T淋巴細(xì)胞亞群和Bcl-2蛋白在食管癌組織中的表達(dá)及臨床意義

傅育卡，陳章興

食管癌是指發(fā)生于食管上皮的惡性腫瘤，約占惡性腫瘤發(fā)病率的2%[1-2]，每年20萬～40萬人死于該病，我國(guó)是食管癌高發(fā)地區(qū)且病死率更高[3-5]。腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移是食管癌預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素[6-7]。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與免疫系統(tǒng)有關(guān)，2015年Vacchelli等[8]研究證實(shí)，食管癌調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)水平升高，且與預(yù)后有關(guān)。我國(guó)食管癌患者組織中T細(xì)胞亞群的失衡情況可能與國(guó)外患者不同。另外，Bcl-2等凋亡調(diào)控基因與癌癥的發(fā)生和發(fā)展過程關(guān)系密切，其在腫瘤細(xì)胞中的高表達(dá)可以抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，從而促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展[9-10]。Song等[11]研究顯示，順鉑等可以誘導(dǎo)食管癌腫瘤細(xì)胞凋亡，并降低Bcl-2蛋白水平，其殺傷食管癌腫瘤細(xì)胞的機(jī)制可能是通過下調(diào)Bcl-2蛋白而發(fā)揮作用。T細(xì)胞亞群和Bcl-2蛋白均可導(dǎo)致食管癌的進(jìn)展，但目前國(guó)內(nèi)相關(guān)研究缺乏，本研究探討了食管癌患者腫瘤組織中T細(xì)胞亞群和調(diào)Bcl-2表達(dá)水平及臨床意義。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2015年1月—2016年12月解放軍174醫(yī)院收治的食管癌80例，納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均有食管癌病理診斷；②年齡為18～75歲；③有手術(shù)適應(yīng)證(腫瘤無明顯外侵，無肝腎肺等遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；臨床分期為Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期)并在我院行食管癌切除術(shù)；④同意參與本研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝腎等重要臟器功能不全；②冠心病、心肌梗死、卒中等重大心血管疾??；③潰瘍性結(jié)腸炎等免疫系統(tǒng)疾?。虎芎喜⑵渌[瘤；⑤食管結(jié)核；⑥甲狀腺功能異常；⑦胸膜粘連、肺膿腫等鄰近臟器轉(zhuǎn)移；⑧急性或慢性感染性疾病期。本組男49例，女31例；年齡：38～73(58.29±9.91)歲；臨床TNM分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期38例，Ⅲ期30例；鱗狀細(xì)胞癌48例，腺癌32例；腫瘤細(xì)胞為高分化44例，中低分化36例；合并局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49例，食管外膜浸潤(rùn)32例。

1.2研究方法 入院后完善常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查，擇期行食管癌切除術(shù)，術(shù)中留取食管癌腫瘤組織(距腫瘤邊緣>1 cm)為腫瘤組織組和癌旁組織(距腫瘤邊緣5 cm)為癌旁組織組。每組80例。分別使用流式細(xì)胞儀和免疫組化法檢測(cè)并比較2組T細(xì)胞亞群(CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞)和Bcl-2蛋白陽性率。分析腫瘤組織中T細(xì)胞亞群、Bcl-2蛋白與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床特征的相關(guān)性。Bcl-2陽性的標(biāo)準(zhǔn)：黃色或棕黃色顆粒的細(xì)胞為陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)≥5%提示組織中的Bcl-2陽性。

2 結(jié)果

2.12組Bcl-2蛋白比較 腫瘤組織組Bcl-2蛋白陽性病例占77.5%(62/80)，癌旁組織組Bcl-2蛋白陽性病例占15.0%(12/80)；腫瘤組織組Bcl-2蛋白陽性病例高于癌旁組織組(P<0.001)。Bcl-2蛋白陽性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的百分比：腫瘤組織為15%，陽性癌旁組織為7%，陰性癌旁組織為2%。見圖1。

2.22組T淋巴細(xì)胞亞群比較 腫瘤組織組中CD4+和CD8+T細(xì)胞表達(dá)水平與癌旁組織組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但調(diào)節(jié)性T細(xì)胞高于癌旁組織組(P<0.001)。見表1。

表1 食管癌腫瘤組織組和癌旁組織組T淋巴細(xì)胞亞群比較

2.3食管癌腫瘤組織中Bcl-2蛋白、T細(xì)胞亞群的陽性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期為Ⅲ期的食管癌Bcl-2蛋白陽性率、CD4+T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞均高于未合并淋巴轉(zhuǎn)移和TNM分期為Ⅰ和Ⅱ期的食管癌(P<0.05)。病理類型為腺癌和磷癌的食管癌Bcl-2蛋白陽性率、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。腫瘤細(xì)胞分化程度為中低分化和食管外浸潤(rùn)的食管癌Bcl-2蛋白陽性率、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞均高于高分化和非食管外膜浸潤(rùn)的食管癌(P<0.05)。見表2。

表2 食管癌腫瘤組織中Bcl-2、T淋巴細(xì)胞亞群的陽性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.4食管癌腫瘤組織中Bcl-2蛋白和T細(xì)胞亞群的陽性表達(dá)的相關(guān)性 Bcl-2蛋白表達(dá)陽性的食管癌調(diào)節(jié)性T細(xì)胞高于Bcl-2蛋白表達(dá)陰性的食管癌(P<0.001)。二者CD4+和CD8+T細(xì)胞比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 食管癌腫瘤組織中Bcl-2蛋白和T淋巴細(xì)胞亞群的陽性表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

我國(guó)食管癌的發(fā)病原因不清[12-13]，導(dǎo)致該類患者死亡的主要因素是腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，主要轉(zhuǎn)移途徑包括直接擴(kuò)散、淋巴結(jié)和血運(yùn)轉(zhuǎn)移等[14]。研究表明，組織中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞主要由CD4+T細(xì)胞在抑炎因子的作用下分化而成[15]。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷中起到負(fù)調(diào)節(jié)作用，該細(xì)胞降低與多種類型的腫瘤患者病死率升高相關(guān)[16-18]。2013年Izawa等[19]研究顯示，食管癌和胃癌腫瘤組織中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞升高的患者，H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用降低。Bcl-2蛋白是一種凋亡調(diào)控基因，在腫瘤細(xì)胞中的高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的不受限制生長(zhǎng)有關(guān)。國(guó)外研究已證實(shí)Bcl-2蛋白在食管癌組織中高表達(dá)，與患者臨床預(yù)后惡化有關(guān)[11]。

本研究結(jié)果顯示，食管癌腫瘤組織中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及Bcl-2蛋白陽性率顯著增加，且合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅲ期食管癌和中低分化、食管外膜浸潤(rùn)的食管癌患者Bcl-2蛋白陽性率和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞顯著增高。提示我國(guó)食管癌腫瘤組織中Bcl-2蛋白和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞高表達(dá)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床TNM分期、腫瘤細(xì)胞中低分化和食管外膜浸潤(rùn)有關(guān)，均是食管癌預(yù)后不良的臨床征象[20- 21]，導(dǎo)致患者病死率增高。在腫瘤組織中，CD4+T細(xì)胞可以分化為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，抑制機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，而CD8+T細(xì)胞可以分化為細(xì)胞毒性T細(xì)胞，對(duì)腫瘤細(xì)胞起殺傷作用[17, 22]。本研究結(jié)果顯示,合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Ⅲ期食管癌CD4+T細(xì)胞水平升高，這可能是腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞織浸潤(rùn)腫瘤組，進(jìn)而產(chǎn)生大量調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，最終介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞對(duì)免疫的耐受。在其他腫瘤的研究中表明CD8+T細(xì)胞在腫瘤組織中低表達(dá)，可引起細(xì)胞毒性T細(xì)胞產(chǎn)生減少，對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用降低[23-25]。本研究顯示,CD8+T細(xì)胞在腫瘤組織和癌旁組織中比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等臨床特征也無相關(guān)性。這可能與病例的選擇或不同癌癥的特性相關(guān)，尚有待進(jìn)一步的臨床研究證實(shí)。

Bcl-2凋亡調(diào)控基因又稱B淋巴細(xì)胞瘤/白血病-2蛋白基因，主要作用是抑制細(xì)胞包括腫瘤細(xì)胞的凋亡。組織中低水平的Bcl-2蛋白表達(dá)對(duì)維持機(jī)體新陳代謝具有重要意義，若發(fā)生基因變異可導(dǎo)致Bcl-2蛋白在組織中高表達(dá)，引起細(xì)胞增殖和凋亡調(diào)控失衡，從而細(xì)胞無限制繁殖，最終誘導(dǎo)癌癥發(fā)生；且癌癥發(fā)生后Bcl-2蛋白在腫瘤組織中的高表達(dá)，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞進(jìn)一步繁殖，使腫瘤細(xì)胞繁殖生長(zhǎng)加速和轉(zhuǎn)移[26-27]。文獻(xiàn)報(bào)道，順鉑或許可通過降低腫瘤組織中Bcl-2蛋白表達(dá)水平而改善食管癌患者臨床預(yù)后[11]。本研究結(jié)果顯示，Bcl-2蛋白的陽性表達(dá)與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞增高有關(guān)，提示Bcl-2蛋白陽性的食管癌患者免疫功能處于抑制狀態(tài)，具體機(jī)制尚不明確?？赡芘cBcl-2蛋白抑制細(xì)胞凋亡，降低線粒體氧化水平，細(xì)胞內(nèi)的氧化還原電位等有關(guān)，但目前缺乏研究探討B(tài)cl-2蛋白與食管癌患者組織中T淋巴細(xì)胞亞群的研究，尚需其他研究進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，食管癌腫瘤組織中T淋巴細(xì)胞亞群失衡和Bcl-2蛋白高表達(dá)，二者與腫瘤的進(jìn)展相關(guān)。