吡唑醚菌酯及三唑類殺菌劑對番茄頸腐根腐病的防治效果

曹海潮，李秀環(huán)，王曉坤，白海秀，慕衛(wèi)，劉峰

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吡唑醚菌酯及三唑類殺菌劑對番茄頸腐根腐病的防治效果

曹海潮1，李秀環(huán)1，王曉坤1，白海秀2，慕衛(wèi)1，劉峰1

（1山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院/山東省蔬菜病蟲生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/山東省高校農(nóng)藥毒理與應(yīng)用技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東泰安 271018；2山東醫(yī)藥技師學(xué)院，山東泰安 271016）

【目的】評價吡唑醚菌酯與戊唑醇、丙環(huán)唑、氟硅唑等防治番茄頸腐根腐病的應(yīng)用潛力。【方法】采用菌絲生長速率法和孢子萌發(fā)法分別測定吡唑醚菌酯、戊唑醇、丙環(huán)唑、氟硅唑4種殺菌劑抑制番茄頸腐根腐病菌（f. sp.）菌絲生長、分生孢子萌發(fā)及芽管伸長的毒力。通過溫室盆栽試驗(yàn)，采用灌根處理法，于施藥后7、15 d測定番茄幼苗株高和莖粗的增加量，評價殺菌劑對番茄植株生長的安全性；在室內(nèi)，利用盆栽番茄，采用先接菌后施藥的方法，測定施藥后7、15和30 d藥劑對番茄頸腐根腐病的防治效果；在田間，同樣采用灌根處理，分別于施藥后60、90和150 d調(diào)查番茄頸腐根腐病發(fā)病情況及最終番茄產(chǎn)量，評價不同殺菌劑對番茄頸腐根腐病的防治效果以及對番茄產(chǎn)量的影響?！窘Y(jié)果】吡唑醚菌酯對番茄頸腐根腐病菌菌絲生長、孢子萌發(fā)及芽管伸長均表現(xiàn)出較高的毒力，EC50分別為0.055、0.012、0.010 μg·mL-1，其次為丙環(huán)唑，EC50分別為0.058、0.060、0.011 μg·mL-1。戊唑醇抑制菌絲生長的作用強(qiáng)，對孢子萌發(fā)及芽管伸長的毒力較低，EC50分別為0.075、0.255、0.455 μg·mL-1；氟硅唑抑制分生孢子芽管伸長的毒力高，而抑制菌絲生長與孢子萌發(fā)毒力相對較低，EC50分別為0.013、0.078、0.457 μg·mL-1。戊唑醇25、50 mg a.i./株、丙環(huán)唑5、10 mg a.i./株、氟硅唑5、10 mg a.i./株均顯著抑制番茄幼苗株高，增加莖粗，吡唑醚菌酯30、60 mg a.i./株處理則均無影響。溫室盆栽接種試驗(yàn)中，藥后30 d，吡唑醚菌酯60 mg a.i./株防治效果最高，為87.12%，丙環(huán)唑10 mg a.i./株次之，防治效果為82.17%，戊唑醇50 mg a.i./株與氟硅唑10 mg a.i./株的防治效果分別為79.40%與71.67%。田間施藥后90 d，吡唑醚菌酯60 mg a.i./株防治效果最高，為90.36%，戊唑醇50 mg a.i./株與丙環(huán)唑10 mg a.i./株次之，分別為84.20%與82.55%，氟硅唑5 mg a.i./株防治效果最低，為65.06%。而至施藥后150 d，各處理防治效果均顯著降低，戊唑醇50 mg a.i./株最高，為40.40%。最終產(chǎn)量統(tǒng)計，吡唑醚菌酯60 mg a.i./株處理增產(chǎn)率最高，為50.63%，丙環(huán)唑5 mg a.i./株最低，為-2.61%。【結(jié)論】吡唑醚菌酯、戊唑醇、丙環(huán)唑、氟硅唑4種殺菌劑抑制番茄頸腐根腐病菌菌絲生長的毒力相近，吡唑醚菌酯對孢子萌發(fā)及芽管伸長的毒力高于3種三唑類藥劑。吡唑醚菌酯、丙環(huán)唑及戊唑醇均可用于設(shè)施內(nèi)番茄頸腐根腐病的防治，吡唑醚菌酯60 mg a.i./株的防治效果最高，對植株安全且增產(chǎn)顯著，而丙環(huán)唑與戊唑醇應(yīng)注意控制使用劑量。

番茄頸腐根腐??；吡唑醚菌酯；三唑類殺菌劑；毒力；防治效果

0 引言

【研究意義】番茄頸腐根腐病是由尖鐮孢番茄頸腐根腐病?；停╢. sp.-）侵染引起且危害日益嚴(yán)重的土傳病害，發(fā)病嚴(yán)重時死亡率高達(dá)100%，降低番茄產(chǎn)量及品質(zhì)[1]。該病在32個國家均有報道[2]。隨著保護(hù)地番茄面積擴(kuò)大及種植年限的增加，頸腐根腐病已成為影響番茄種植的重要病害之一[3]。目前對于該病害化學(xué)防治的研究報道較少，也未見防治藥劑登記[4]，所以明確化學(xué)防治手段的有效性及尋找高效殺菌劑對于該病害的防治具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】番茄頸腐根腐病菌致病力強(qiáng)，寄主范圍廣[5-6]，通常與番茄枯萎?。ㄖ虏【鷉. sp.）混合發(fā)生，設(shè)施環(huán)境容易滿足該病害需要的適宜溫濕度條件，在一個生長季節(jié)可形成單周期、多周期循環(huán)侵染，導(dǎo)致苗期和成株番茄發(fā)病死亡[7]。甲氧基丙烯酸酯類（strobilurins）的吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）為線粒體呼吸抑制劑[8]，具有保護(hù)、治療、鏟除、滲透、強(qiáng)內(nèi)吸活性[9]，可防治小麥赤霉病[10]、花生根腐病[11]、草莓枯萎病[12]等多種由鐮孢菌引起的病害，尤其對尖鐮孢有較高的毒力[13-14]。戊唑醇（tebuconazole）、氟硅唑（flusilazole）、丙環(huán)唑（propiconazole）等三唑類殺菌劑為細(xì)胞膜麥角甾醇生物合成抑制劑（EBIs），內(nèi)吸性強(qiáng)，具有保護(hù)、治療和鏟除作用，在鐮孢菌病害防治中也有應(yīng)用[15]，如戊唑醇能防治小麥赤霉病、大豆枯萎病、小麥莖基腐病[16-18]等，丙環(huán)唑、氟硅唑雖鮮見田間防治鐮孢菌病害的報道，但對尖鐮孢有較高的毒力[13,19]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】上述殺菌劑在防治番茄頸腐根腐病上均未見登記[4]。筆者實(shí)驗(yàn)室初步研究發(fā)現(xiàn)戊唑醇、氟硅唑?qū)刂品杨i腐根腐病的發(fā)生有效[20]，但在藥劑作用特性、施藥技術(shù)和對番茄安全性等方面未進(jìn)行深入探討?！緮M解決的關(guān)鍵問題】明確吡唑醚菌酯、戊唑醇等殺菌劑對番茄頸腐根腐病菌菌絲生長、孢子萌發(fā)及芽管伸長3個重要階段的毒力差異，明確各藥劑在試驗(yàn)劑量下對番茄植株的影響，為設(shè)施栽培條件下番茄頸腐根腐病的防治提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試菌株及番茄 菌株分離及鑒定方法參考BENAOUALI等[1,7]并加以改進(jìn)。于山東省泰安市岱岳區(qū)采集病株，使用馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)，進(jìn)行單孢分離純化，觀察菌落、菌絲及小型分生孢子形態(tài)；在VBC培養(yǎng)基[21]上培養(yǎng)，觀察大型分生孢子及厚垣孢子形態(tài)。依照柯赫氏法則進(jìn)行回接，分別比較病菌分離物在18℃與27℃對番茄幼苗的致病力，該分離物在18℃下的致病力明顯大于27℃下的致病力，從發(fā)病植株上再次分離和純化病原菌，獲得番茄頸腐根腐病病原菌，將其保存在PDA斜面上，置于4℃?zhèn)溆谩７哑贩N為金鵬11-8抗病毒品種，購于山東省泰安市房村鎮(zhèn)紅星種苗繁育基地。

1.1.2 供試殺菌劑 95%戊唑醇原藥，江蘇七洲綠色化工股份有限公司；430 g·L-1戊唑醇懸浮劑，拜耳作物科學(xué)中國有限公司；95%氟硅唑原藥，山東濰坊潤豐化工股份有限公司；8%氟硅唑水乳劑，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所廊坊農(nóng)藥中試廠；91.2%丙環(huán)唑原藥、50%丙環(huán)唑水乳劑，陜西湯普森生物科技有限公司。98.47%吡唑醚菌酯原藥，25%吡唑醚菌酯乳油，山東康喬生物科技有限公司。各原藥使用丙酮溶解，分別配制成5%的溶液，然后用0.1%吐溫-80水溶液配制成質(zhì)量濃度為1×103μg·mL-1的母液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.1.3 培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、水瓊脂20 g，加水1 L，用于菌株的分離、純化、培養(yǎng)、保存以及菌絲生長速率的測定；水瓊脂（water agar，WA）培養(yǎng)基：葡萄糖20 g、瓊脂20 g，加水1 L，用于孢子萌發(fā)及芽管伸長的測定；VBC培養(yǎng)基[21]。

1.1.4 儀器 BX43型光學(xué)顯微鏡，日本Olympus公司；RXZ智能型人工氣候箱，寧波江南儀器廠。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 殺菌劑對病菌菌絲生長的影響 采用菌絲生長速率法測定[22]。在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將4種供試殺菌劑母液稀釋成系列濃度，與加熱后冷卻至50℃左右的PDA培養(yǎng)基混合，制成含系列濃度藥劑的PDA平板。其中，戊唑醇、氟硅唑濃度為0.01875、0.0375、0.075、0.3、0.6、1 μg·mL-1，丙環(huán)唑、吡唑醚菌酯濃度為0.01、0.05、0.1、0.5、1 μg·mL-1，并以含丙酮最高濃度的吐溫-80稀釋液PDA平板為空白對照。將分離純化所得頸腐根腐病菌在PDA平板上25℃培養(yǎng)7 d后，用打孔器在菌落邊緣打取直徑為8 mm的菌餅，接種在對照及含藥PDA平板上，每處理重復(fù)4次。25℃下培養(yǎng)，待空白對照培養(yǎng)皿中菌絲生長至2/3時調(diào)查病原菌菌絲生長情況。使用十字交叉法測量菌落直徑，計算各藥劑處理對菌絲生長的抑制率，并以毒力最低的藥劑為基準(zhǔn)藥劑計算其他藥劑的相對毒力比值。

菌落增長直徑（mm）=菌落直徑-菌餅直徑

菌絲生長抑制率（%）=100×（對照菌落增長直徑-處理菌落增長直徑）/對照菌落增長直徑

毒力比值=測試藥劑EC50（或EC90）/基準(zhǔn)藥劑EC50（或EC90）

1.2.2 殺菌劑對分生孢子萌發(fā)的影響 采用孢子萌發(fā)法測定[22]。將番茄頸腐根腐病菌在PDA平板上25℃的條件下培養(yǎng)14 d，用滅菌去離子水10 mL洗下分生孢子，經(jīng)滅菌紗布過濾到孢子懸浮液，用血球計數(shù)板將孢子懸浮液濃度調(diào)制為1×106個/mL。在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將4種供試殺菌劑母液稀釋成系列濃度，與加熱后冷卻至50℃左右的WA培養(yǎng)基混合，制成含系列濃度藥劑的WA平板。其中，吡唑醚菌酯的濃度梯度為0.00032、0.0016、0.008、0.04、0.2、1μg·mL-1，丙環(huán)唑的濃度梯度為0.0032、0.016、0.08、0.4、2、10 μg·mL-1，氟硅唑、戊唑醇的濃度梯度為0.016、0.08、0.4、2、10、50 μg·mL-1，并以含相應(yīng)溶劑最高濃度的吐溫-80稀釋液PDA平板為空白對照，每處理重復(fù)2次。利用移液器吸取100 μL的孢子懸浮液滴到WA平板中，使用涂布器將孢子懸浮液涂布均勻。25℃黑暗培養(yǎng)，當(dāng)對照平板內(nèi)孢子萌發(fā)率達(dá)80%以上時進(jìn)行鏡檢，芽管長度超過孢子長度的一半時視為萌發(fā)，每重復(fù)隨機(jī)調(diào)查3個視野，共調(diào)查孢子總數(shù)不少于200個，最后計算孢子萌發(fā)的相對抑制率。

孢子萌發(fā)率（%）=100×孢子萌發(fā)數(shù)/孢子總數(shù)

處理組校正孢子萌發(fā)率（%）=100×處理組孢子萌發(fā)率/對照孢子萌發(fā)率

孢子萌發(fā)相對抑制率（%）=100×（對照孢子萌發(fā)率-處理組校正孢子萌發(fā)率）/對照孢子萌發(fā)率

1.2.3 殺菌劑對分生孢子芽管伸長的影響 試驗(yàn)方法同1.2.2，其中，氟硅唑的濃度梯度為0.0016、0.008、0.04、0.2、1、5 μg·mL-1，其他3種殺菌劑帶藥平板的濃度梯度不變，每處理重復(fù)2次。將分生孢子懸浮液涂布均勻后，25℃黑暗培養(yǎng)16 h后進(jìn)行鏡檢，每重復(fù)隨機(jī)調(diào)查20個分生孢子，記錄分生孢子的芽管長度并計算芽管伸長的抑制率。

芽管伸長抑制率（%）=（對照芽管長度-處理芽管長度）/對照芽管長度

1.2.4 殺菌劑對番茄植株的安全性測定 盆栽用土均取自發(fā)病嚴(yán)重的溫室大棚，后進(jìn)行130℃滅菌72 h。使用430 g·L-1戊唑醇懸浮劑、8%氟硅唑水乳劑、50%丙環(huán)唑水乳劑和25%吡唑醚菌酯乳油4種殺菌劑進(jìn)行安全性測定。按照每盆用土2 kg將滅菌土裝填于花盆中。當(dāng)金鵬11-8番茄幼苗長至3—5葉期時，選擇長勢一致的植株移栽到花盆中繼續(xù)培養(yǎng)。待其生長穩(wěn)定后，測定植株的株高及莖粗，將定量殺菌劑溶于500 ml水中并進(jìn)行灌根處理，設(shè)計清水對照處理，每處理設(shè)計3組重復(fù)，每組10株幼苗。4種殺菌劑的安全性及田間試驗(yàn)劑量均參考范懷峰田間施用劑量并在田間預(yù)試驗(yàn)下進(jìn)行改進(jìn)[20]。其中，戊唑醇劑量設(shè)為25、50 mg a.i./株，氟硅唑和丙環(huán)唑劑量設(shè)為5、10 mg a.i./株，吡唑醚菌酯劑量設(shè)為30、60 mg a.i./株，定植后施藥一次。施藥后7 d及15 d分別測量植株的株高及莖粗，同時觀察藥劑對葉色、植株形態(tài)的影響。計算株高及莖粗的增加量。

1.2.5 殺菌劑對番茄頸腐根腐病的溫室盆栽防治效果 接種方法參考BENAOUALI等[1]。選取長勢一致的3—5葉期番茄，在幼苗的莖基部切一個7 mm傷口，將傷口及植株根系在分生孢子懸浮液（分生孢子懸浮液的準(zhǔn)備方法同1.2.2）中浸泡15 min，以無菌水接種為空白對照，將處理番茄盆栽置于18℃，相對濕度60%的RXZ智能型人工氣候箱培養(yǎng)3 d，之后將番茄幼苗取出，移栽至花盆后進(jìn)行灌根施藥，施藥劑量及方法按照1.2.4設(shè)計進(jìn)行。處理完畢后，置于25℃日光溫室進(jìn)行培養(yǎng)觀察。接菌7、15、30 d后調(diào)查發(fā)病植株數(shù)，統(tǒng)計病株率并計算防治效果。

病株率（%）=100×發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)

防治效果（%）=100×（空白對照組病株率-藥劑處理組病株率）/空白對照組病株率

1.2.6 殺菌劑對番茄頸腐根腐病的田間防治效果 田間藥效試驗(yàn)在泰安市岱岳區(qū)大汶口鎮(zhèn)番茄頸腐根腐病發(fā)病嚴(yán)重的日光溫室進(jìn)行，依據(jù)GB/T 17980.113—2004準(zhǔn)則。試驗(yàn)于2015年8月16日開始，4種殺菌劑的安全性及田間試驗(yàn)劑量均參考范懷峰田間施用劑量并在溫室盆栽安全性試驗(yàn)及田間預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行[20]。番茄幼苗選用6—8葉期幼苗。于番茄定植后，將430 g·L-1戊唑醇懸浮劑稀釋至16.7、33.3 mg·L-1，8%氟硅唑水乳劑與50%丙環(huán)唑水乳劑均稀釋至3.3、6.7 mg·L-1，25%吡唑醚菌酯乳油稀釋至20、40 mg·L-1，保證殺菌劑有效成分用量不變，單株用水量由500 mL增至1.5 L，分3次進(jìn)行澆灌，每次500 mL，以增加藥劑擴(kuò)散范圍。設(shè)置清水對照。每處理4次重復(fù)，每重復(fù)50株，完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計，設(shè)保護(hù)行。分別于施藥后60、90、150 d進(jìn)行全區(qū)調(diào)查，記錄各處理的發(fā)病情況，計算病株率及防治效果。在番茄生長過程中記錄單果重、單株結(jié)果數(shù)及產(chǎn)量，計算增產(chǎn)率。

病株率（%）=100×發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)

防治效果（%）=100×（空白對照區(qū)病株率-藥劑處理區(qū)病株率）/空白對照區(qū)病株率

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)相關(guān)數(shù)據(jù)使用Excel 2003進(jìn)行處理，采用DPSV6.55軟件進(jìn)行分析。各殺菌劑對番茄頸腐根腐病菌不同生長階段的室內(nèi)毒力數(shù)據(jù)，通過分別計算殺菌劑質(zhì)量濃度對數(shù)值與菌絲生長、孢子萌發(fā)及芽管伸長抑制率機(jī)率值之間的線性回歸關(guān)系，求出毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)、有效中濃度（EC50）、90%最大有效濃度（EC90）及95%置信限。溫室盆栽試驗(yàn)及田間藥效試驗(yàn)所測數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示測定結(jié)果，并應(yīng)用Duncan氏新復(fù)極差法對處理間的差異顯著性進(jìn)行檢驗(yàn)，＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 4種殺菌劑對不同發(fā)育階段番茄頸腐根腐病菌的毒力

2.1.1 對菌絲生長的抑制作用 4種殺菌劑抑制番茄頸腐根腐病菌菌絲生長的毒力相近，EC50（95%置信區(qū)間）的分布范圍為0.055—0.078 μg·mL-1，其中，吡唑醚菌酯與丙環(huán)唑的毒力較高，EC50分別為0.055和0.058 μg·mL-1，戊唑醇與氟硅唑次之，EC50分別為0.075與0.078 μg·mL-1；綜合各藥劑的EC50、EC90，吡唑醚菌酯、戊唑醇對菌絲生長的抑制作用強(qiáng)，EC90分別為4.421與5.057 μg·mL-1，毒力比值分別為2.72與2.38（表1）。

2.1.2 對分生孢子萌發(fā)的抑制作用 4種殺菌劑對番茄頸腐根腐病菌分生孢子萌發(fā)的毒力差異較大，吡唑醚菌酯毒力最高，EC50為0.012 μg·mL-1，EC90為0.284 μg·mL-1，毒力比值分別為38.10、113.52；其次為丙環(huán)唑，EC50為0.060 μg·mL-1，EC90為10.603 μg·mL-1，毒力比值分別為7.62、3.21；而戊唑醇與氟硅唑的抑制作用相對低，EC50、EC90分別為0.255、32.239 μg·mL-1與0.457、13.885 μg·mL-1（表2）。

2.1.3 對分生孢子芽管伸長的抑制作用 吡唑醚菌酯、丙環(huán)唑、氟硅唑?qū)Ψ稚咦友抗苌扉L的抑制作用均高于戊唑醇，EC50分別為0.010、0.011、0.013 μg·mL-1，毒力比值分別為45.50、41.36、35.00，EC90分別為0.513、3.091、1.503 μg·mL-1，毒力比值分別為22.57、3.75、7.70；戊唑醇EC50為0.455 μg·mL-1，EC90為11.577 μg·mL-1，毒力較低（表3）。

表1 4種殺菌劑對番茄頸腐根腐病菌菌絲生長的毒力

表2 4種殺菌劑對番茄頸腐根腐病原菌分生孢子萌發(fā)的毒力

表3 4種殺菌劑對番茄頸腐根腐病原菌芽管伸長的毒力

2.2 4種殺菌劑對番茄植株的安全性評價

番茄幼苗使用戊唑醇、丙環(huán)唑、氟硅唑灌根處理后7 d的株高與對照處理差異顯著；15 d后，50 mg a.i./株戊唑醇與10 mg a.i./株丙環(huán)唑的抑制作用最顯著，株高增加量分別為4.51、3.98 cm，顯著低于清水對照8.81 cm的株高增加量，只有吡唑醚菌酯處理無顯著抑制效果。在藥劑處理7 d時，戊唑醇、丙環(huán)唑、氟硅唑各處理對番茄植株的莖粗增加有顯著促進(jìn)作用。15 d時，僅戊唑醇25、50 mg a.i./株、丙環(huán)唑10 mg a.i./株與氟硅唑10 mg a.i./株處理對莖粗還存在顯著的促進(jìn)作用，莖粗的增加量分別為0.1567、0.2015、0.1713、0.1798 cm。所有藥劑對株高抑制作用與對莖粗促進(jìn)作用均表現(xiàn)為高劑量處理＞低劑量處理（圖1）。

2.3 4種殺菌劑對番茄頸腐根腐病的溫室盆栽防治效果

各藥劑施用后7 d的防治效果均在79%以上，其中吡唑醚菌酯60 mg a.i. /株與戊唑醇50 mg a.i. /株的防治效果分別達(dá)到97.62%與97.22%；施藥后15 d，戊唑醇、吡唑醚菌酯60 mg a.i./株與丙環(huán)唑10 mg a.i./株表現(xiàn)出較高的防治效果，其中吡唑醚菌酯60 mg a.i./株的防治效果最高，為94.87%，顯著高于其30 mg a.i./株、丙環(huán)唑5 mg a.i./株與氟硅唑5、10 mg a.i./株處理的防治效果；施藥后30 d，吡唑醚菌酯、戊唑醇50 mg a.i./株與丙環(huán)唑10 mg a.i./株的防治效果較高，其中吡唑醚菌酯60 mg a.i./株的防治效果最高，為87.12%，丙環(huán)唑10 mg a.i./株、戊唑醇50 mg a.i./株的防治效果分別為82.17%、79.40%。氟硅唑5 mg a.i./株的防治效果最低，僅為58.82%，10 mg a.i. /株的防治效果為71.67%；吡唑醚菌酯60 mg a.i./株、戊唑醇50 mg a.i./株、丙環(huán)唑10 mg a.i./株均表現(xiàn)出較高和較穩(wěn)定的防治效果，而氟硅唑相對較低（表4）。

2.4 4種殺菌劑對番茄頸腐根腐病的田間防治效果

各藥劑施用后60 d，吡唑醚菌酯60 mg a.i./株與戊唑醇50 mg a.i./株的防治效果較高，分別為94.10%與89.14%；施藥后90 d，吡唑醚菌酯60 mg a.i. /株的防治效果最高，達(dá)90.36%，其次是戊唑醇50 mg a.i./株處理和丙環(huán)唑10 mg a.i./株處理，分別為84.20%、82.55%。氟硅唑的防治效果最低，5、10 mg a.i./株的防治效果分別為65.06%與72.69%，顯著低于吡唑醚菌酯60 mg a.i./株、戊唑醇50 mg a.i./株、丙環(huán)唑10 mg a.i./株的防治效果。施藥150 d后，各處理組防治效果均顯著降低，除戊唑醇50 mg a.i./株防治效果為40.40%外，其他3種殺菌劑防治效果均低于30%（表5）。從清水對照處理的累積發(fā)病率來看（圖2），番茄頸腐根腐病在番茄的整個生長期內(nèi)均可發(fā)病，總體呈現(xiàn)出番茄生長發(fā)育中期（61—90 d）的發(fā)病速度要快于前期（1—60 d）與后期（91—150 d）發(fā)病速度的現(xiàn)象。施藥后60 d內(nèi)所有藥劑處理發(fā)病較輕，61—90 d各藥劑處理表現(xiàn)出高劑量處理發(fā)病率要低于低劑量處理發(fā)病率的規(guī)律，表明各藥劑高劑量處理對番茄頸腐根腐病的防治效果較穩(wěn)定。91—150 d各藥劑處理發(fā)病率普遍上升，其中，吡唑醚菌酯與氟硅唑處理高劑量的發(fā)病率要低于低劑量。根據(jù)圖3，吡唑醚菌酯60 mg a.i./株的番茄產(chǎn)量最高，增產(chǎn)率高達(dá)50.63%，丙環(huán)唑5 mg a.i./株處理的產(chǎn)量最低，增產(chǎn)率為-2.61%，除戊唑醇處理外，其余各藥劑處理均表現(xiàn)為高劑量處理產(chǎn)量要高于低劑量處理產(chǎn)量。各三唑類殺菌劑處理的成熟番茄單果重?zé)o顯著差異，吡唑醚菌酯60 mg a.i./株處理的結(jié)果數(shù)最多，平均單株結(jié)果數(shù)達(dá)16.33個，顯著高于戊唑醇50 mg a.i./株，丙環(huán)唑5、10 mg a.i./株以及氟硅唑5 mg a.i./株處理。

相同顏色深度的不同字母表示經(jīng)Duncan氏新復(fù)極差法檢驗(yàn)在P＜0.05水平差異顯著。圖3同

表4 4種殺菌劑對番茄頸腐根腐病的溫室盆栽防治效果

表中數(shù)據(jù)均為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤。同列不同字母表示經(jīng)Duncan氏新復(fù)極差法檢驗(yàn)在＜0.05水平差異顯著。表5同Date are mean±SE. Different letters in the same column indicate significant differences at＜0.05 level by Duncan’s new multiple range test. The same as table 5

表5 4種殺菌劑對番茄頸腐根腐病的田間防治效果

圖2 4種殺菌劑處理后田間番茄頸腐根腐病的累積發(fā)病率

圖3 4種殺菌劑處理對番茄產(chǎn)量的影響

3 討論

吡唑醚菌酯通過抑制線粒體能量的合成對病原真菌產(chǎn)生抑制作用，丙環(huán)唑、戊唑醇、氟硅唑通過干擾細(xì)胞膜重要成分麥角甾醇的合成抑制病原菌生長[9,15]。病原菌的孢子萌發(fā)是一個涉及到信號傳導(dǎo)、水分吸收、大量物質(zhì)代謝的復(fù)雜過程[23]，孢子萌發(fā)過程中對能量的需求量很大，阻斷其病原菌的能量合成是藥劑產(chǎn)生抑制作用的關(guān)鍵，因此吡唑醚菌酯對孢子萌發(fā)的抑制毒力要顯著高于3種三唑類藥劑。芽管伸長與菌絲生長均屬于細(xì)胞增長的過程，雖二者都涉及到能量的合成與細(xì)胞膜的形成，但芽管伸長試驗(yàn)調(diào)查時間較短，僅在涂布后16 h，可以忽略孢子對藥劑的代謝，而菌絲生長試驗(yàn)周期較長，存在病菌對藥劑的代謝，并且菌絲體與分生孢子對不同藥劑的敏感程度存在差異[24]，因此造成了各藥劑對病原菌的3個生長階段毒力不一致的現(xiàn)象，另外，3種三唑類殺菌劑雖然作用機(jī)理相同，但由于自身結(jié)構(gòu)差異，造成病菌對藥劑吸收能力、代謝能力等性質(zhì)的差異，同樣會造成毒力不一致的現(xiàn)象。

吡唑醚菌酯抑菌譜廣，對包括鐮孢菌在內(nèi)的多種病原菌均有較強(qiáng)的抑制作用。李夢嬌等[13]研究表明，吡唑醚菌酯對芝麻尖鐮孢菌絲生長的抑制作用較強(qiáng)，EC50為0.759 μg·mL-1；吳祥等[12]研究表明，吡唑醚菌酯EC在250 μg·mL-1劑量下對草莓枯萎病菌（）的防治效果最高。在本研究中，吡唑醚菌酯對番茄頸腐根腐病菌的菌絲生長與孢子萌發(fā)均存在顯著抑制作用；盆栽試驗(yàn)和田間試驗(yàn)中，以60 mg a.i./株的試驗(yàn)劑量對番茄進(jìn)行定點(diǎn)灌根處理，吡唑醚菌酯均表現(xiàn)出較高的防治效果，對番茄植株安全且增產(chǎn)作用明顯。據(jù)報道，吡唑醚菌酯增產(chǎn)的原因是提高硝酸鹽還原酶的活性，增加作物對氮的吸收；降低乙烯合成，減緩植物衰老等[9]。陳雨等[25]報道了吡唑醚菌酯防治大豆炭疽病的同時對大豆也有顯著增產(chǎn)作用，這與本研究吡唑醚菌酯對番茄頸腐根腐病防治效果高且增產(chǎn)結(jié)果是一致的。

三唑類的戊唑醇、丙環(huán)唑、氟硅唑等近年來也開始用于防治包括鐮孢菌等病原菌引起的多種作物土傳病害，氟硅唑與丙環(huán)唑?qū)苯犯〉姆乐涡Ч麅?yōu)良[26]，戊唑醇種衣劑對小麥紋枯病、全蝕病和根腐病有較高的防治效果[27]。在本研究中，戊唑醇、丙環(huán)唑?qū)Ψ杨i腐根腐病的防治效果較高，且戊唑醇50 mg a.i./株的持效期長于吡唑醚菌酯60 mg a.i./株，展現(xiàn)出一定的應(yīng)用潛力。不過三唑類殺菌劑能夠抑制植物赤霉素和生長素的合成，引起矮化，根冠比增加[15]，因此其對作物生長的抑制作用不可忽視。在盆栽試驗(yàn)中，戊唑醇、丙環(huán)唑、氟硅唑處理番茄幼苗對株高的抑制作用高于田間試驗(yàn)，其原因一方面是盆栽的苗齡（3—5葉期）低于田間（6—8葉期），另一方面是在不改變單株施藥量的前提下，田間試驗(yàn)用水量高，降低了土壤中藥劑的相對濃度，不過這樣也有利于擴(kuò)大藥劑在土壤中的分布范圍。所以在保證防治效果的前提下，各處理單果重與清水對照相比無顯著差異，而單株結(jié)果數(shù)顯著提高，除丙環(huán)唑5 mg a.i./株處理外，均表現(xiàn)出一定的增產(chǎn)作用。因此，未來研究應(yīng)側(cè)重于藥劑濃度的控制，如開發(fā)微囊緩釋劑型并對用水量、施藥部位等施藥技術(shù)細(xì)節(jié)進(jìn)行優(yōu)化。

藥劑在土壤中的穩(wěn)定性影響其持效期。有報道吡唑醚菌酯在土壤中的消解半衰期為13.1—16.5 d[28]，丙環(huán)唑?yàn)?2.4 d[29]，氟硅唑?yàn)?.59—7.13 d[30]，戊唑醇為15.6 d[31]，這也解釋了氟硅唑與丙環(huán)唑?qū)Ψ杨i腐根腐病菌的毒力相當(dāng)，而盆栽及田間試驗(yàn)中對番茄頸腐根腐病的防治效果低于后者，并在番茄花果盛期無法有效控制病情的原因。由此可見，施藥后隨著時間的推移，防治效果逐步下降是由各藥劑在土壤中的降解造成的，所以在實(shí)際生產(chǎn)中，為減輕番茄頸腐根腐病對生長中后期番茄的危害，還應(yīng)在定植期施藥后 50 d及100 d左右分別再次施藥。根據(jù)本研究結(jié)果，初步形成的用藥策略是在番茄頸腐根腐病發(fā)生嚴(yán)重的地塊，幼苗定植期施用吡唑醚菌酯，在番茄盛花期后施用戊唑醇或丙環(huán)唑，以兼顧施藥防治效果和對番茄植株的安全性。

吡唑醚菌酯作用位點(diǎn)單一，被殺菌劑抗性委員會（Fungicide Resistance Action Committee，F(xiàn)RAC）認(rèn)定為“高抗性風(fēng)險殺菌劑”，而戊唑醇、丙環(huán)唑抗性風(fēng)險相對較低，為“中抗性風(fēng)險殺菌劑”[32]。目前，尚無有關(guān)吡唑醚菌酯與三唑類殺菌劑存在交互抗性的報道。因此，可通過吡唑醚菌酯與三唑類藥劑混用以延緩病原菌抗藥性的產(chǎn)生。有報道吡唑醚菌酯與苯醚甲環(huán)唑混合使用對引起馬鈴薯早疫病的茄絲核菌（）有較高的聯(lián)合毒力[33]，對花生褐斑病也有較好的防治效果[34]。Spolti等[35]報道了吡唑醚菌酯與葉菌唑混用可提高對小麥赤霉病的防治效果。因此，吡唑醚菌酯與丙環(huán)唑、戊唑醇等三唑類殺菌劑混用防治番茄頸腐根腐病的可行性值得進(jìn)一步探究。

由于連作等原因，番茄頸腐根腐病目前在山東濰坊、泰安等地蔬菜產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生，且呈逐年加重之勢。而該病在國內(nèi)尚未引起足夠重視，生產(chǎn)上亟需高效、安全的防治技術(shù)。本研究表明，吡唑醚菌酯、丙環(huán)唑、戊唑醇灌根處理對防治番茄頸腐根腐病具有較大的應(yīng)用潛力。從施藥手段上分析，目前大水漫灌施藥與單株定點(diǎn)灌根施藥是防治設(shè)施蔬菜土傳病害的常用手段。不過大水漫灌費(fèi)水、費(fèi)藥，環(huán)境風(fēng)險高，而單株定點(diǎn)灌根處理相對省水、省藥，但費(fèi)時、費(fèi)力，人工成本高。因此，如果能夠通過滴灌設(shè)施進(jìn)行施藥，實(shí)現(xiàn)水藥一體化可以兼顧兩者的優(yōu)點(diǎn)，但在滴灌條件下藥劑對番茄頸腐根腐病的防治效果仍需進(jìn)一步評價。

4 結(jié)論

吡唑醚菌酯、戊唑醇、丙環(huán)唑、氟硅唑4種殺菌劑抑制尖鐮孢番茄頸腐根腐病?；途z生長的毒力相近，吡唑醚菌酯對孢子萌發(fā)及芽管伸長的毒力高于其他3種三唑類藥劑。吡唑醚菌酯、丙環(huán)唑及戊唑醇均可用于設(shè)施內(nèi)番茄頸腐根腐病的防治，其中，吡唑醚菌酯60 mg a.i./株對該病害的防治效果相對較高，可以維持番茄的產(chǎn)量并對植株安全，而丙環(huán)唑與戊唑醇使用時應(yīng)注意控制劑量。

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Cao Haichao1, Li Xiuhuan1, Wang Xiaokun1, BAI Haixiu2, Mu Wei1,Liu Feng1

(1College of Plant Protection, Shandong Agricultural University/Shandong Provincial Key Laboratory for Biology of Vegetable Diseases and Insect Pests/Shandong Key Laboratory of Pesticide Toxicology & Application Technique, Taian 271018, Shandong;2Shandong Medical Technician College, Taian 271016, Shandong)

【Objective】The objective of this study is to evaluate the potential efficacy of pyraclostrobin as well as tebuconazole, propiconazole and flusilazole against tomato crown and root rot, which caused byf. sp.. 【Method】The laboratory toxicity of 4 fungicides to mycelial growth, conidial germination and germ tube elongation off. sp.were determined by mycelial growth rate and conidial germination methods. In greenhouse pot experiment, the root-irrigation method was used to treat tomato seedlings. At 7 d and 15 d after treatment, the increment of plant height and stem diameter was measured to evaluate the safety of fungicides on tomato seedlings. In the laboratory, the method of first inoculating and then applying fungicides was adopted. The control efficacy of fungicides on tomato crown and root rotat 7, 15 and 30 d after application was investigated, respectively. In field experiment, same root-irrigation method was used to investigate the incidence of tomato crown and root rot at 60, 90 and 150 d after treatment and the tomato yield statistic, and to evaluate the efficacy of fungicides against the disease in field and the effect on yield of tomato.【Result】Pyraclostrobin showed high toxicity to mycelial growth, conidial germination and germ tube elongation off. sp., with EC50of 0.055, 0.012 and 0.010 μg·mL-1, followed by propiconazole, EC50was 0.058, 0.060, 0.011 μg·mL-1, respectively. The inhibitory effect of tebuconazole on mycelial growth was strong, and the toxicity of tebuconazole to conidial germination and germ tube elongation was relatively low, with EC50of0.075, 0.255 and 0.455 μg·mL-1, respectively. The toxicity of flusilazole to conidial germ tube elongation was high, butthe toxicity of flusilazole to mycelial growth and conidial germination was low, with EC50of 0.013, 0.078 and 0.457 μg·mL-1, respectively. tebuconazole at 25, 50 mg a.i./plant, propiconazole at 5, 10 mg a.i./plant and flusilazole at 5, 10 mg a.i./plant significantly inhibited tomato seedling height and increased stem diameter, but pyraclostrobin at 30, 60 mg a.i./plant had no effect on tomato seedling. In greenhouse pot experiment, 30 days after treatment (DAT), pyraclostrobin had the highest control efficacy (87.12%) on this disease at 60 mg a.i./plant, followed by propiconazole 10 mg a.i./plant, the control efficacy was 82.17%, and the control efficacy of tebuconazole at 50 mg a.i./plant and flusilazole at 10 mg a.i./plant was 79.40% and 71.67%, respectively. At 90 DAT in field experiment, the best control efficacy on the disease was 90.36% by pyraclostrobin at 60 mg a.i./plant, followed by tebuconazole at 50 mg a.i./plant and propiconazole at 10 mg a.i./plant, which was 84.20% and 82.55%, respectively. The lowest one was flusilazole at 5 mg a.i./plant (65.06%). At 150 DAT, the control efficacy of each treatment on the disease significantly declined, just tebuconazole at 50 mg a.i./plant was 40.40%. According to field statistics, pyraclostrobin at 60 mg a.i./plant had the highest yield in field, the increased production rate was 50.63%, and propiconazole at 5 mg a.i./plant was the lowest, with the rate of -2.61%. 【Conclusion】pyraclostrobin, tebuconazole, propiconazole and flusilazole had similar toxicity onf. sp.mycelial growth, however, pyraclostrobin had higher toxicity on the conidial germination and germ tube elongation of the pathogen than the other three fungicides. Pyraclostrobin, propiconazole and tebuconazole could be used to control tomato crown and root rot in greenhouse.The control efficacy of pyraclostrobin at 60 mg a.i./plant was the highest, which was safe and increased production significantly.However, the dosages of propiconazole and tebuconazole should be concerned before application.

tomato crown and root rot; pyraclostrobin; triazole fungicide; toxicity; control efficacy

10.3864/j.issn.0578-1752.2018.21.006

2018-05-07；

2018-07-03

國家重點(diǎn)研發(fā)計劃（2017YFD0200307）、山東省重大科技創(chuàng)新工程（2017CXGC0207）

曹海潮，E-mail：caohaichao666@outlook.com。通信作者劉峰，Tel/Fax：0538-8242611；E-mail：fliu@sdau.edu.cn

（責(zé)任編輯 岳梅）