高效液相色譜法測(cè)定動(dòng)物性食品中磺胺類(lèi)藥物多殘留

我國(guó)食品安全在四個(gè)方面存在風(fēng)險(xiǎn)，其中獸藥濫用是當(dāng)前食品安全源頭污染的主要來(lái)源，我國(guó)獸藥應(yīng)用依然處于無(wú)序狀態(tài)。磺胺類(lèi)藥物是一種廣譜抗菌藥，其性質(zhì)穩(wěn)定、產(chǎn)量大、品種多、價(jià)格低、使用簡(jiǎn)便、供應(yīng)充足等優(yōu)點(diǎn)，在獸醫(yī)臨床和畜牧養(yǎng)殖業(yè)中作為飼料添加劑或動(dòng)物疾病治療藥物廣泛應(yīng)用。但是磺胺類(lèi)藥物會(huì)引起人過(guò)敏性反應(yīng)，并有“三致”作用。隨著社會(huì)的發(fā)展，磺胺類(lèi)藥物的不合理使用，使其在動(dòng)物性食品中殘留引起食品安全問(wèn)題已備受關(guān)注，成為食品安全監(jiān)管領(lǐng)域的重點(diǎn)工作之一，而各類(lèi)檢測(cè)方法也隨之應(yīng)運(yùn)而生。

本實(shí)驗(yàn)旨在建立一種高效液相色譜法測(cè)定動(dòng)物性食品中磺胺類(lèi)藥物多殘留的測(cè)定方法。該方法操作簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定、精密度高，適用于基層食品安全檢測(cè)部門(mén)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。

實(shí)驗(yàn)部分

主要儀器與裝置。高效液相色譜儀紫外檢測(cè)器Alliance 2695- TUV（美國(guó)Waters公司）；MS105分析天平感量0.000001g，ME802E天平感量0.01g（瑞士Xcjkzxer Toledo公司）；渦旋振蕩器MS1 MiniShaker（德國(guó)IKA公司）；離心機(jī)Multifuge X1R（美國(guó)Thermo公司）；均質(zhì)機(jī)Scientz- 11L（寧波新芝生物科技股份有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀N- 1200BV- WD（日本理化器械株式會(huì)社）；氮吹儀N- EVAP（美國(guó)Organomation公司）；固相萃取裝置20POS（美國(guó)Waters公司）。

主要試劑與材料。磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺異噁唑、磺胺二甲氧噠嗪對(duì)照品：Dr.Ehrenstorfer GmbH。含量均≥99.0%；乙酸乙酯（色譜純）、乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）、甲酸（色譜純）：Thermo；鹽酸（分析純）、正己烷（分析純）：北京化工廠；超純水：默克Mlix Essential5+Milli- Q Reference純水和超純水聯(lián)用系統(tǒng)。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。以測(cè)得峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。

色譜分析條件。色譜柱：ODS- 2HYPERSIL：C18 5μm 250mm×4.6mm；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm；進(jìn)樣量：100μL；柱溫：35℃；流速：1mL/min；梯度洗脫。

前處理方法。稱(chēng)取5.00g經(jīng)切碎勻漿的鮮豬肝樣品于50mL聚四氟乙烯離心管中，加入10g無(wú)水硫酸鈉和乙腈20mL，參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物性食品中13種磺胺類(lèi)藥物多殘留的測(cè)定高效液相色譜法》（GB 29694- 2013）進(jìn)行樣品前處理，過(guò)0.22μm的針筒有機(jī)濾膜，于進(jìn)樣瓶中供高效液相色譜測(cè)定。

結(jié)果與討論

檢測(cè)器的選擇。本實(shí)驗(yàn)單獨(dú)采用紫外檢測(cè)器，其中10個(gè)峰按先后順序分別是：磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺異噁唑、磺胺二甲氧噠嗪。

精密度試驗(yàn)。根據(jù)《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404- 2008）附錄F.2的要求，結(jié)合《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物性食品中13種磺胺類(lèi)藥物多殘留的測(cè)定高效液相色譜法》（GB 29694- 2013）。精密度實(shí)驗(yàn)選用30.0μg/kg、60.0μg/kg、120.0μg/kg三個(gè)水平進(jìn)行，重復(fù)測(cè)定6次。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在紫外譜圖中峰面積的RSD<5%。本法測(cè)定的精密度較好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

方法的線性范圍、回收率和檢出限。將前文中配制好的10～5000μg/L范圍的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在前文所述的高效液相色譜條件下測(cè)定，以各藥物的峰面積對(duì)質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，得到10種磺胺類(lèi)藥物的線性方程及相關(guān)系數(shù)。在鮮豬肝樣品中加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（分別加15、30、60μL，即30.0、60.0、120.0μg/ kg3個(gè)水平）按上述前處理和檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)添加濃度重復(fù)6次，結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可見(jiàn)，在10～5000μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)10種抗菌藥的線性關(guān)系良好，加標(biāo)回收率范圍80.53%～100.71%，可以滿足日常分析的要求，10種磺胺類(lèi)物質(zhì)在本方法的回收率和檢出限見(jiàn)表2。

樣品前處理步驟主要參考GB/T29694-2013，實(shí)驗(yàn)表明完全按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行前處理，加標(biāo)回收較不穩(wěn)定。本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)，試驗(yàn)選擇比較了乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯等溶劑對(duì)10種磺胺的提取效果。結(jié)果表明乙腈提取可以沉淀蛋白，提取液中油脂含量也較少，對(duì)于目標(biāo)檢測(cè)物提取效率較高且濃縮凈化較容易。因此選擇用乙腈作為提取溶劑，超聲提取5min，確定儀器的最佳工作條件為梯度洗脫；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm；進(jìn)樣量：100μL。在此最佳條件下，10種磺胺類(lèi)藥物的回收率90%左右，RSD小于5%，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.999。隨機(jī)抽取超市售賣(mài)的鮮豬肝3份，用所建立的方法進(jìn)行檢測(cè)，均未檢出本文所分析的10種磺胺類(lèi)藥物。該方法操作簡(jiǎn)單、精密度高、線性范圍寬，適用于基層食品安全實(shí)驗(yàn)室對(duì)于動(dòng)物性食品中磺胺類(lèi)藥物多殘留的日常監(jiān)測(cè)。

作者簡(jiǎn)介：

劉麗（1986-），女，北京，北京市西城區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局，食品工程師，研究生，從事食品藥品檢測(cè)工作。