B3型胸腺瘤和胸腺癌中MGMT蛋白表達(dá)缺失的意義及預(yù)后分析

李 飛,宋 媛，申 遠(yuǎn)，何 明，徐新建，岳泓旭

MGMT即O6-甲基鳥(niǎo)嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶，是一種存在于人體中的避免烷化劑致DNA突變、癌變作用的DNA損傷修復(fù)蛋白酶[1-2]。胸腺上皮腫瘤(TET)是一種原發(fā)于前縱隔的潛在惡性腫瘤，約占前縱隔腫瘤的50%[3]。根據(jù)2015年WH0最新出版的TET組織學(xué)分類[4]中將其分為：A型、非典型A型、AB型、B1-3型、胸腺癌和混合型胸腺癌。B3型胸腺瘤和胸腺癌是TET中惡性度最高的兩類，臨床上歸為侵襲性TET，在組織學(xué)或是生物學(xué)行為上十分類似，本研究擬通過(guò)對(duì)MGMT蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)，進(jìn)而評(píng)估蛋白表達(dá)缺失與B3型胸腺瘤和胸腺癌術(shù)后生存狀態(tài)的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院胸外科2008年1月—2015年1月以前縱隔腫物就診并行手術(shù)切除的TET患者48例，共取得蠟塊60例，按照TET的2015年WHO組織學(xué)分類分為：B3型胸腺瘤組20例，胸腺癌組28例，瘤旁組織組12例。48例腫瘤組織中男21例，女27例；年齡32～82歲，中位年齡60.20歲；合并重癥肌無(wú)力15例。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前均由胸部增強(qiáng)CT確診為前縱隔腫物且行根治性手術(shù)(胸腺腫物+前縱隔脂肪組織切除)，術(shù)后病理證實(shí)為B3型胸腺瘤或胸腺癌；患者及其家屬均知情并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)后病理證實(shí)為胸腺增生等良性疾病、TET中非B3型和非胸腺癌的組織學(xué)分型。按照Masaoka臨床分期分為：B3型胸腺瘤組中Ⅰ/Ⅱ期12例，Ⅲ/Ⅳ期8例；胸腺癌組中Ⅰ/Ⅱ期13例，Ⅲ/Ⅳ期15例。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

1.2研究方法 免疫組化SP法檢測(cè)MGMT蛋白表達(dá)情況，兔抗人MGMT 單克隆抗體購(gòu)于abcam公司，免疫組化染色試劑盒購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司，具體操作按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。MGMT抗體為細(xì)胞核和漿著色，在鏡下細(xì)胞核、漿棕染并且明顯強(qiáng)于背景者為陽(yáng)性，反之為陰性。結(jié)果判定：每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，采用半定量積分法判斷結(jié)果[5]，陽(yáng)性細(xì)胞百分率分為0～4分：陽(yáng)性細(xì)胞<5%為0分，陽(yáng)性細(xì)胞6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。將染色強(qiáng)度分為0～4分：無(wú)染色0分，弱染色(淡黃色)1分，中等染色(棕黃色)2分，強(qiáng)染色(棕褐色) 3分。陽(yáng)性細(xì)胞的百分率與陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度的乘積進(jìn)行評(píng)分，0分為陰性，1～4分為弱陽(yáng)性，5～8分為陽(yáng)性，9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性，將陰性與弱陽(yáng)性視為陰性表達(dá)即表達(dá)缺失，陽(yáng)性與強(qiáng)陽(yáng)性視為陽(yáng)性表達(dá)。

2 結(jié)果

2.1MGMT蛋白在B3型胸腺瘤、胸腺癌和瘤旁組織中的表達(dá)情況 B3型胸腺瘤和胸腺癌組織中細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核呈淡染色，部分區(qū)域染色不明顯；瘤旁組織切片可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)明顯棕染。見(jiàn)圖1。B3型胸腺瘤組的染色強(qiáng)度為(1.03±0.21)分；胸腺癌組的染色強(qiáng)度為(0.73±0.33)分；瘤旁組織組的染色強(qiáng)度為(1.93±0.37)分。B3型胸腺瘤組發(fā)生MGMT蛋白表達(dá)缺失的比例為35.0%(7/20)；胸腺癌組發(fā)生MGMT蛋白表達(dá)缺失的比例為78.6%(22/28)，瘤旁組織組未見(jiàn)MGMT蛋白表達(dá)缺失0.0%(0/12)。胸腺癌組MGMT蛋白表達(dá)缺失高于瘤旁組織組及B3型胸腺瘤組(χ2=25.004、9.261，P=0.001、0.003)，B3型胸腺瘤組MGMT蛋白表達(dá)缺失高于瘤旁組織組(χ2=14.735，P=0.008)。

2.2MGMT蛋白表達(dá)缺失與其他臨床參數(shù)關(guān)系 MGMT蛋白表達(dá)缺失與患者性別、年齡、是否合并重癥肌無(wú)力無(wú)相關(guān)性(P>0.05)；與Masaoka分期有關(guān)，且B3型胸腺瘤組和胸腺癌組中Ⅰ/Ⅱ期的MGMT蛋白表達(dá)缺失少于II/IV期(χ2=17.244，P=0.001)。見(jiàn)表1。

2.3總體生存率 MGMT蛋白表達(dá)缺失的胸腺瘤和胸腺癌的5年生存率(15/28，53.6%)低于MGMT蛋白表達(dá)正常者(15/20，75.0%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.242，P=0.039)。見(jiàn)圖2。Masaoka分期為Ⅲ/Ⅳ期的患者5年生存率(11/25，44.0%)低于Ⅰ/Ⅱ期的患者(17/23，73.9%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.964，P=0.001)。見(jiàn)圖3。

表1 MGMT蛋白在B3型胸腺瘤、胸腺癌中表達(dá)缺失與臨床參數(shù)關(guān)系[例(%)]

圖2MGMT蛋白表達(dá)缺失情況與B3型胸腺瘤和胸腺癌預(yù)后的關(guān)系

圖3不同分期B3型胸腺瘤和胸腺癌MGMT蛋白表達(dá)缺失情況與預(yù)后的關(guān)系

3 討論

B3型胸腺瘤和胸腺癌生物學(xué)行為和組織形態(tài)學(xué)相近，多表現(xiàn)為浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，侵犯包膜后可進(jìn)一步侵犯周圍組織或器官，影響預(yù)后[6-8]。腫瘤標(biāo)記物可提示腫瘤惡性程度和評(píng)估預(yù)后，但目前缺少一種評(píng)估TET預(yù)后的標(biāo)記物。MGMT是一類DNA損傷修復(fù)蛋白，直接作用于DNA的反轉(zhuǎn)錄途徑，將O6-甲基鳥(niǎo)嘌呤的烷化劑基團(tuán)轉(zhuǎn)移到自身的半胱氨酸殘基活性位點(diǎn)上，促進(jìn)損傷的鳥(niǎo)嘌呤復(fù)原。烷化劑是一類致癌物質(zhì)，MGMT蛋白表達(dá)可阻止其對(duì)人體的致癌作用，但該蛋白出現(xiàn)表達(dá)缺失后，正常細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)失控導(dǎo)致惡變，反之，如該蛋白出現(xiàn)表達(dá)，則可抑制細(xì)胞凋亡[9]。MGMT蛋白大大降低了烷化劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的損傷，臨床采用含烷化劑類方案治療侵襲性TET效果差的原因之一。本研究未對(duì)患者術(shù)后輔助化療進(jìn)行隨訪是不足之處。[10-12]

B3型胸腺瘤和胸腺癌鑒別主要通過(guò)組織學(xué)檢查：B3型胸腺瘤主要由胸腺上皮細(xì)胞組成，淋巴細(xì)胞成分很少，瘤細(xì)胞呈輕中度異型性，該類腫瘤較少出現(xiàn)瘤內(nèi)出血或液化壞死等鏡下表現(xiàn)。胸腺癌通常分為11個(gè)病理亞型，以鱗狀細(xì)胞癌最多見(jiàn)，約占TET的15%～20%[4, 13]，組織學(xué)上已失去原有的胸腺的正常結(jié)構(gòu)，以腫瘤細(xì)胞占據(jù)病變主體。本研究結(jié)果顯示，采用免疫組化法檢測(cè)，胸腺癌組MGMT蛋白表達(dá)缺失比例顯著高于B3型胸腺瘤組，Masaoka分期Ⅲ/Ⅳ期MGMT蛋白缺失比例高于Ⅰ/Ⅱ期，與既往文獻(xiàn)基本一致，提示MGMT蛋白表達(dá)缺失與TET的惡性程度呈正相關(guān)[14]。因此，免疫組化可作為組織學(xué)的補(bǔ)充檢查手段，更好地區(qū)分B3型胸腺瘤和胸腺癌。重癥肌無(wú)力是TET最常見(jiàn)的副瘤綜合征[15]，本研究結(jié)果顯示，伴重癥肌無(wú)力的胸腺癌和B3型胸腺瘤MGMT蛋白表達(dá)缺失與不伴重癥肌無(wú)力者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與既往文獻(xiàn)一致[16-18]。Hoffacker等[16]報(bào)道，重癥肌無(wú)力的發(fā)生是T淋巴細(xì)胞異常所致，MGMT蛋白功能與T淋巴細(xì)胞無(wú)明顯相關(guān)，因此MGMT蛋白表達(dá)缺失與是否伴隨重癥肌無(wú)力的發(fā)生無(wú)明顯相關(guān)性。

既往文獻(xiàn)報(bào)道，B3型胸腺瘤5年生存率為80%左右[19]，胸腺癌5年生存率為35%～70%[20-22]。本研究結(jié)果顯示，B3型胸腺瘤組生存率高于胸腺癌組，基本與文獻(xiàn)一致。目前國(guó)內(nèi)較少有文獻(xiàn)報(bào)道通過(guò)MGMT蛋白表達(dá)狀態(tài)比較侵襲性TET的預(yù)后，本研究提示，MGMT蛋白表達(dá)缺失的病例5年生存率低于表達(dá)正常病例。由此推斷，MGMT蛋白或許能成作為評(píng)估侵襲性TET預(yù)后的新標(biāo)記物。

綜上所述，MGMT蛋白是一種有效區(qū)分的B3型胸腺瘤和胸腺癌的標(biāo)記物，是病理組織學(xué)的補(bǔ)充檢查手段，其表達(dá)缺失提示侵襲性TET預(yù)后不佳。