出增加情況, 說明白血病的產(chǎn)生是和血管出現(xiàn)新生有直接關(guān)系, 其會受到很多種細(xì)胞因子控制與調(diào)節(jié), Ang-Ⅱ通過與特異的Ang-Ⅱ受體結(jié)合, 在腫瘤血管新生中具有調(diào)節(jié)血管穩(wěn)定、成熟和重建的作用。研究證實［4］,Ang-Ⅱ受體1型表達(dá)于大鼠骨髓基質(zhì)的CD34+以及造血系統(tǒng)中時, Ang-Ⅱ是能夠經(jīng)對CD34+細(xì)胞表面上的AT1R進(jìn)行激活方式, 對造血干細(xì)胞到達(dá)紅系祖細(xì)胞、髓系祖細(xì)胞進(jìn)行增殖乃至分化過程達(dá)到調(diào)節(jié)目的。Hou等［5］研究過程中發(fā)現(xiàn)Ang-Ⅱ在AL骨髓單個核細(xì)胞表面呈現(xiàn)出高表達(dá)情況。Loges［6］用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法檢測了90例AML初發(fā)患者外周血單個核細(xì)胞的Ang-ⅡmRNA表達(dá)水平, 發(fā)現(xiàn)高表達(dá)Ang-ⅡmRNA組預(yù)后好；Schliemann等［7］進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn), 初期治療的AML患者呈現(xiàn)血清高表達(dá)Ang-Ⅱ情況, 且存在很短的生存期以及預(yù)后差不足, 屬于AML產(chǎn)生的獨立因素、影響預(yù)后結(jié)局；Lee等［8］選擇ELISA測定方法, 針對AML患者(n=52)在化療前的骨髓水平、血管生成臨床有關(guān)分子給予檢測, 最終結(jié)果呈現(xiàn)出Ang-Ⅱ、Tie-2水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高出正常群體的對照組水平。本研究結(jié)果顯示, AML初發(fā)未治患者骨髓中Ang-Ⅱ含量明顯高于ALL初發(fā)未治患者及缺鐵性貧血患者, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)；ALL初發(fā)未治患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量明顯高于缺鐵性貧血患者, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。AL患者化療后緩解患者44例, 化療后未緩解患者10例, 早期因感染、出血等原因死亡患者6例?；熀缶徑饣颊吖撬枰褐蠥ng-Ⅱ含量低于化療后未緩解患者, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。

綜上所述, Ang-Ⅱ是最近幾年才發(fā)現(xiàn)對血管增生擁有調(diào)節(jié)作用效果, 和白血病細(xì)胞增殖生長、血管生成都存在密切重要聯(lián)系, 其中血清Ang水平能夠反饋出體內(nèi)白血病細(xì)胞實際總負(fù)荷情況以及病情狀態(tài)等。由于深入研究Ang/Tie基因、有關(guān)蛋白等, 很有可能運用基因調(diào)控、特異性抗體等作用于Ang乃至受體來實現(xiàn), Ang-Ⅱ可能成為診斷及治療白血病的新觀察指標(biāo)。