PIK3CA突變影響因素對(duì)鱗狀細(xì)胞肺癌預(yù)后的影響*

陸乘俊，肖華，金海，王曉偉，姚仕華，施博文

（上海長(zhǎng)海醫(yī)院 1.胸外科，2.呼吸與危重癥學(xué)科，上海 200433）

流行病學(xué)研究顯示鱗狀細(xì)胞肺癌的發(fā)病率接近0.05%～0.16%，特別是在吸煙人群中發(fā)病率更高[1]。類磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylino-sitol 3-kinases,PI3Ks）基因突變可以導(dǎo)致惡性腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞增殖調(diào)控、癌細(xì)胞分化及侵襲等病理特性的改變，導(dǎo)致惡性腫瘤病情的進(jìn)展[2-4]。為了進(jìn)一步揭示PIK3CA基因突變與肺癌的關(guān)系，為臨床上肺癌的預(yù)后評(píng)估提供參考，本研究選取81例鱗狀細(xì)胞肺癌患者，探討PIK3CA基因突變與臨床病理特征及生存預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年2月-2016年2月于上海長(zhǎng)海醫(yī)院收治的鱗狀細(xì)胞肺癌患者81例。其中，男性48例，女性33例；年齡24～68歲，中位年齡51歲。根據(jù)PIK3CA突變情況將患者分為PIK3CA突變組和未突變組，分別為8和33例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前接受放化療；②經(jīng)病理確診；③經(jīng)過肺葉或全肺根治性切除術(shù)；④術(shù)后接受以鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療；⑤臨床病理資料保存完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①標(biāo)本不符合檢測(cè)要求；②依從性差，不配合治療隨訪。同時(shí)選取同患者癌旁組織（≥5 cm）作為對(duì)照。患者及家屬均知情同意并簽署同意書。

1.2 方法

取凍存已裂解的血清細(xì)胞裂解液，室溫放置5 min使其完全溶解，每1 ml的Trizol試劑裂解的樣品中加入0.2 ml的氯仿，手動(dòng)劇烈振蕩管體15 s后，15～30℃孵育2～3 min。4℃下1 500 r/min離心15 min，將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。于4℃下1 500 r/min離心10 min，加入逆轉(zhuǎn)錄酶之前先70℃干浴3 min，終溶液即為cDNA溶液，配置反應(yīng)體系：上游引物1μl，下游引物3μl，Taq聚合酶 2μl，cDNA5μl，SYBR Green 110μl，ddH2O 30μl，總體積50μl。

檢測(cè)儀器使用ABOI2008RT-PCR儀（日本Panasonic公司），反應(yīng)產(chǎn)物采用樹脂脫鹽，經(jīng)自動(dòng)點(diǎn)樣儀的spector芯片，采用基質(zhì)輔助激光吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)，Kaplan-Meier法繪制生存曲線，比較用Log-rank χ2檢驗(yàn)，預(yù)后影響因素采用Cox回歸模型，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PIK3CA基因突變情況

對(duì)81例石蠟包埋肺癌組織提取進(jìn)行檢測(cè)，共有66例提取DNA成功，成功率為81.48%；81例癌旁組織提取成功68例，成功率83.95%；肺癌組織和癌旁組織同時(shí)擴(kuò)增PIK3CA外顯子9和20的例數(shù)分別為41和43例，擴(kuò)增效率分別為62.12%和63.24%。

同時(shí)擴(kuò)增出PIK3CA外顯子9和20的癌旁組織和肺癌組織，外顯子9中有5例出現(xiàn)單個(gè)堿基突變，外顯子20中有3例出現(xiàn)單個(gè)堿基突變，均為肺癌組織。肺癌組織PIK3CA基因突變率為19.51%，癌旁組織PIK3CA無基因突變，基因突變率為0.00%，兩者基因突變率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.147，P=0.000）。

2.2 PIK3CA基因突變與病理特征的關(guān)系

不同性別、年齡、分化程度、TNM期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者PIK3CA基因突變率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表 1。

表1 PIK3CA基因突變與病理特征關(guān)系

2.3 PIK3CA基因突變與未突變組患者中位生存期比較

PIK3CA基因突變組患者中位生存期為14個(gè)月，生存率為37.50%，PIK3CA基因未突變組患者中位生存期為26個(gè)月，生存期為73.91%，經(jīng)Log-rank χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=32.915，P=0.000）。見附圖。

2.4 鱗狀細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的影響因素分析

將患者性別、年齡、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及PIK3CA基因突變作為自變量，患者預(yù)后及生存時(shí)間作為因變量，進(jìn)行Cox回歸分析。結(jié)果顯示：分化程度、TNM分期及PIK3CA基因突變是影響患者預(yù)后的影響因素（P＜0.05）。見表2。

附圖 PIK3CA基因突變與未突變組患者生存曲線比較

表2 多因素分析參數(shù)

3 討論

肺癌特別是鱗狀細(xì)胞癌容易早期發(fā)生淋巴結(jié)或者血行的轉(zhuǎn)移，臨床預(yù)后較差[5-6]。一項(xiàng)包含了124例樣本量的臨床回顧性隨訪研究顯示，鱗狀細(xì)胞癌的5年生存率＜35%，中位生存時(shí)間＜32個(gè)月[7-8]。而近年來越來越多的基礎(chǔ)研究顯示，在影響到肺癌的發(fā)病或者臨床預(yù)后的相關(guān)因素中，基因或者表觀遺傳學(xué)的改變可能是促進(jìn)肺癌臨床預(yù)后不佳的重要風(fēng)險(xiǎn)因素[9-10]。

PIK3CA突變可以促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡率的下降，抑制免疫監(jiān)察細(xì)胞對(duì)于癌細(xì)胞的殺傷作用，并可以在影響到癌細(xì)胞的生存微環(huán)境或者氧化應(yīng)激障礙等方面發(fā)揮作用，進(jìn)而促進(jìn)鱗狀細(xì)胞癌臨床分期、組織學(xué)分型等病理過程的進(jìn)展[11-12]。

本研究采用基因擴(kuò)增法進(jìn)行了相關(guān)PIK3CA突變基因的擴(kuò)增，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在鱗狀細(xì)胞癌癌旁組織中并沒有發(fā)現(xiàn)明顯的PIK3CA突變情況，而在癌原發(fā)病灶組織中，PIK3CA突變情況較為明顯，基因突變的陽性率平均20%左右，提示PIK3CA突變可能參與到了肺癌的發(fā)生發(fā)展過程中。PIK3CA突變能夠在影響到磷酸激酶的磷酸化、三磷酸肌醇的修飾或者干預(yù)肺癌細(xì)胞基因的轉(zhuǎn)錄翻譯活性等方面，發(fā)揮了一定的刺激作用，從而促進(jìn)了鱗狀細(xì)胞癌的病情進(jìn)展[12]。楊熹、王娜等[13-14]通過收集分析了82例樣本量的肺底部鱗狀細(xì)胞癌的PCR檢測(cè)資料，發(fā)現(xiàn)其癌基因的突變率為15%～20%，且患者的病情越嚴(yán)重、手術(shù)效果越差或者遠(yuǎn)期生存預(yù)后越差，相關(guān)基因的陽性突變率越高，這與本研究結(jié)論較為相似。但本研究并未發(fā)現(xiàn)PIK3CA突變與癌組織分化細(xì)胞、臨床分期或者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，提示相關(guān)臨床特征不影響PIK3CA突變效果，PIK3CA突變主要與患者的遺傳表觀學(xué)改變或者父系或者母系的遺傳攜帶等有關(guān)[14]。本研究發(fā)現(xiàn)PIK3CA基因突變組患者中位生存期較差，生存時(shí)間較短，提示PIK3CA基因突變可以作為臨床上評(píng)估肺癌患者臨床預(yù)后的重要指標(biāo)。Cox回歸分析顯示分化程度、TNM分期及PIK3CA基因突變是影響患者預(yù)后的影響因素，PIK3CA基因的突變對(duì)于惡性腫瘤臨床預(yù)后的影響，主要考慮其通過癌細(xì)胞的不同特性的影響，或者在癌細(xì)胞的治療敏感性、程序性凋亡的發(fā)生等方面發(fā)揮一定的作用，導(dǎo)致不良預(yù)后的發(fā)生。

綜上所述，鱗狀細(xì)胞肺癌組織PIK3CA基因突變高于癌旁組織，但與病理特征無明顯關(guān)系，PIK3CA基因突變患者預(yù)后較未突變者差。