梵凈山野生藤茶主要有機成分研究

梁琍 邱嵐 呂廷紅

摘 要：采用分光廣度法分別對梵凈山野生藤茶中的可溶性糖、黃酮類化合物、茶多酚3種有機成分的含量進行了研究分析。結(jié)果表明，野生藤茶中的可溶性糖含量為6.10%，總黃酮34.30%，茶多酚22.00%。該研究可為梵凈山野生藤茶的進一步開發(fā)提供了科學的理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：藤茶；有機成分；梵凈山

中圖分類號 TS272 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2018）21-0031-03

Study on the Main Organim for Natural Rattan Tea from Fanjing Mountain

Liang Li et al.

（College of Agro-Forestry Project & Program，Tongren University，Tongren 554300，China）

Abstract：Spectrophotometric method was adopted to analyze the content of soluble sugar，flavonoids and tea polyphenols.The results showed that the soluble sugar content in wild rattan tea was 6.10 %，the total flavonoids content was 34.30 % and the tea polyphenols content was 22.00 %.This results provide the scientific basis for the further study natural rattan tea stand on on Fanjing Mountain.

Key words：Vine tea；Organism；Fanjing Mountain

野生藤茶是葡萄科蛇葡萄屬中的一種野生藤本植物，學名為顯齒蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata），俗稱山甜茶、白茶、甘露茶、白毛猴等[1]，是一種類似于茶的植物。整株可以藥用，味道較甘甜、性涼，具有清熱解毒、祛風濕、強筋骨等功效，還可以治療感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、黃疸型肝炎、皰癤等癥狀[2]。

近年來，隨著科學技術(shù)水平的發(fā)展，學者們對藤茶的各種特性進行了研究，發(fā)現(xiàn)藤茶不僅可以作為藥物，還可以作為飲品，對身體起著保健的作用[3]。藤茶中主要含有可溶性糖、總黃酮、茶多酚等營養(yǎng)物質(zhì)[4]，具有調(diào)節(jié)免疫，抗氧化性，降血糖，降血壓，降血脂等功效，對心血管疾病也起到很大的作用[5]。茶多酚（Tea Polyphenols，TP）是茶葉中以兒茶素為主的多酚類化合物的總稱，是形成茶葉色香味的主要成分之一，也是茶葉中有保健功能的主要成分之一，是一種目前尚不能人工合成的多功能、高效能天然抗氧化劑，其抗氧化性能比維生素E的抗氧化效價高10～20倍，而且無毒，在食品、保健、醫(yī)藥等領(lǐng)域都具有非常廣泛的應(yīng)用價值[6]。

到目前為止，有關(guān)梵凈山野生藤茶的成分研究方面的報道仍較少[7]。為此，本研究通過對梵凈山野生藤茶中可溶性糖含量、總黃酮含量、茶多酚含量等方面的測定，探明其主要有機成分，為今后梵凈山藤茶資源的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 研究區(qū)概況

梵凈山位于貴州省東部，總面積約為567km2，海拔2572m，是中國較早加入聯(lián)合國教科文組織人與生物圈計劃（MAB）的自然保護區(qū)之一。處于我國亞熱帶范圍的中心地帶，具有中亞熱帶季風山地濕潤氣候特征。植物區(qū)系比較復(fù)雜，是1個比較豐富和古老的溫帶、亞熱帶植物區(qū)系。植被類型豐富多樣，主要有針葉林、闊葉林、竹林、灌木林、沼澤5種類型。植物資源特別豐富，高達1800種，其中可食用和藥用的有幾百種以上[8]。野生藤茶廣泛分布在梵凈山壩盤、太平、桃映等地。

2 材料與方法

2.1 材料 野生藤茶（夏季采自梵凈山），干燥后粉碎，密封保存于干燥的環(huán)境下。

2.2 試劑 蒽酮、蘆丁、無水乙醇、硝酸鋁、硝酸鈉、氫氧化鈉、濃硫酸、磷酸、乙酸乙酯、酒石酸鉀鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、硫酸亞鐵等試劑均為分析純。

2.3 儀器設(shè)備 GUTEL超聲波清洗器，101-3型電熱鼓風干燥箱，F(xiàn)W80高速萬能粉碎機，KQ-C玻璃儀器氣流烘干器，電子分析天平，SHZ-DIII予華牌循環(huán)水真空泵，T6新世紀紫外可見分光光度計。

2.4 實驗方法

2.4.1 材料預(yù)處理 將藤茶去掉雜質(zhì)、切碎，放入110℃烘箱內(nèi)烘15min，然后調(diào)到70℃過夜。常溫下用7倍體積的乙酸乙酯浸泡樣品4h，用蒸餾水清洗殘留有機溶劑至樣品無味，再將樣品放入70℃烘箱內(nèi)烘干至恒重得到脫脂樣品，粉碎機粉碎過50目篩，粉末至室溫密封保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4.2 藤茶中可溶性糖含量的測定[9]

2.4.2.1 可溶性糖的提取 材料預(yù)處理→準確稱取50mg的樣品→倒入10mL刻度的離心管中加入4mL80%的乙醇→放入80℃水浴鍋中不停攪拌40min→用離心機離心10min（轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)）取其上清液，剩余的殘渣加2mL80%乙醇反復(fù)2次，合并上清液→在上清液中加入10mg的活性炭，在80℃脫色30min→脫色過后倒入10mL容量瓶中用80%的乙醇定容至刻度，過濾后取濾液→吸取濾液1mL放進帶塞試管中→加入5mL蒽酮試劑混和均勻，蓋上塞子在沸水浴中煮沸10min→取出來以后立刻用水冷卻至室溫，用10mm的比色杯，在波長為625nm處，以試劑空白溶液為參照組，測吸光度。此操作重復(fù)3次，取其平均值。

2.4.2.2 標準曲線的繪制和樣品測定 準確稱取在80℃烘箱中烘烤到恒重的葡萄糖100mg，用80%的乙醇配制成100mL溶液放入容量瓶中搖晃均勻，分別吸取0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL放入20mL的有塞試管中，每一只試管中各加入5mL的蒽酮試劑后搖勻，蓋上塞子，在有沸水的水浴鍋中煮沸10min，取出來后馬上用水冷卻直至達到室溫。在波長為625nm下，用試劑空白溶液為參照組，測量吸光度A（紫外分光光度計），葡萄糖含量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，見圖1。

從標準曲線圖得到回歸方程式為：A=0.0050x+0.0038，R2=0.9992，藤茶中可溶性糖含量的測定方法與測定繪制標準曲線的方法相同。

可溶性糖含量的計算。按下列公式計算藤茶中可溶性糖的含量：

樣品中物質(zhì)含量（%）=[（C×Vt）/FW×VS×103]×100

式中：C——由標準曲線所生成的回歸方程所求出的物質(zhì)含量（μg）；

Vt——提取液總的體積；

Fw——樣品的重量；

Vs——測量時的體積；

103——重量單位換算系數(shù)。

2.4.3 藤茶中總黃酮含量的測定[10]

2.4.3.1 總黃酮的提取 精確稱量1.0g藤茶葉粉末→放進100mL的三角燒瓶中→加入40%的乙醇，料液比為1∶45→在溫度為80℃的超聲波下提取45min→趁熱減壓抽濾，加水定容至100mL容量瓶中，作為備測液。

2.4.3.2 標準曲線的繪制和樣品測定 精確稱取蘆丁0.023g，用30%乙醇溶解過后定容至100mL。拿7只有塞試管，各加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL蘆丁溶液，加入5%NaNO3溶液0.3mL，搖動均勻，靜置6min后再加入10%Al（NO3）3溶液0.3mL，搖動均勻，靜置6min后再加入4%NaOH溶液4.0mL，用30%乙醇定容到刻度，搖動均勻。過10min后，在波長為510nm處測定，以試劑空白溶液為參照組，測吸光度。蘆丁含量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，見圖3。

從標準曲線圖得到回歸方程式為：A=0.0002x+0.0008，R2=0.9988。藤茶中總黃酮含量的測定方法與測定繪制標準曲線的方法相同。

總黃酮含量的計算。

按下列公式計算藤茶中總黃酮的含量：

樣品中物質(zhì)含量（%）=[（C×Vt ）/FW×VS×103]×100

式中：C——由標準曲線所生成的回歸方程所求出的物質(zhì)含量（μg）；

Vt——提取液總的體積；

Fw——樣品的重量；

Vs——測量時的體積；

103——重量單位換算系數(shù)。

2.4.4 藤茶中茶多酚含量的測定[11]

2.4.4.1 茶多酚的提取 精確稱量10g藤茶葉粉末，放進三角燒瓶中，加入沸水50mL，放入70℃水浴鍋中侵提55min，取出稍微冷確，倒出上清液，再加入50mL沸水，繼續(xù)在70℃水浴鍋中侵提55min，把兩次侵提液和殘渣一起倒入離心試管中，放入離心機中，轉(zhuǎn)速為5000×g離心20min，得到待測液。取0.1mL待測液放入10mL容量瓶中，加入1.9mL的蒸餾水，再加入2mL酒石酸鐵溶液和6mL磷酸緩沖液，混合均勻，在波長為540nm處測定，以試劑空白溶液為參照組，測吸光度。此操作重復(fù)3次，取其平均值。

2.4.4.2 標準曲線和繪制和樣品測定 精確稱取沒食子酸標準樣品0.025g，加蒸餾水溶解后并轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中定容。分別在6只100mL容量瓶中加入沒食子酸標準樣品0、1、2、3、4、5mL，加入5mL蒸餾水和5mL酒石酸亞鐵溶液，充分混合均勻后，再加入pH值等于7.5的磷酸緩沖液定容到25mL，在波長為540nm處測定，以試劑空白溶液作參照組，測吸光度。沒食子含量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，見圖4。

從標準曲線圖得到回歸方程式為：A=2.2200x+0.0073，R2=0.9990。藤茶中茶多酚含量的測定方法與測定繪制標準曲線的方法相同。

茶多酚含量的計算，按下列公式計算藤茶中茶多酚的含量：

樣品中物質(zhì)含量（%）=[（C×Vt ）/FW×VS×103]×100

式中：C——由標準曲線所生成的回歸方程所求出的物質(zhì)含量（μg）；

Vt——提取液總的體積；

Fw——樣品的重量；

Vs——測量時的體積；

103——重量單位換算系數(shù)。

2.5 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)分析采用Excel統(tǒng)計分析軟件。

3 結(jié)果與分析

經(jīng)測定得出：梵凈山野生藤茶中可溶性糖含量為6.10%，總黃酮為34.30%，茶多酚為20.00%。梵凈山藤茶中3種有機成分與鄰近地區(qū)張家界的相比，可溶性糖含量遠低于張家界，總黃酮略高于張家界，而茶多酚與張家界相差不大[13]。造成此情況的原因有可能是由于各地藤茶的生長環(huán)鏡不同，溫度和濕度的高低不同，導(dǎo)致每個地方藤茶中可溶性糖含量不同。因為土壤水分脅迫程度對藤茶中可溶性糖含量有顯著的影響，季節(jié)不同，也會影響藤茶中可溶性糖的含量。由于梵凈山野生藤茶主要生活在海拔400～1300m的山地云霧林叢中，這里光照時間較短、空氣濕度較大，這些特點都不利于糖類在植物體類的堆積，導(dǎo)致梵凈山野生藤茶中糖的含量相對偏低。

4 結(jié)論與討論

通過對梵凈山野生藤茶中3種有機成分的測定，得出其可溶性糖的含量為6.1%，總黃酮為34.3%，茶多酚為22.00%?？傸S酮具備抵抗血栓，降低血脂，保護肝脹、降低血糖、抗炎癥、鎮(zhèn)痛和升高免疫功能的作用，茶多酚具有抵抗癌癥、抵抗輻射、降低血糖和血脂、預(yù)防心血管疾病等多種保健和藥理功能，還具備抗氧化的作用。因此，梵凈山野生藤茶中是一種集營養(yǎng)保健和藥理為一體的，具有開發(fā)價值的藥食兩用植物。同時野生藤茶加工的方法簡單，不需要大成本的投入，所以合理開發(fā)梵凈山野生藤茶具有較高的經(jīng)濟價值。

參考文獻

[1]王文采.葡萄科的新發(fā)現(xiàn)[J].植物分類學報，1979，17（3）：73.

[2]熊璞，姚茂君，肖凱軍.藤茶中二氫楊梅素的提取工藝研究[J].現(xiàn)代食品科技，2009，25（8）：907-910.

[3]張學娟.藤茶的形態(tài)學、生物學特性及主要化學成分研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學，2008.

[4]劉慧穎，崔秀明，劉迪秋，等.顯齒蛇葡萄的化學成分及藥理作用研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2016，44（27）：135-138.

[5]覃驪蘭.藤茶的化學成分及藥理作用研究進展[J].上海中醫(yī)藥雜志，2008，42（6）：94-96.

[6]劉煥云.Ca2+沉淀法提取茶多酚的方法研究[J].廣州食品工業(yè)科技，2004，3：26-28.

[7]楊天友，李剛鳳，熊冬華，等.梵凈山野生藤茶營養(yǎng)成分分析[J].食品工業(yè)，2017，38（4）：278-280.

[8]周政賢.梵凈山研究[M].貴陽：貴州人民出版社，1990.

[9]張志良，瞿偉菁，李小方.植物生理學實驗指導(dǎo)[M].北京：高等教育出版社，2009：103-104.

[10]胡靜麗，陳健初.楊梅葉黃酮類化合物最佳提取工藝研究[J].食品科學，2003，24（1）：96-99.

[11]中國科學院上海植物生理研究所.現(xiàn)代植物生理學實驗指南[M].北京：科學出版社，2004，223-224.

[12]熊皓平，何國慶，楊偉麗，等.顯齒蛇葡萄生化成分分析[J].中國食品學報，2004，4（3）：58-71.

（責編：張宏民）