30%吡唑醚菌酯·克菌丹懸浮劑的高效液相色譜分析

潘 靜，劉潤(rùn)峰，東 琴，高敬雨

(北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司，北京 102206)

30%吡唑醚菌酯·克菌丹懸浮劑是由5%吡唑醚菌酯和25%的克菌丹及助劑配制而成。其中吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)是具有吡唑結(jié)構(gòu)的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，由德國(guó)巴斯夫公司于1993年開發(fā)。吡唑醚菌酯的作用機(jī)制獨(dú)特，是一種線粒體呼吸抑制劑，通過阻止細(xì)胞色素b和c1間電子傳遞而抑制線粒體呼吸作用，使線粒體不能產(chǎn)生和提供細(xì)胞正常代謝所需要的能量(ATP)，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡[1]。吡唑醚菌酯具有殺菌譜廣、毒性低、與環(huán)境生物相容性好的特點(diǎn)[2,3]?？司?captan)是一種三氯甲硫基類多作用點(diǎn)的廣譜保護(hù)性殺菌劑，化學(xué)名稱為N-三氯-甲硫基-1,2,3,6-四氫苯鄰二甲酰亞胺?？司?duì)疫病、炭疽病、霜霉病、白腐病及白粉病等病害具有較高的防效，可用于番茄、水稻、蔬菜、麥類、葡萄、玉米、馬鈴薯、蘋果和棉花等多種作物[4,5]。

目前尚未見到吡唑醚菌酯和克菌丹懸浮劑復(fù)配制劑分析方法的公開報(bào)道，本文采用反相的高效液相色譜法，使用反相C18色譜柱，紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，對(duì)30%吡唑醚菌酯·克菌丹懸浮劑進(jìn)行了分離和定量分析。該方法操作簡(jiǎn)便，分析速度快，且方法準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好，可以滿足常規(guī)分析和生產(chǎn)中的質(zhì)量控制。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

儀器：Agilent 1260高效液相色譜儀；紫外檢測(cè)器；Agilent Chemstation色譜工作站；色譜柱：150 mm×4.6 mm (i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)裝ZORBAX SB-C18填充物，粒徑5 μm；超聲波清洗器；過濾器：過濾膜孔徑0.45 μm。乙腈：色譜純；水：新蒸二次蒸餾水；吡唑醚菌酯標(biāo)樣≥99.0%；克菌丹標(biāo)樣≥99.0%(兩者均由北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司提供)；30%吡唑醚菌酯·克菌丹懸浮劑(北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司生產(chǎn))。

1.2 色譜操作條件

流動(dòng)相：乙腈-水(體積比65∶35)；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；流動(dòng)相流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量：5 μL；柱溫：(25±2) ℃；保留時(shí)間：吡唑醚菌酯約為8.0 min，克菌丹約為4.0 min。吡唑醚菌酯和克菌丹的高效液相色譜圖如下見圖1、圖2。

圖1 吡唑醚菌酯、克菌丹標(biāo)準(zhǔn)樣品的高效液相色譜圖

圖2 30%吡唑醚菌酯·克菌丹懸浮劑的高效液相色譜圖

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

分別稱取吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品0.008 g、克菌丹標(biāo)準(zhǔn)品0.040 g (精確至0.000 2 g)，置于同一50 mL容量瓶中，加入20 mL流動(dòng)相在超聲波清洗器上超聲溶解后，取出冷卻至室溫，用流動(dòng)相定容，搖勻后備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取試樣0.16 g (精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，加入20 mL流動(dòng)相在超聲波清洗器上超聲溶解后，取出冷卻至室溫，用流動(dòng)相定容，搖勻后靜置，過濾后備用。

1.4 測(cè)定

在上述色譜條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相對(duì)響應(yīng)值，直至相鄰2針的相對(duì)響應(yīng)值小于1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.5 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的吡唑醚菌酯(克菌丹)峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中吡唑醚菌酯(克菌丹)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X (%)根據(jù)下式計(jì)算：

式中：A1——標(biāo)樣溶液中，吡唑醚菌酯(克菌丹)峰面積的平均值；A2——試樣溶液中，吡唑醚菌酯(克菌丹)峰面積的平均值；m1——吡唑醚菌酯(克菌丹)標(biāo)樣的質(zhì)量，單位為克(g)；m2——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；P——標(biāo)樣中吡唑醚菌酯(克菌丹)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

1.6 允許差

2次平行測(cè)定結(jié)果之差，吡唑醚菌酯、克菌丹分別應(yīng)不大于0.3%、0.5%，取其算術(shù)平均值，作為測(cè)定結(jié)果。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

通過紫外-可見光分光光度計(jì)(日本島津)分別對(duì)吡唑醚菌酯標(biāo)樣溶液、克菌丹標(biāo)樣溶液進(jìn)行紫外掃描，得到吡唑醚菌酯和克菌丹在200 nm附近的最大紫外吸收，但是在275 nm處，吡唑醚菌酯有一較大紫外吸收，而克菌丹紫外吸收在275 nm處卻較??；另外為了避免溶劑、助劑、雜質(zhì)等的紫外干擾，因此將吡唑醚菌酯、克菌丹的檢測(cè)波長(zhǎng)定為220 nm。

2.2 流動(dòng)相的選擇

為了實(shí)現(xiàn)吡唑醚菌酯和克菌丹的有效分離，先后選擇甲醇+水、乙腈+水、甲醇+0.3%冰乙酸水溶液、乙腈+0.3%冰乙酸水溶液等組合作為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)。經(jīng)多次配比試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，選擇體積比為65+35的乙腈和水作為流動(dòng)相且流速為1.0 mL/min時(shí)，分離效果最好，峰形對(duì)稱，保留時(shí)間適中，可以滿足分析要求。

2.3 分析方法的線性關(guān)系曲線

分別稱取吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品0.040 g、克菌丹標(biāo)準(zhǔn)品0.20 g (精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，加入20 mL流動(dòng)相在超聲波清洗器上超聲溶解后，取出冷卻至室溫，用乙腈定容，搖勻后，用移液管分別準(zhǔn)確移取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL于10 mL容量瓶中用乙腈溶解并定容，按上述色譜操作條件進(jìn)行測(cè)定。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程，吡唑醚菌酯y=17.495 7x+3.761 4，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 5；克菌丹y=2.483 5x+17.826 5，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 2，表明線性關(guān)系良好(圖3、圖4)。

圖3 吡唑醚菌酯線性關(guān)系圖

2.4 分析方法的精密度

在上述色譜操作條件下，對(duì)同一個(gè)樣品平行測(cè)定 5次，吡唑醚菌酯和克菌丹的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.09、0.16；變異系數(shù)分別為1.73 %、0.63% (表1)。該方法的精密度能滿足定量分析要求。

圖4 克菌丹線性關(guān)系圖

表1 30%吡唑醚菌酯·克菌丹懸浮劑精密度測(cè)定

2.5 分析方法的準(zhǔn)確度

在已知含量的樣品中加入一定數(shù)量的吡唑醚菌酯、克菌丹的標(biāo)準(zhǔn)品，按上述色譜操作條件進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算回收率。測(cè)定的吡唑醚菌酯的回收率為98.30%～101.61%，平均回收率為99.57%；克菌丹的回收率為 99.36%～100.32%，平均回收率為 99.78% (表2)。該方法的準(zhǔn)確度能滿足定量分析要求。

表2 30%吡唑醚菌酯·克菌丹懸浮劑測(cè)定方法的準(zhǔn)確度測(cè)定

3 結(jié) 論

以上試驗(yàn)表明本方法可以同時(shí)測(cè)定 30%吡唑醚菌酯·克菌丹懸浮劑中的吡唑醚菌酯和克菌丹的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，方法簡(jiǎn)便、快速、分離效果好，極大地提高了樣品分析的效率，可以滿足生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)中的質(zhì)量控制要求。