調(diào)節(jié)性B細(xì)胞分型及其在相關(guān)疾病中的作用

黃 艾，邢世杰，聶 君，瞿 越，王建軍，江 科

B淋巴細(xì)胞通過抗原呈遞作用誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，同時產(chǎn)生和分泌相應(yīng)抗體，在自身免疫性、變態(tài)反應(yīng)性和移植物排斥反應(yīng)等疾病中發(fā)揮關(guān)鍵作用，同時B淋巴細(xì)胞對免疫反應(yīng)也有調(diào)節(jié)作用[1]。20世紀(jì)70年代首先發(fā)現(xiàn)了B淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用，此后Katz等[2]在豚鼠延遲超敏反應(yīng)模型中證實了調(diào)節(jié)性B(B cells of regulation，Breg)細(xì)胞的存在。Wolf 等[3]在小鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)模型中第一次準(zhǔn)確描述了B淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)功能，之后其他自身免疫性疾病模型如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis, RA)、糖尿病、變態(tài)反應(yīng)性疾病及傳染病和腫瘤等相關(guān)研究也進(jìn)一步驗證了實驗性自身免疫性腦脊髓炎[4-6]。

1 Breg細(xì)胞的作用

研究證實，Breg細(xì)胞對自身免疫反應(yīng)發(fā)揮抑制作用的主要機(jī)制是分泌白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-10，IL-10是有效的抗炎細(xì)胞因子之一，在Toll樣受體(Toll-like receptor，TLR)激動劑、CD40L或IL-21等刺激下，Breg可表達(dá)IL-10。在慢性腸道炎癥模型中，腸道相關(guān)淋巴組織中分泌大量的IL-10并過表達(dá)CD1d分子的B淋巴細(xì)胞亞群[7]。此外，多發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)小鼠在病情緩解后發(fā)現(xiàn)其脾臟中產(chǎn)生分泌IL-10的B淋巴細(xì)胞，過繼輸注分泌IL-10的B淋巴細(xì)胞可以減輕疾病的嚴(yán)重程度，而IL-10缺失的小鼠B淋巴細(xì)胞則無此作用[8]。還有研究表明，產(chǎn)生IL-10的B淋巴細(xì)胞能對小鼠自身免疫疾病發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，包括RA、糖尿病等[5]。最近一些研究表明，B淋巴細(xì)胞除了以分泌IL-10的方式對自身免疫反應(yīng)發(fā)揮抑制作用外還存在其他抑制免疫的機(jī)制，尋找B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)的其他機(jī)制具有重要的臨床意義，特別是由B淋巴細(xì)胞分泌的其他抑制性細(xì)胞因子。文獻(xiàn)報道Breg細(xì)胞可以產(chǎn)生IL-35，而重組的IL-35融合蛋白可以誘導(dǎo)Breg細(xì)胞，并促進(jìn)IL-10以及IL-35的分泌[5]。B淋巴細(xì)胞來源的IL-35也作用于T淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)Foxp3+Treg細(xì)胞群，IL-35誘導(dǎo)產(chǎn)生的IL-35 Treg細(xì)胞具有抑制炎癥的作用，又稱誘導(dǎo)型CD4+調(diào)節(jié)型T細(xì)胞(induced CD4+regulatory T cells，iTR35)[7]。雖然重組的IL-35抑制B220hiB淋巴細(xì)胞的增殖，但可選擇性誘導(dǎo)體內(nèi)CD19+CD5+B220lowBreg細(xì)胞的擴(kuò)增[9]。B淋巴細(xì)胞中IL-35亞基(p35或EBi3)表達(dá)缺乏的嵌合小鼠可進(jìn)展為嚴(yán)重的EAE，并且對抗沙門氏菌誘導(dǎo)的敗血癥具有更好的保護(hù)作用，在沙門氏菌感染模型中，缺乏IL-35表達(dá)的B淋巴細(xì)胞可導(dǎo)致Th1細(xì)胞數(shù)量和脾臟巨噬細(xì)胞數(shù)量的增加[10]。另一項獨立研究表明，IL-35刺激后B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IL-35能夠抑制過繼轉(zhuǎn)移的實驗性葡萄膜炎[9]，此外Breg細(xì)胞維持自然殺傷細(xì)胞(natural killer cells，NKCs)在體內(nèi)的平衡方面起到至關(guān)重要的作用[11]。

2 Breg細(xì)胞的分型

最近一系列研究在人類和小鼠中發(fā)現(xiàn)了幾種不同亞型的Breg細(xì)胞，但是目前的研究很難定義特定Breg的表型。盡管迄今為止還沒有關(guān)于Breg細(xì)胞表面活化和譜系的統(tǒng)一標(biāo)志物特征，然而它們中的大部分都具有表達(dá)抗炎細(xì)胞因子IL-10的能力。

2.1 小鼠Breg分型

小鼠B細(xì)胞發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的證據(jù)首先是在B細(xì)胞缺陷小鼠不能從EAE恢復(fù)[12]，隨后證明分泌IL-10的B細(xì)胞有抑制功能。由于Breg細(xì)胞在介導(dǎo)抑制中的關(guān)鍵作用，IL-10主要用作Breg鑒定的標(biāo)志物。迄今為止，已經(jīng)在各種小鼠模型中鑒定了一些具有重疊表型和功能的Breg亞型(表1)。(1)B10細(xì)胞 雖然邊緣區(qū)(marginal zone，MZ)B細(xì)胞在脾臟中高表達(dá)CD1d，但在人和小鼠中CD1d的高表達(dá)是不同Breg亞群之間的共同特征。CD1d和CD5的共表達(dá)被用于表征脾臟產(chǎn)生IL-10的B細(xì)胞群體，即為B10細(xì)胞[13]。同時由于主要組織相容性Ⅱ復(fù)合體( major histocompatibility complex class Ⅱ，MHC-Ⅱ)缺陷型小鼠缺乏功能性B10細(xì)胞，故B10細(xì)胞還需要MHC-Ⅱ的表達(dá)。在體外通過脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)、佛波脂(phorbal 12-myristate 13-acetate，PMA)、離子霉素和莫能菌素的刺激，CD1dhiCD5+B10細(xì)胞能抑制多種免疫紊亂相關(guān)的炎癥反應(yīng)。B10細(xì)胞的抑制作用已在EAE、關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡和慢性腸道炎癥等實驗?zāi)Ｐ椭械玫阶C實。(2)過渡性2邊緣區(qū)前體細(xì)胞 Evans等[14]首次提出CD19+CD21hiCD23hiCD24hiIgMhiIgDhiCD1dhi表型的脾臟過渡性2-邊緣區(qū)前體(T2-MZP)B細(xì)胞的免疫抑制功能。

表1 人類及小鼠不同Breg細(xì)胞亞型、表型和介導(dǎo)因子Table 1 Subtype, phenotype, and mediate factor of human and mouse Breg

引自Mauri C, Menon M;The expanding family of regulatory B cells[J].Int Immunol, 2015,27:479-486

在關(guān)節(jié)炎小鼠的脾臟中發(fā)現(xiàn)T2-MZP B細(xì)胞是膠原刺激后分泌IL-10的主要細(xì)胞，并且是在體內(nèi)和體外唯一顯示出有抑制能力的亞型[15]。分泌IL-10的T2-MZP B細(xì)胞的抑制功能已經(jīng)在自身免疫性疾病、變態(tài)反應(yīng)疾病及癌癥被證實。(3)CD138+B細(xì)胞 晚期階段的B細(xì)胞也能產(chǎn)生IL-10，并具有抑制能力。在EAE小鼠的引流淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn)，分泌IL-10的CD138+漿細(xì)胞通過抑制樹突狀細(xì)胞的功能而阻止致病性T細(xì)胞的生成，對于抑制自身免疫性炎癥至關(guān)重要[10]。不同于淋巴結(jié)中的CD138+漿細(xì)胞，脾臟CD138+B細(xì)胞可以通過提供細(xì)胞因子IL-10和IL-35而抑制EAE炎癥及對沙門氏菌感染的免疫應(yīng)答。(4)T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白結(jié)構(gòu)域1(T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein 1，TIM-1)+B細(xì)胞TIM-1是與免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)相關(guān)的跨膜糖蛋白。小鼠主要的Breg亞群包含T2-MZP B細(xì)胞、B10細(xì)胞、CD138+B細(xì)胞和IgA+漿細(xì)胞，其中大多數(shù)產(chǎn)生IL-10 的B淋巴細(xì)胞都表達(dá)TIM-1。將TIM-1+B細(xì)胞輸注給TIM-1-/-小鼠可促進(jìn)EAE的恢復(fù)和移植物的長期存活[16]。(5)B-1a細(xì)胞 B-1細(xì)胞是天然免疫細(xì)胞，其產(chǎn)生大多數(shù)天然抗體，特別是IgM，以加快凋亡細(xì)胞的清除[17]。天然IgM作為防治病原體的第一道防線，基于CD5的表達(dá)，B-1細(xì)胞可以進(jìn)一步分類為功能不同的亞類。CD5+B-1細(xì)胞在先天活化后成為IL-10的主要生產(chǎn)者，稱為B-1a細(xì)胞。進(jìn)一步的研究表明，表達(dá)Fas配體(FasL)的B-1a細(xì)胞稱為殺傷B細(xì)胞[18]。因此，由于它們能夠中和入侵的病原體和抑制炎癥反應(yīng)，故天然的B-1a Breg細(xì)胞在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。

2.2 人類Breg分型

與小鼠類似，人類Breg細(xì)胞有產(chǎn)生IL-10的能力[19]，其分型與小鼠Breg分型存在一部分相同之處，但也存在不少差異(表1)。(1) B10細(xì)胞： B10細(xì)胞是在外周血中產(chǎn)生IL-10的Breg群，多數(shù)B10細(xì)胞在CD19+CD24hiCD27+B細(xì)胞亞群內(nèi)，通過產(chǎn)生IL-10而抑制單核細(xì)胞產(chǎn)生的TNF-α。與CD40激活的CD24hiCD38hiBreg不同，人B10細(xì)胞對LPS和CpG的刺激發(fā)生反應(yīng)[19]。(2) CD24hiCD38hiBreg細(xì)胞：在健康個體的外周血CD19+CD24hiCD38hi未成熟B細(xì)胞群中發(fā)現(xiàn)了此類Breg細(xì)胞。體外研究發(fā)現(xiàn)，在CD40的參與下，CD19+CD24hiCD38hiB細(xì)胞在外周血的B細(xì)胞亞群中產(chǎn)生的IL-10量最高，是唯一抑制Th1分化的亞型。除了具有抑制Th1反應(yīng)和促Th17分化外，CD19+CD24hiCD38hiBregs還可將CD4+T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為Treg和Tr1細(xì)胞[20]。Bregs對Th1的抑制部分地呈IL-10依賴性，需要CD80-CD86與T細(xì)胞的相互作用。(3)其他Breg亞型：與Bregs相關(guān)的新表型和功能越來越多。與IL-10生產(chǎn)無關(guān)并與CD4+CXCR5+程序性死亡受體1(programmed cell death protein 1，PD-1) +T濾泡輔助細(xì)胞(T follicular helper，Tfh)相互作用的PD-L1hiB細(xì)胞可以限制記憶B細(xì)胞的發(fā)育和漿細(xì)胞的分化。通過Tfh擴(kuò)增減少和髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein，MOG)特異性IgG的產(chǎn)生，過繼輸注PD-L1hiB細(xì)胞到MOG誘導(dǎo)的小鼠能改善EAE[21]。

3 Breg細(xì)胞在各種疾病中的作用

3.1 Breg細(xì)胞與風(fēng)濕免疫性疾病

過去十年進(jìn)行了大量關(guān)于Breg細(xì)胞介導(dǎo)的免疫抑制功能機(jī)制的研究，目前的大多數(shù)研究都是關(guān)于Breg細(xì)胞在自身免疫性疾病的作用，已經(jīng)證明Breg 細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和NKCs相互作用而發(fā)揮調(diào)節(jié)功能。近年來，關(guān)于Breg細(xì)胞在風(fēng)濕免疫性疾病中的研究逐漸增多。風(fēng)濕性免疫疾病是自身免疫性疾病，常累及關(guān)節(jié)和肌肉，發(fā)病過程中產(chǎn)生大量的自身抗體，Breg細(xì)胞在其中起著重要的免疫抑制作用， B10細(xì)胞通過作用于Treg細(xì)胞、NKCs等發(fā)揮免疫負(fù)性調(diào)節(jié)作用，有研究證實Breg細(xì)胞缺失將導(dǎo)致此類自身免疫疾病的發(fā)生以及惡化。

RA的病變特征是關(guān)節(jié)囊和滑膜的慢性炎癥，從而導(dǎo)致滑膜增生、軟骨損傷和骨侵蝕，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)破壞，常與系統(tǒng)性多器官血管炎、肺纖維化等有關(guān)。小鼠RA模型的研究表明，膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(collagen-induced arthritis，CIA)誘導(dǎo)成熟前B細(xì)胞的消耗，從而減輕疾病的嚴(yán)重程度，而疾病發(fā)生后B細(xì)胞的消耗并不影響疾病嚴(yán)重程度[22]。在人體中，由于使用利妥昔單抗對于B細(xì)胞消耗進(jìn)行治療的有效性已被證明，因此認(rèn)為B細(xì)胞參與RA的發(fā)病，其他研究也證明了Breg細(xì)胞的保護(hù)功能和治療潛力。Breg通過過繼輸注的方式進(jìn)入嵌合小鼠體內(nèi)，重新將Treg群調(diào)節(jié)到正常水平，同時通過抑制Th1和Th17的分化而緩解炎癥反應(yīng)，從而降低γ干擾素(interferon γ，IFN-γ)和白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-17細(xì)胞因子水平，并恢復(fù)Th1/Th2應(yīng)答平衡。膠原和抗CD40單克隆抗體刺激RA小鼠的B細(xì)胞可產(chǎn)生高水平的IL-10和低水平的IFN-γ[23]，將這些B細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移到免疫的受體小鼠中，通過抑制Th1細(xì)胞的分化而抑制CIA的誘導(dǎo)并改善了疾病程度。由于過繼轉(zhuǎn)移富含Breg細(xì)胞的T2-MZP B細(xì)胞給IL-10缺陷的小鼠不能阻止RA的進(jìn)展，因此B細(xì)胞的這種調(diào)節(jié)作用取決于IL-10的產(chǎn)生。此外，T2-MZP B細(xì)胞在抗原誘導(dǎo)的RA模型中對控制自身免疫和炎癥起關(guān)鍵作用。T2-MZP B細(xì)胞具有抑制Th1和Th17細(xì)胞的分化從而促進(jìn)Treg細(xì)胞分化的能力，并且這些細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移到該抗原誘導(dǎo)的RA模型中可抑制炎癥過程。除了T2-MZP B細(xì)胞外，離體擴(kuò)增的CD1dhiCD5+Breg細(xì)胞也可通過抑制Th17細(xì)胞的分化來延緩CIA的發(fā)作并改善疾病嚴(yán)重程度[24]。一項研究對RA患者與正常對照者的外周血中Breg細(xì)胞的功能和比例進(jìn)行比較，正常對照組中 CD24hiCD38hiBreg細(xì)胞抑制CD4+CD25-T細(xì)胞分化為Th1和Th17細(xì)胞，促進(jìn)其轉(zhuǎn)化成Treg細(xì)胞，其中部分通過產(chǎn)生IL-10而發(fā)揮作用。相比之下，RA患者的CD24hiCD38hiBreg細(xì)胞不能抑制Th17的分化和將原始T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為功能性Treg細(xì)胞。與正常對照組比較，RA組患者外周血CD24hiCD38hiBreg細(xì)胞的數(shù)量明顯降低。RA患者CD24hiCD38hiBreg細(xì)胞的量與疾病活動呈負(fù)相關(guān)[20]。上述研究表明，Breg細(xì)胞在緩解RA中發(fā)揮重要的作用。

3.2 Breg細(xì)胞與變態(tài)反應(yīng)性疾病

變態(tài)反應(yīng)性疾病是一類疾病，臨床表現(xiàn)具有異質(zhì)性。這些病癥通常由機(jī)體對致敏原的過度炎癥反應(yīng)而引起，并且可導(dǎo)致哮喘、變應(yīng)性鼻炎和特應(yīng)性皮炎等。促進(jìn)變應(yīng)性炎癥的特征性機(jī)制在于Th2極化的免疫應(yīng)答，其中一個重要原因是免疫調(diào)節(jié)過程的改變導(dǎo)致變應(yīng)性炎癥的發(fā)展。最近的研究報道了CD19缺乏增加和延長了接觸性超敏反應(yīng)過程，并發(fā)現(xiàn)了B細(xì)胞在變應(yīng)性皮膚疾病中的調(diào)節(jié)功能[25]。此外，將接觸性超敏反應(yīng)小鼠的脾臟CD1dhiCD5+B細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移至受體小鼠可以抑制接觸性超敏反應(yīng)[26]。除接觸性超敏反應(yīng)模型外， CpG注射后通過增加濾泡表型的分泌IL-10 的B細(xì)胞比例可減少晚期變應(yīng)性結(jié)膜炎模型中的炎癥反應(yīng)。將CpG處理的小鼠脾細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移至受體小鼠可抑制變應(yīng)原誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)[27]。其他研究表明，從蠕蟲感染的小鼠中分離的B細(xì)胞通過分泌IL-10控制致死性變態(tài)反應(yīng)或卵白蛋白誘導(dǎo)的氣道炎癥[28]，在人體中也證實蠕蟲感染可刺激B細(xì)胞分泌IL-10[29]。在各種人類變態(tài)反應(yīng)性疾病中，食物過敏是研究最多的一種。人類樣品與Breg細(xì)胞結(jié)合發(fā)現(xiàn)，體外用酪氨酸進(jìn)行特異性再刺激可導(dǎo)致乳汁過敏組中產(chǎn)生IL-10的CD5+B細(xì)胞減少，但在耐乳組中不變或增加[30]，這些報告表明Breg細(xì)胞在建立對致敏原耐受性方面發(fā)揮作用。此外，在蜂毒過敏患者中，自發(fā)發(fā)展為致敏原的耐受者和進(jìn)行免疫治療的患者在CpG培養(yǎng)72 h后較免疫治療前的患者的抗原特異性Bred細(xì)胞水平均升高[31]。此研究還提示Breg細(xì)胞在建立致敏原耐受中的重要性。最近一項關(guān)于哮喘患者Breg細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)，與健康對照組相比，用粉塵螨變應(yīng)原激活的CD4+T細(xì)胞與LPS刺激的B細(xì)胞共培養(yǎng)后用于哮喘患者產(chǎn)生的IL-10較少，表明哮喘患者Breg細(xì)胞功能缺陷[32]。另一組研究也顯示，變應(yīng)性鼻炎患者中CD24hiCD27+B細(xì)胞明顯減少[33]。總之，Breg細(xì)胞可能有助于抑制變態(tài)反應(yīng)性疾病和建立變應(yīng)原耐受性，但功能可能受損。用IL-10轉(zhuǎn)染的原代人B細(xì)胞分泌較少的IgE，其在變態(tài)反應(yīng)中起重要作用。因此，Breg細(xì)胞可成為變態(tài)反應(yīng)性疾病的治療策略，安全性較好。

3.3 Breg細(xì)胞在器官移植中的作用

關(guān)于器官移植排斥和耐受的研究進(jìn)展主要來自動物模型。在小鼠胰島和心臟MHC錯配的同種異體器官移植模型中，移植前異基因供體B淋巴細(xì)胞與CD40配體可阻斷誘導(dǎo)同種異體移植物存活時間的延長。在腎移植大鼠應(yīng)用供體B細(xì)胞可誘導(dǎo)腎移植的長期耐受[34]。采用CD45免疫抑制靶向治療來調(diào)節(jié)T細(xì)胞的發(fā)育和激活可導(dǎo)致(μMT)B細(xì)胞缺陷小鼠耐受性的喪失，過繼轉(zhuǎn)移B細(xì)胞其耐受性可恢復(fù)，表明器官移植的耐受作用需要宿主B細(xì)胞[35]。Ding等[36]研究證實，TIM-1是分泌IL-10+Breg細(xì)胞的表面標(biāo)志物，通過抗TIM-1抗體增強(qiáng)該群對Breg的分泌可延長胰島和心臟同種異體移植物的存活時間，移植前CD4+CD25+Treg細(xì)胞的消耗導(dǎo)致同種異體移植物排斥，表明耐受的誘導(dǎo)依賴于Breg和Treg細(xì)胞之間的相互作用。臨床研究發(fā)現(xiàn)，盡管CD19+CD24high CD38high未成熟B細(xì)胞參與對自身免疫性疾病的預(yù)防，但其在臨床腎移植中也發(fā)揮著重要作用[37]。關(guān)于這種現(xiàn)象直接作用的證據(jù)仍然缺乏，但這些研究表明這些細(xì)胞可作為耐受性相關(guān)性的生物標(biāo)志物。最近的一項關(guān)于這些細(xì)胞與臨床事件之間關(guān)系的縱向前瞻性研究表明，過渡性B細(xì)胞數(shù)量能保護(hù)受體免受急性排斥反應(yīng)[38]。另一項研究表明，在慢性抗體介導(dǎo)的排斥反應(yīng)中，活化與記憶B細(xì)胞的比例降低，免疫抑制活性受損。此外已有研究表明，CD24high CD27+IL-10+ B細(xì)胞對人類慢性移植物抗宿主病的過程具有調(diào)控作用[38]。目前，利用B細(xì)胞的消耗現(xiàn)象可防止免疫排斥反應(yīng)的發(fā)生，在誘導(dǎo)階段的耗盡策略可能有助于改變免疫B細(xì)胞譜和未成熟Breg細(xì)胞的再次出現(xiàn)，但在疾病后期或治療抗體介導(dǎo)的排斥反應(yīng)階段對Breg細(xì)胞群可能有害。另一方面要考慮的是B細(xì)胞調(diào)控在感染發(fā)展中的潛在不良反應(yīng)。B細(xì)胞消耗和Breg細(xì)胞的損害可能導(dǎo)致感染和某些病毒的再活化[39]。 研究發(fā)現(xiàn)腎移植患者中IL-10/TNF-α比值較低，提示移植物的功能障礙。最近的一項前瞻性研究發(fā)現(xiàn)，腎移植患者CD19+CD24hiCD38hiB細(xì)胞數(shù)與移植物排斥率的降低有關(guān)，證實Breg細(xì)胞在移植耐受中發(fā)揮重要作用[40]，這些研究支持Breg細(xì)胞作為生物標(biāo)志物，并在移植物耐受中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

3.4 Breg細(xì)胞與腫瘤

腫瘤的發(fā)生主要是免疫系統(tǒng)和癌癥干細(xì)胞之間的斗爭的結(jié)果。腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展取決于微環(huán)境變化，其中白細(xì)胞起關(guān)鍵作用?？沽鲂院椭铝鲂缘拿庖邫C(jī)制發(fā)生于癌癥發(fā)展的早期階段，其最終的凈效應(yīng)決定腫瘤是否發(fā)展。Breg細(xì)胞和Treg細(xì)胞等免疫抑制細(xì)胞的作用是促進(jìn)免疫耐受，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞逃逸?？鼓[瘤CD8+T細(xì)胞和NKC的浸潤以及Breg、Treg細(xì)胞和骨髓源性抑制細(xì)胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)水平的降低都導(dǎo)致腫瘤的抑制，反之則支持腫瘤生長。在腫瘤引流淋巴結(jié)中，增加B和T淋巴細(xì)胞的積累促進(jìn)淋巴管的生成，并加速腫瘤的轉(zhuǎn)移率[41]。此外，與未發(fā)生淋巴管增生且腫瘤生長很小的癌前B細(xì)胞缺陷型μMT小鼠相反，癌前Eμ-c-myc小鼠淋巴結(jié)中的B細(xì)胞積累量與淋巴結(jié)的擴(kuò)增和腫瘤的生長呈正相關(guān)。然而，在過繼輸注初始T2-MZP細(xì)胞后，B細(xì)胞缺陷型μMT小鼠的腫瘤生長加速，明顯證實了轉(zhuǎn)移性和抑制性B淋巴細(xì)胞在癌癥逃逸中的作用[42]。最近文獻(xiàn)表明，B淋巴細(xì)胞在腫瘤部位浸潤和積累，并在引流淋巴結(jié)中建立免疫抑制的微環(huán)境，導(dǎo)致對抗腫瘤免疫應(yīng)答和關(guān)鍵的淋巴網(wǎng)絡(luò)擴(kuò)張的抑制，從而促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。最近在攜帶4T1癌細(xì)胞的Balb/c小鼠中發(fā)現(xiàn)了腫瘤誘發(fā)Breg細(xì)胞的獨特B細(xì)胞亞群(tBreg細(xì)胞)，驗證了Breg細(xì)胞在癌癥中的特殊作用[43]，顯示癌癥根除性B細(xì)胞被腫瘤微環(huán)境中長存的癌細(xì)胞“劫持”并轉(zhuǎn)化為免疫抑制性Breg細(xì)胞。這些tBreg細(xì)胞不符合任何已知的Breg細(xì)胞表型，但類似于活化的成熟B2細(xì)胞。用高表達(dá)CD40、CD80、CD86、MHC I類和II類的tBreg細(xì)胞、非調(diào)節(jié)性CD4+T細(xì)胞和轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factor β，TGF-β)進(jìn)行培養(yǎng)能夠使產(chǎn)生CD4+CD25+FOXP3+Treg的細(xì)胞顯著增加，這反過來又抑制CD8+T細(xì)胞的增生，從而促進(jìn)乳腺癌的逃逸和轉(zhuǎn)移[44]。

研究表明，人類Breg細(xì)胞產(chǎn)生過多可導(dǎo)致腫瘤的侵襲性增強(qiáng)和患者的預(yù)后差。例如，與健康對照者相比，肝細(xì)胞癌患者明顯外周Breg細(xì)胞明顯增加[45]，非小細(xì)胞肺癌與IL-10+Breg細(xì)胞、CD4+CD25+/highCD127low/-Treg細(xì)胞的增加有關(guān)。此外，體外研究證實，肺癌細(xì)胞與淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)上調(diào)Treg細(xì)胞和Breg細(xì)胞表型。與未受腫瘤侵犯的相鄰組織相比，舌鱗狀細(xì)胞癌、胃癌和結(jié)腸直腸癌患者腫瘤本身Breg細(xì)胞增加，與Treg細(xì)胞的增加量呈正相關(guān)[46]。在黑素瘤和腎細(xì)胞癌治療過程中采用利妥昔單抗來消耗B細(xì)胞似乎無明顯的治療作用，同時抗CD20抗體是否有效耗盡Breg細(xì)胞仍然未知。但是，選擇性地消耗B細(xì)胞(包括抗CD20抗體，如利妥昔單抗、拓?fù)涿顾?、obinatuzumab等)或Bruton酪氨酸激酶(Bruton tyrosinek inase，Btk)、Lyn、PI3K-δ和Syk抑制劑以及針對其他靶標(biāo)(如CD22和CD19)的較新抗體都可能逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的浸潤作用，并減弱B細(xì)胞對抗腫瘤免疫反應(yīng)的作用。選擇性B細(xì)胞消耗是否可以與提高抗腫瘤免疫力的其他手段有效結(jié)合可能是進(jìn)一步研究的目標(biāo)。

4 展望與不足

綜上所述，在過去10年中， Breg細(xì)胞在抑制病理性免疫反應(yīng)中的作用已被廣泛認(rèn)可。Breg細(xì)胞在免疫系統(tǒng)起負(fù)調(diào)節(jié)作用，可以防止?jié)撛诘钠茐男宰陨砻庖叻磻?yīng)和保護(hù)性免疫應(yīng)答。然而，Breg細(xì)胞缺乏可能導(dǎo)致自身免疫反應(yīng)和其他炎癥性疾病，而太多的Breg細(xì)胞可能引起免疫抑制。因此，Breg細(xì)胞的數(shù)量是調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能的關(guān)鍵因素。小鼠和人類的多項研究證明，Breg細(xì)胞主要通過提供IL-10而抑制炎癥反應(yīng)。因此，IL-10不僅僅是識別Breg細(xì)胞的標(biāo)志物，而且也是Breg細(xì)胞免疫抑制的重要介質(zhì)。隨著近年來對Breg細(xì)胞研究的不斷深入，許多新的Breg細(xì)胞亞型和Breg細(xì)胞介導(dǎo)的抑制免疫反應(yīng)的機(jī)制逐漸闡明。雖然越來越多的Breg細(xì)胞亞型被相繼發(fā)現(xiàn)，但是對于Breg細(xì)胞的獨特表型和特異性標(biāo)志物并未明確。相對于動物模型的廣泛研究，Breg細(xì)胞在臨床疾病中的研究還有待加強(qiáng)，并且Breg在相關(guān)疾病的作用機(jī)制并未明確。因此，應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)對Breg細(xì)胞生物學(xué)和相關(guān)臨床疾病的研究，以更好地用于免疫相關(guān)性疾病的臨床治療。