絕經(jīng)后女性2型糖尿病患者的DKK1蛋白表達水平及其臨床意義*

徐海洋，周瓊，李軍，李思源，孫侃，常向云，王曉麗，胡穎

（1.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 內(nèi)分泌代謝科，新疆 石河子 832000；2.新疆第二師二十九團醫(yī)院 新疆 庫爾勒市841000；3.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院，新疆 石河子 832000；4.新疆醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830000）

2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus, T2DM）是一種遺傳和環(huán)境因素共同作用而形成的多基因遺傳性疾病，主要在基因缺陷的基礎(chǔ)上存在胰島素抵抗（insulin resistance,IR）和胰島素分泌障礙[1]。LIU等[2]研究表明Wnt信號通路異?？赡芘c器官纖維化、代謝綜合征、骨相關(guān)疾病及腫瘤等多種疾病的發(fā)生密切相關(guān)。DKK1蛋白是Wnt信號通路拮抗劑，可抑制信號的傳導(dǎo)，導(dǎo)致Wnt信號通路異常。Wnt信號通路中DKK1在絕經(jīng)后女性體內(nèi)的表達水平乃至在絕經(jīng)后T2DM女性體內(nèi)的表達水平都鮮有報道。本文通過觀察Wnt信號通路中DKK1蛋白在絕經(jīng)后T2DM女性患者體內(nèi)的表達并分析其與IR及胰島β細胞功能的關(guān)系，為絕經(jīng)后女性T2DM的臨床防治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年10月-2017年10月于石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院和新疆維吾爾自治區(qū)石河子市第十五社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心住院的絕經(jīng)后女性患者作為研究對象，行OGTT試驗后分為T2DM組和糖耐量正常（normal glucose tolerance,NGT）組。其中T2DM組患者50例，平均年齡（65.40±4.60）歲；NGT組患者50例，平均年齡（66.66±5.84）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①T2DM的診斷符合1999年世界衛(wèi)生組織制定的糖尿病診斷準(zhǔn)則；②意識清楚，語言表達能力正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①1型糖尿病、自身免疫性疾?。虎趪?yán)重肝腎功能異常、嚴(yán)重心腦血管疾患、腫瘤、風(fēng)濕免疫病及血液病等?；颊呔炇鹬橥鈺?。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料及常規(guī)生化指標(biāo)測定 按統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)對患者進行臨床資料的測量，包括年齡、身高、體重、收縮壓（systolic blood pressure, SBP）及舒張壓（diastolic blood pressure, DBP）；計算BMI=體重（kg）/[身高（m）]2；全自動生化分析儀(日本日立株式會社，型號：7071型)測定空腹血糖（fasting plasma glucose, FPG）、果糖胺（Froctosamine, FMN）、膽固醇（total cholesterol,TC）、三酰甘油（Triglyceride, TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein-C, LDL-C）及高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein-C, HDL-C）等生化指標(biāo)；D10全自動糖化血紅蛋白測定儀用高壓液相色譜法（美國伯樂公司）測定糖化血紅蛋白（hemoglobin a1c, HbA1c）。

1.2.2 IR及胰島β細胞功能測定及計算 全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀（德國羅氏公司，型號：E710型）測定空腹胰島素（fasting insulin, FINS）、空腹C肽（fasting C-peptide, FCP）；胰島素敏感指數(shù)（insulin sensitivity index, ISI）=1/FPG（mmol/L）×FINS（mIU/L）[3]；胰島素抵抗指數(shù)（insulin resistance index, HOMA-IR）=FPG（mmol/L）×FINS（mIU/L）/22.5；胰島素β細胞 功 能（insulin βcell function index, HOMA-β）=20×FINS（mIU/L）/[FPG（mmol/L）-3.5]（%）[4]。

1.2.3 DKK1蛋白測定 按照試劑盒說明書進行操作，采用雙抗體夾心ELISA法測定DKK1蛋白，試劑盒購于廣東伊萊瑞特生物科技有限公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）或中位數(shù)和四分位間距M（P25，P75）表示，比較用t檢驗或秩和檢驗。相關(guān)性分析采用Pearson法或Spearman法，影響因素分析采用逐步回歸分析法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般臨床資料比較

兩組患者年齡、SBP、DBP、BMI、TG、LDL-C及HDL-C比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），說明基線齊，具有可比性；兩組患者FPG、FMN、HbA1c及TC比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 兩組患者IR及胰島β細胞功能比較

兩組患者FCP、HOMA-β、ISI及HOMA-IR比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與NGT組相比，T2DM組HOMA-IR水平較高；FCP、ISI及HOMA-β水平降低。見表2。

2.3 兩組患者血清DKK1蛋白比較

NGT 組 DKK1 蛋白水平為（209.37±32.35）pg/ml，T2DM組為（232.97±39.31）pg/ml。兩組患者血清DKK1蛋白比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.438，P=0.017），T2DM 組較 NGT組高。見附圖。

2.4 DKK1蛋白與IR及胰島β細胞功能指標(biāo)的相關(guān)性

對DKK1蛋白與IR及胰島β細胞功能指標(biāo)的相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，DKK1蛋白與FCP呈負相關(guān)（r=-0.280，P=0.022），與 HOMA-IR呈正相關(guān)（r=0.256，P=0.037）。

表1 兩組患者一般臨床資料比較 （n =50，±s）

表1 兩組患者一般臨床資料比較 （n =50，±s）

FMN/（umol/L，±s）NGT組 66.66±5.84 133.78±13.23 81.22±14.33 25.83±3.74 5.63（4.91，5.99） 239.74±36.54 T2DM組 65.40±4.60 134.08±8.00 78.40±11.69 26.07±2.33 9.36（7.88，10.40） 337.66±87.31 t/Z值 1.199 -0.137 1.055 -0.379 -7.332 -7.315 P值 0.234 0.891 0.294 0.705 0.000 0.000組別 年齡 /（歲，±s）SBP/（mmHg，±s）DBP/（mmHg，±s）BMI/（kg/m2，±s）FPG/[mmol/L，M（P25，P75）]HDL-C/（mmol/L，±s）NGT 組 6.23±0.92 1.78±0.54 4.57±0.75 2.84±0.59 1.18±0.34 T2DM 組 8.70±1.76 1.99±0.58 5.01±0.98 3.08±0.83 1.21±0.31 t/Z值 -8.814 -1.873 -2.507 -1.703 -0.409 P值 0.000 0.064 0.014 0.092 0.683組別HbA1c/（%，±s）TG/（mmol/L，±s）TC/（mmol/L，±s）LDL-C/（mmol/L，±s）

表2 兩組患者IR及胰島β細胞功能比較 （n =50）

附圖 兩組患者血清DKK1蛋白水平比較 （n =50，±s）

2.5 多元線性逐步回歸分析

以FCP為應(yīng)變量，以年齡、SBP、DBP、BMI、FPG、FMN、TG、TC、LDL-C、HDL-C 及 DKK1為自變量，進行多元線性逐步回歸分析，結(jié)果顯示FPG、FMN及DKK1是FCP的影響因素（P＜0.05）。以HOMA-IR為應(yīng)變量，以年齡、SBP、DBP、BMI、FPG、FMN、TG、TC、LDL-C、HDL-C及 DKK1為自變量，進行多元線性逐步回歸分析，結(jié)果顯示FPG、DKK1是 HOMA-IR 的影響因素（P＜0.05）。見表 3、4。

表3 以FCP為應(yīng)變量的多元線性回歸分析

表4 以HOMA-IR為應(yīng)變量的多元線性回歸分析

3 討論

T2DM作為多基因、多因素且具有高度的遺傳異質(zhì)性的全身性疾病，可損害機體眾多器官、組織，其發(fā)病機制至今還沒有完全闡明，主要表現(xiàn)為IR和胰島素分泌障礙[5]。我國糖尿病患者數(shù)已躍居世界第一，且患病率呈逐年遞增趨勢，其中T2DM占大多數(shù)，世界衛(wèi)生組織預(yù)測，到2025年我國T2DM患者將超過1.3億[6]。對T2DM發(fā)病機制的進一步進行研究，有利于對該疾病的診治。

多數(shù)T2DM患者同時存在嚴(yán)重的糖代謝紊亂和明顯的脂代謝紊亂，它們有共同的代謝改變基礎(chǔ)——IR[7]。IR的發(fā)生涉及多個信號通路，是一種多位點、多層次胰島素信號共同作用異常的狀態(tài)[8]。近年研究發(fā)現(xiàn)，Wnt信號通路參與調(diào)節(jié)胰島β細胞的形態(tài)及功能，影響胰腺細胞功能，調(diào)節(jié)胰島素分泌[9]。異常的Wnt信號通路與IR和T2DM的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[10-11]。DKK1蛋白作為Wnt信號通路中的抑制蛋白可抑制Wnt信號的激活。

本研究結(jié)果顯示，與NGT組相比，T2DM組FPG、FMN、HbA1c及TC水平較高，存在著明顯的糖代謝及脂代謝紊亂，與張臻等報道一致，并且絕經(jīng)后女性T2DM組HOMA-IR水平增高，F(xiàn)CP水平、ISI水平、HOMA-β水平降低，表明絕經(jīng)后女性T2DM患者存在著IR和胰島素分泌功能障礙[12]。本研究還發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后女性T2DM組與NGT組相比，T2DM組DKK1蛋白表達水平較高，在絕經(jīng)后女性中，DKK1蛋白表達水平與FCP呈負相關(guān)，與HOMA-IR呈正相關(guān)。多因素回歸分析表明DKK1蛋白是影響FPG、HOMA-IR的因素，隨著DKK1蛋白表達水平的提高，F(xiàn)PG水平降低，HOMAIR水平增高，說明絕經(jīng)后女性T2DM患者DKK1蛋白的高表達可能與IR及胰島β細胞分泌功能障礙密切相關(guān)。孫婧等[13]研究發(fā)現(xiàn)，胰島素信號的傳導(dǎo)及調(diào)控與Wnt信號通路及其信號傳導(dǎo)通路的多個信號分子密切相關(guān)。DKK1蛋白異常高表達可能抑制了經(jīng)典Wnt信號通路的激活，導(dǎo)致Wnt信號通路代謝異常，進而對絕經(jīng)后女性T2DM患者IR及胰島β細胞分泌功能障礙產(chǎn)生了影響。但是DKK1蛋白在體內(nèi)調(diào)控機制、細胞內(nèi)信號通路及其在糖尿病中的作用機制有待進一步研究。

綜上所述，絕經(jīng)后女性T2DM患者體內(nèi)DKK1蛋白的高表達可能參與患者IR及胰島β細胞功能減退的發(fā)生發(fā)展過程，進而導(dǎo)致患者T2DM的糖代謝及脂代謝紊亂。以其為靶點，有利于絕經(jīng)后女性T2DM發(fā)病的研究，為糖尿病的防治提供依據(jù)。