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    胰腺癌患者自噬標(biāo)記蛋白Beclin-1和P62的表達及其相關(guān)性

    2018-11-28 11:48:24朱曉東張春麗
    實用癌癥雜志 2018年11期
    關(guān)鍵詞:胰腺癌免疫組化胰腺炎

    朱曉東 張春麗

    胰腺癌是一種惡性程度高、轉(zhuǎn)移早、預(yù)后差的惡性腫瘤,在人類消化系統(tǒng)腫瘤中占據(jù)了重要位置。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計,胰腺癌疾病患者其5年累積生存率不超過5%?;颊吆笃谥斡Ч^差,并常帶有嚴(yán)重的后遺癥,對患者自身以及家屬、社會均造成了不小負(fù)擔(dān),實現(xiàn)疾病的早期篩查和預(yù)防是控制疾病惡化的唯一有效手段[1]。但由于胰腺癌發(fā)病隱匿,前期檢測效果欠佳,診斷誤判率較高。近年來,諸多臨床診斷研究發(fā)現(xiàn),眾多腫瘤患者在其體內(nèi)均可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞自噬水平的改變。本研究旨在通過免疫組化法分析胰腺癌患者體內(nèi)自噬標(biāo)記蛋白Beclin-1和P62的表達特征和表達水平,探討胰腺癌的診斷以及治療新指標(biāo)或技術(shù)[2-3]。

    1 材料與方法

    1.1 研究對象

    2015年7月至2016年12月期間,在我院消化內(nèi)科選取60例胰腺癌臨床確診患者、60名胰腺炎確診患者、同期在我院接受體檢的60名健康人群作為研究對象。

    1.2 分組方法

    每組均為60例患者,其中A組取胰腺癌患者病理組織、B組取胰腺癌患者癌旁正常組織(對象來源和A組完全一致,僅檢測樣本位置不一致)、C組取慢性胰腺炎病理組織、D組取正常人群胰腺組織進行檢測。A組和B組均來源于同一病例對象,男性41例(占68.33%)、女性19例(占31.67%);年齡35~62歲、平均(51.34±5.19)歲;腫瘤直徑1~6 cm,平均(4.11±1.09)cm;低度分化20例(占33.33%)、中度分化31例(占51.67%)、中度分化9例(占15.00%);病變組織部位胰頭14例(占23.33%)、胰體15例(占25.00%)、胰尾18例(占30.00%)、全胰癌13例(占21.67%);TNM分期,Ⅰ和Ⅱ期32例(占53.33%)、Ⅲ和Ⅳ期28例(占46.67%);周圍組織侵犯情況,無14例(占23.33%)、有46例(占76.67%)。C組慢性胰腺炎患者男性45例(占75.0%)、女性15例(占25.0%);年齡33~63歲、平均(50.67±3.29)歲。D組男性43例、女性17例,年齡32~61歲,平均(52.20±4.99)歲。4組對象在性別、年齡方面無統(tǒng)計學(xué)差異,具有可比性。

    1.3 取樣及分析方法

    集取研究期間胰腺癌患者經(jīng)手術(shù)切除的胰腺癌病理組織,并收集對應(yīng)癌旁正常組織標(biāo)本,同時此階段在收集接受治療的慢性胰腺炎患者病理組織、接受調(diào)查的正常人群胰腺組織作為實驗樣本。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測檢查組織中自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、P62的表達特征,利用統(tǒng)計學(xué)對其進行統(tǒng)計對比。

    1.4 檢測內(nèi)容

    1.4.1 Beclin-1蛋白含量 使用免疫組化分析的方法將胰腺標(biāo)本石蠟切片進行分析,100倍光學(xué)鏡頭下選擇5個陽性物質(zhì)(試劑盒染色包漿為棕黃色或黃色)較為豐富的視野進行觀察,采用Image-Pro Plus Version6.0 軟件在200倍光學(xué)鏡頭下測定陽性物質(zhì)的積分光密度(IOD),用以表征Beclin-1蛋白具體含量。

    1.4.2 P62蛋白含量 采用免疫組化分析的方法使用專用試劑盒(鼠抗人p62,Santa Cruz公司)及顯色劑(DAB,福州邁新公司)對標(biāo)本進行染色,根據(jù)染色強度進行評分,依次為0分(-)、2分(1+)、4分(2+)、6分(3+),得分越高表示表達強度越高。

    1.5 統(tǒng)計分析

    采用統(tǒng)計軟件SPSS 18.0建立數(shù)據(jù)庫并分析,多組計量資料的比較使用F檢驗,計量資料的比較使用F/t檢驗,計數(shù)資料的比較使用χ2檢驗,檢驗水準(zhǔn)取0.05,雙側(cè)概率。

    2 結(jié)果

    2.1 4種不同組織來源對象Beclin-1、P62表達含量的差異

    對于不同組織來源對象的Beclin-1、P62表達含量進行檢測對比,結(jié)果顯示Beclin-1蛋白總差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=1013.51,P=0.00);P62總差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=355.72,P=0.00)。兩兩對比Beclin-1蛋白含量、P62表達,均具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),見表1。

    表1 4種不同組織來源中Beclin、P62表達的差異

    注:*表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2.2 胰腺癌組織Beclin-1、P62表達含量在不同病理特征間的差異

    胰腺癌組織中Beclin-1、P62含量與腫瘤大小、分化程度、病變部位、TNM分期、侵犯情況顯著相關(guān),見表2。

    2.3 胰腺癌患者病理組織中Beclin-1和P62表達含量的相關(guān)性分析

    胰腺癌患者病理組織進行免疫組化分析,陽性物質(zhì)中Beclin-1的平均積分光密度(252130.47±20147.33),P62表達強度平均得分(5.13±1.46),兩者進行皮爾遜相關(guān)性分析,其結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義(Pearson=0.87,P=0.00)。

    表2 不同病理特征的胰腺癌患者病理組織Beclin-1、P62表達含量的差異

    3 討論

    自噬是指細(xì)胞自身多種成分聚集形成自噬體,同時與溶酶體融合形成自噬溶酶體,降解所包裹的內(nèi)容物,來實現(xiàn)某些細(xì)胞器的更新與細(xì)胞本身的代謝需要。近年來臨床研究不斷進展,主要包括以下幾方面:細(xì)胞自身成分的再利用、清除有害與轉(zhuǎn)換效率低下的細(xì)胞、誘導(dǎo)細(xì)胞衰亡。自噬細(xì)胞通過多種途徑影響著我們自身的穩(wěn)定,廣泛地參與了細(xì)胞多種生理、病理過程,為現(xiàn)階段研究熱點之一[4-6]。胰腺癌是一種惡性程度較高的惡性腫瘤,其診斷和治療較為困難。臨床表現(xiàn)較復(fù)雜,取決于癌細(xì)胞的部位、有無轉(zhuǎn)移損害其他部位等,多體現(xiàn)腹部不適、疼痛。病因目前尚不清楚,與不規(guī)律生活以及遺傳存在一定的關(guān)系[7]。其對于放療效果較差,化療效果良好[8]。但疾病到后期,化療到一定程度容易產(chǎn)生耐藥性。所以越早診斷,治療效果越好。

    本研究從自噬標(biāo)記蛋白Beclin-1和P62兩方面入手,針對胰腺癌的發(fā)生,其含量和變化探討疾病的程度[9]。P62蛋白是由原癌基因在細(xì)胞質(zhì)中合成,在參與自噬過程中需要與細(xì)胞內(nèi)泛素化蛋白質(zhì)結(jié)合,然后與 LC3-Ⅱ蛋白結(jié)合形成復(fù)合物,并最終在自噬溶酶體中降解,因此其表達水平與自噬水平呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。Beclin-1蛋白是機體自噬過程中不可缺少的一部分,是自噬體形成的必須分子,主要調(diào)控自噬體的成熟與形成[10-11]。我們在本次的研究中發(fā)現(xiàn),Beclin-1在高、中、低分化的胰腺癌陽性率呈下降的關(guān)系,P62相反,與性別、年齡、有無門脈浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān),說明自噬細(xì)胞參與癌細(xì)胞的進展,能準(zhǔn)確地反映機體病程的變化,這與以前國內(nèi)外調(diào)查結(jié)果相類似[12-14]。本研究還發(fā)現(xiàn)P62蛋白表達與腫瘤的位置有顯著性關(guān)系,胰頭部腫瘤表達較高。說明胰腺癌患者通過檢測機體自噬水平,可初步判斷疾病的程度[15-16]。同時我們能通過其機體的自噬作用,深入研究胰腺癌的發(fā)病機制。同時我們在本研究中加入了慢性胰腺炎患者作為對照,其自噬蛋白含量的差異表明,由急性胰腺炎遷延而來的慢性胰腺炎已被視作胰腺癌的明確的危險因子[17-18]。

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