中藥多糖的提取、分離純化及其含量測(cè)定方法研究

廖爽，楊朦朦

摘 要：中藥多糖的提取、分離純化及其測(cè)定方法的有效研究，一方面能夠憑借完善的制備流程，增強(qiáng)傳統(tǒng)中藥在藥效方面的制藥水準(zhǔn)，以此完善臨床醫(yī)療體系的構(gòu)建；另一方面則能夠憑借多糖提取的措施，鞏固中藥在降血脂、降血糖、抗衰老等方面的效果。本文基于中藥多糖的提取方法分類深入研究，在明確分離純化與含量測(cè)定方法的同時(shí)，期望能為后續(xù)中藥醫(yī)療體系的構(gòu)建提供良好參照。

關(guān)鍵詞：中藥多糖；提??；分離純化；含量測(cè)定；方法分析

1 中藥多糖的提取分析

1.1 溶劑提取法

溶劑提取法是從植物組織中提取多糖的常見方法，其中利用了多糖不容于乙醇的性質(zhì)，將多糖從植物組織中沉淀出來，以達(dá)到初步純化的目的。根據(jù)溶劑選擇的不同，可分為以下幾種方法：

（1）水提純沉法

水提純沉法是根據(jù)多糖大分子化合物的特性，選擇水與醇等極性強(qiáng)的溶劑。期間可用熱水與冷水兩種浸提方法，而后再將提取液弄錯(cuò)，待加入乙醇后便能將多糖從提取液中沉淀出來。其中，多糖提取率與水用量、提取溫度、固液比、提取時(shí)間與提取次數(shù)等具備關(guān)聯(lián)性。

（2）酸提法

此種方法是在水提純沉法的基礎(chǔ)上，為提升多糖提取率而提供的方法。期間，酸提法應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格控制酸度，以便在酸性較強(qiáng)的環(huán)境中避免多糖中糖苷鍵斷裂，所以除弱酸外，一般強(qiáng)酸不適用于酸提法。另外，此種方法的提取時(shí)間宜短，且溫度最好保持在50度以下。

（3）堿提法

部分多糖在堿液中具備更優(yōu)異的提取率，為避免在酸性溶液中造成多糖損失，通常堿提法會(huì)防止多糖降解，并加入氮?dú)饣蚺饸浠c等藥品，以此控制堿性濃度，避免堿性較強(qiáng)發(fā)生多糖水解狀況。

1.2 酶解法提取

（1）單一酶解法

單一酶解法是指使用單種酶對(duì)多糖進(jìn)行提取，以確保提取率有效提升，同時(shí)排除多余元素干擾的狀況。其中，經(jīng)常使用的試劑有蛋白酶與纖維素酶等。

（2）復(fù)合酶解法

復(fù)合酶解法是通過一定比例的纖維素酶、蛋白酶與果膠酶混合提供的溶劑，在此種溶劑使用期間，能夠使植物組織細(xì)胞的細(xì)胞壁劈裂，釋放出細(xì)胞壁內(nèi)活性多糖，而后再與復(fù)合酶溶液反應(yīng)，確保多糖被有效提取。此種酶解法與溶劑含量、酶解溫度、酶解時(shí)間、PH值等數(shù)據(jù)有直接影響。

1.3 物理強(qiáng)化法

（1）微波提取法

微波提取法是根據(jù)不同物質(zhì)吸收微波能力差異性，促使植物萃取體系中某些組分被加入，以此從物質(zhì)體系中被分離，融入萃取劑環(huán)境中，以此實(shí)現(xiàn)多糖提取的目的。比較溶劑與酶解法而言，微波提取法不宜造成多糖損失，且環(huán)境影響干擾較低。

（2）超聲提取法

超聲波是通過機(jī)械效能增加介質(zhì)運(yùn)動(dòng)，促使生物細(xì)胞組織破碎，從而將多糖成分融入溶劑內(nèi)，再利用空化效應(yīng)將多糖析溶出，以此確保多糖提取有效，且生物活性能夠保持不變。此種方法在提取時(shí)間方面具備效率性優(yōu)勢(shì)，且多糖提取率較高。

2 中藥多糖的分離純化分析

2.1 除蛋白分析

中藥多糖中除蛋白的分離純化方法中包括三氟三氯乙烷法、酶解法、三氯乙酸法與具備氯仿有機(jī)溶劑變性特點(diǎn)的Sevage法。其中，Sevage法除蛋白效果優(yōu)良，且實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單便捷，但無法有效去除多糖中的脂蛋白。期間，有實(shí)驗(yàn)以三氯乙酸法與Sevage法進(jìn)行比照分析，可知三氯乙酸法在脫蛋白質(zhì)方面的效果優(yōu)于Sevage法，且多糖損失率較低。

2.2 脫色分析

脫色反應(yīng)是指在重要多糖提取過程中，由于氧化反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致有色素生成，從而依據(jù)有色素的含量會(huì)影響多糖色譜分析與性質(zhì)測(cè)定的準(zhǔn)確性。故而，在分離純化過程中，脫色工藝流程是非常重要的處理步驟。

2.3 多糖分解

多糖分解在現(xiàn)階段實(shí)驗(yàn)環(huán)境中，有分級(jí)沉淀法、金屬鹽沉淀法、色譜分離法、膜分離法、電滲析法、超濾法等多種分解方法。目前在中藥多糖分離純化過程中，多采用凝膠柱層或離子交換色譜法兩種形式。

3 中藥多糖的含量測(cè)定方法

3.1 比色法

比色法包括咔唑一硫酸法、葸酮-硫酸法和苯酚一硫酸法測(cè)定多糖含量。目前比色法已廣泛應(yīng)用于多糖含量測(cè)定，特別是苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法應(yīng)用最廣。其原理是根據(jù)多糖在硫酸的作用下水解成單糖分子，并迅速脫水生成糖醛衍生物，再將其與苯酚或葸酮縮合成有色化合物，在適當(dāng)波長(zhǎng)下和一定濃度范圍內(nèi)，吸收值與糖濃度呈線性關(guān)系，從而可比色測(cè)定其含量。

3.2 滴定法

滴定法是多糖經(jīng)乙醇沉淀分離后，加酸、加熱水解成單糖，以次甲基蘭等做指示劑，滴定經(jīng)標(biāo)定過的堿性酒石酸銅溶液，根據(jù)樣液消耗的體積，計(jì)算其含量。本方法需在沸騰狀態(tài)下滴定，溫度和滴定速度對(duì)結(jié)果影響較大，且本法是一種還原滴定法，不能排除還原糖的干擾。后來陸續(xù)有人報(bào)道采用間接碘量法測(cè)定多糖的含量。間接碘量法可消除樣品中還原性雜質(zhì)對(duì)多糖含量測(cè)定的干擾，所測(cè)結(jié)果更接近實(shí)際多糖含量。如某實(shí)驗(yàn)中采用高錳酸鉀滴定法測(cè)定多糖含量，還原劑為斐林試劑，滴定劑為0.02mol/L高錳酸鉀，并進(jìn)行方法專屬性考察。結(jié)果為陰性對(duì)照試驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為4.6%，精密度試驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為3.9%，平均回收率為102.8%。得出結(jié)論本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，精密高、重現(xiàn)性好，可用于肝速康膠囊中云芝多糖的含量檢測(cè)。

3.3 高效液相色譜法

國(guó)內(nèi)近年來在中草藥多糖含量測(cè)定方面亦使用HPLC法。如選用凝膠排斥色譜柱為分離柱及示差折光檢測(cè)器，以不同分子量的右旋糖酐作標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)測(cè)定香菇、豬苓多糖制劑和金耳提取液多糖的分子量分布及含量，簡(jiǎn)化了操作步驟，提高了檢測(cè)效率，具有分析速度快，分離效能、選擇性、靈敏度高等方面的優(yōu)點(diǎn)的。

3.4 氣相色譜法

氣相色譜法測(cè)定多糖可通過衍生物法增加其揮發(fā)性，一般將多糖酸水解物或甲醇醇解轉(zhuǎn)化為硅烷化產(chǎn)物或乙?；a(chǎn)物，常以甘露醇或肌醇為內(nèi)標(biāo)，用已知的各種單糖作標(biāo)準(zhǔn)。與其它方法比較，該法所需樣品極少，較靈敏可靠。如某實(shí)驗(yàn)中，用氣相色譜法測(cè)定了蘆薈及蘆薈干粉樣品中的多糖。實(shí)驗(yàn)以木糖醇為內(nèi)標(biāo)物，采用0V-225，0S-138為固定液的色譜柱，使多糖水解為單糖后的衍生物得到分離。結(jié)果表明：未經(jīng)水解的蘆薈中含有少量的單糖，主要為葡萄糖；水解后的單糖主要為甘露糖和葡萄糖。這與用乙醇沉淀多糖后的測(cè)定結(jié)果（即蘆薈及蘆薈干粉中的多糖主要為甘露聚糖和葡甘露聚糖）是一致的。

3.5 高效毛細(xì)血管電泳法

高效毛細(xì)血管電泳法是近十幾年來發(fā)展的一種快速、高效、簡(jiǎn)便、高分辨率及樣品和溶劑消耗少，分離和分析生物活性物質(zhì)的方法。本法原主要應(yīng)用于蛋白質(zhì)、多肽核酸等大分子物質(zhì)的分析，而在糖分析中應(yīng)用較少。近年來人們利用高效毛細(xì)血管電泳，通過柱前衍生或不經(jīng)衍生直接或間接的紫外檢測(cè)、熒光檢測(cè)、電極脈沖安培檢測(cè)對(duì)多糖進(jìn)行分析，取得一定效果。

4 結(jié)束語(yǔ)

不同種類的多糖在現(xiàn)階段中藥臨床中，不但能夠作為抗腫瘤藥物進(jìn)行研究，同時(shí)還能抑制細(xì)胞分裂，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)速率，為醫(yī)療體系的構(gòu)建提供更加優(yōu)異的藥用價(jià)值，并且通過多糖類藥品的制備，也可以優(yōu)化傳統(tǒng)中藥研制流程，從而向更加便捷的方向發(fā)展，提升中藥在臨床醫(yī)學(xué)中的地位。

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