密蒙花方防治高糖下體外視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷機(jī)制探討

吳正正 ，嚴(yán) 華 ，葛東宇 ，王 謙 ，嚴(yán) 京 ，宮喜梅 ，宋小花

糖尿病視網(wǎng)膜病變 (diabetic retinopathy，DR)是糖尿病(diabetes mellitus，DM)常見(jiàn)和嚴(yán)重的眼部并發(fā)癥之一，目前占雙眼盲病因的第一位。長(zhǎng)期以來(lái)，視網(wǎng)膜微血管病變被認(rèn)為是診斷DR的金標(biāo)準(zhǔn)，然而，越來(lái)越多的研究表明，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的功能異常出現(xiàn)在DR微血管病變之前，這一認(rèn)識(shí)對(duì)于如何早期防治DR具有重要意義。本課題組總結(jié)多年臨床經(jīng)驗(yàn)，提出“心腎論治”DR的新思路，并在此指導(dǎo)下創(chuàng)立密蒙花方，用于治療早期DR取得良好臨床療效?，F(xiàn)通過(guò)離體細(xì)胞試驗(yàn)，從檢測(cè)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡情況，Real Time-PCR法及Western blot法檢測(cè)視RGC-5內(nèi)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子mRNA及蛋白水平和從Sigma-1R機(jī)制方面探討密蒙花方防治DR早期視網(wǎng)膜神經(jīng)損傷的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑：RPMI1640培養(yǎng)基、DMEM培養(yǎng)基 （美國(guó)Gibo公司），胎牛血清（杭州四季青公司），胰蛋白酶-0.02%EDTA，PBS粉，1%青鏈霉素雙抗，谷氨酰胺，HEPES(北京泰格美公司)，Cell Conting Kit-8 試劑盒（碧云天），4%多聚甲醛（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物研究所）Annexin V-FITC/PI試劑盒 （嘉美生物有限公司）。 DNase I，RNase Inhibitor，美國(guó) Fermentas（MBI）公司，dNTP(10 mM)2 Ex TaqMix，DL2000 分子量標(biāo)準(zhǔn)，寶生物工程（大連）有限公司；瓊脂糖，西班牙Biowest公司；RNase-free H2O，韓國(guó)Walgene公司。Sigma-1R、BDNF、CNTF的引物序列由北京擎科生物工程有限公司合成.

1.1.2 細(xì)胞株：小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞株RGC-5購(gòu)自上海瑞鹿生物科技有限公司

1.1.3 中藥：購(gòu)自北京燕北藥材公司，經(jīng)我院中藥房鑒定為所用道地藥材。生黃芪（產(chǎn)于內(nèi)蒙古），女貞子、益母草（均產(chǎn)于河北），黃連（產(chǎn)于四川），肉桂（產(chǎn)于廣東），密蒙花（產(chǎn)于湖北）。

1.1.4 儀器：二氧化碳培養(yǎng)箱（美國(guó)NAPCO公司），超凈工作臺(tái) （北京月壇儀器廠），倒置相差顯微鏡(COIC,XDS-1,重慶光學(xué)儀器廠)，全自動(dòng)酶標(biāo)儀（意大利 SEAC 公司），流式細(xì)胞儀（BDFACSCalibur，美國(guó)BD公司），低溫冰箱（日本SANYO），干燥箱（日本 SANYO），Chromo4熒光定量 PCR儀，美國(guó)BIO-RAD公司，電泳槽，日本TAKARA公司；image system(EUV-LDUV)凝膠成像系統(tǒng)，韓國(guó)Korea Biotech公司。

1.2 藥物配制及分組

1.2.1 中藥水煎劑的制備 密蒙花方組成：生黃芪、密蒙花、黃連、肉桂、烏梅、女貞子、益母草，將中藥方浸泡30 min，武火煮沸，文火煎15 min，煎兩次，過(guò)濾去渣合并液體，濃縮為每付100 ml，藥物濃度為0.82 g/ml,4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 含藥血清的配制 成年大鼠60只，體重為200 g左右，隨機(jī)分2組，正常組10只，中藥組50只。中藥組每日灌胃密蒙花方水煎劑7.38 g/Kg·d，按單位體重等效計(jì)量換算，相當(dāng)于人的6.3倍。空白對(duì)照組每次灌胃等容量體積的生理鹽水，連續(xù)給藥5 d，bid，禁食12 h，末次給藥1 h后腹主動(dòng)脈取血，3000 r/min離心 10 min，56℃滅活 30 min，0.22 um過(guò)濾膜過(guò)濾除菌，分裝，-20℃保存?zhèn)溆帽４鎮(zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組：（1）正常組：正常培養(yǎng)的RGC-5細(xì)胞；（2）模型組：高糖條件下培養(yǎng) RGC-5 細(xì)胞；（3）密蒙花方12 h組：高糖+密蒙花方含藥血清；（4）密蒙花方24 h組：高糖+密蒙花方含藥血清；（5）密蒙花方36 h組:高糖+密蒙花方含藥血清。

1.3 方法

1.3.1 CCK-8法檢測(cè)密蒙花方含藥血清對(duì)高糖狀態(tài)下RGC-5細(xì)胞增殖的影響：取生長(zhǎng)良好，長(zhǎng)滿融合的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，消化制成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度2000個(gè)/ml。將細(xì)胞懸液均勻接種于96孔板中，每孔100ul。常規(guī)培養(yǎng)24h后，以無(wú)血清RPMI1640繼續(xù)培養(yǎng)24 h，使細(xì)胞同步化。根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組分別加入不同藥物，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，分別培養(yǎng)12 h、24 h、36 h、48 h、72 h。每孔加入 CCK-8 溶液 10 ul，37℃,5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1h。全自動(dòng)酶標(biāo)儀上用450 nm波長(zhǎng)比色測(cè)定，測(cè)出每孔吸光度 （optical density）A值，記錄結(jié)果。增殖率=（實(shí)驗(yàn)組平均A值-對(duì)照組平均A值）/對(duì)照組平均A值×100%。抑制率=（對(duì)照組平均A值-實(shí)驗(yàn)組平均A值）/對(duì)照組平均A值×100%。

1.3.2 FCM檢測(cè)密蒙花方含藥血清對(duì)高糖狀態(tài)下RGC-5細(xì)胞凋亡的影響：⑴將細(xì)胞接種于50ml培養(yǎng)瓶中，根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)分組加入不同藥物，分別于培養(yǎng)12 h、24 h、36 h后消化收集細(xì)胞。⑵將預(yù)冷的70%乙醇沿壁緣滴入，輕輕吹打細(xì)胞，4℃固定12 h以上。⑶ 離心（1000 r/min，4 min），PBS 洗 2 次，棄上清。⑷加入濃度為1 mg/ml RNaseA 30μl，37℃恒溫水浴鍋中孵育30 min。⑸加入PI染色液800μl，4℃避光30 min。⑹FCM測(cè)定DNA含量，所有資料經(jīng)ModfitV3.0軟件分析。

1.3.3 Realtime PCR法檢測(cè)檢測(cè)RGC-5細(xì)胞內(nèi)Sigma-1R、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）、睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（Ciliary Neurotrophic Factor，CNTF）mRNA 表達(dá)水平：取視網(wǎng)膜組織，迅速轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的RNAiso Plus試劑中勻漿，常規(guī)提取組織總RNA，待RNA沉淀完全，加適量無(wú)RNA酶的無(wú)菌水溶解后于-80℃保存。酶標(biāo)儀紫外分光光度法鑒定RNA純度。PrimeScript RT reagent Kit進(jìn)行基因組DNA的除去反應(yīng)、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。按PCR反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)。

1.3.4 Western blot法檢測(cè)檢測(cè)RGC-5細(xì)胞內(nèi)Sigma-1R,BDNF，CNTF蛋白表達(dá)水平:蛋白樣品制備，提取細(xì)胞內(nèi)總蛋白，配好膠后蛋白上樣，電泳，轉(zhuǎn)膜后封閉，加一抗，用封閉液將一抗1：400稀釋)，洗膜，結(jié)合二抗(辣根過(guò)氧化物酶1：3000稀釋)，洗膜3次。在暗室中采用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)目的條帶，曝光適當(dāng)時(shí)間，經(jīng)顯影、定影后室溫下晾干。采用圖像掃描，灰度分析。以 Sigma-1R,BDNF，CNTF與β-actin的光密度比值表示 Sigma-1R，BDNF，CNTF蛋白的表達(dá)。

表1 Sigma-1R,BDNF,CNTF的引物序列

圖1 倒置顯微鏡下視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞RGC-5形態(tài)，1A 正常組；1B 高糖組；1C 中藥組

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。所有結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）來(lái)表示。各組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），若 P＜0.05 則表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RGC-5細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

倒置顯微鏡下，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞接種于無(wú)血清的神經(jīng)基質(zhì)培養(yǎng)基，3 h見(jiàn)細(xì)胞有突起長(zhǎng)出，細(xì)胞近似圓形;細(xì)胞形態(tài)均一，24 h開(kāi)始有突觸生長(zhǎng)，細(xì)胞逐漸延長(zhǎng)并增粗，相差顯微鏡下突起明顯可見(jiàn)，72h突觸增多并伸長(zhǎng)，細(xì)胞體較大，細(xì)胞突起較長(zhǎng)，突起的長(zhǎng)度可達(dá)細(xì)胞體直徑的數(shù)倍，細(xì)胞間可見(jiàn)突起相互連接。高糖組細(xì)胞在高糖狀態(tài)下細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制，細(xì)胞間隙增大，部分區(qū)域脫落，可見(jiàn)部分死細(xì)胞。中藥組細(xì)胞增殖旺盛（見(jiàn)圖1）。

2.2 密蒙花方對(duì)高糖狀態(tài)下RGC-5細(xì)胞增殖的影響

經(jīng)CCK-8法檢測(cè)，密蒙花方含藥血清作用于高糖狀態(tài)下 RGC-5 細(xì)胞，12 h、24 h、36 h 后，密蒙花方均顯示出促進(jìn)高糖狀態(tài)下RGC-5細(xì)胞增殖的作用，并且呈濃度依賴關(guān)系。

與正常組比較，高糖組吸光度值降低（P＜0.01），表現(xiàn)出有抑制RGC-5增殖的作用，與高糖組比較，中藥組吸光度值升高（P＜0.01），表現(xiàn)出有促進(jìn)RGC-5增殖的作用。

2.3 密蒙花方對(duì)高糖狀態(tài)下體外RGC-5細(xì)胞凋亡的影響

與正常組比較，高糖組RGC-5細(xì)胞凋亡率增高，說(shuō)明高糖狀態(tài)下視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞受到損傷，增殖受到抑制。與高糖組比較，中藥組RGC-5細(xì)胞凋亡率降低，說(shuō)明密蒙花方具有保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞RGC-5細(xì)胞免受損傷，減少細(xì)胞凋亡的作用，此作用分別在12 h，24 h，36 h均有體現(xiàn)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）,見(jiàn)表 2。

表1 CCK8法檢測(cè)密蒙花方對(duì)RGC-5細(xì)胞增殖的影響

表1 CCK8法檢測(cè)密蒙花方對(duì)RGC-5細(xì)胞增殖的影響

注：** 與正常組比較，P＜0.01

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表2 FCM檢測(cè)密蒙花方對(duì)RGC-5細(xì)胞凋亡的影響

表2 FCM檢測(cè)密蒙花方對(duì)RGC-5細(xì)胞凋亡的影響

注：**中藥組與高糖組比較，P＜0.01

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2.4 密蒙花方對(duì) RGC-5細(xì)胞 Sigma-1R、BDNF、CNTF的mRNA含量的影響

對(duì)RGC-5 BDNF mRNA表達(dá)的影響：與正常組相比，高糖組BDNFmRNA表達(dá)降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與高糖組相比，密蒙花方含藥血清組 BDNF mRNA表達(dá)增加，12 h時(shí)和 36 h BDNF mRNA表達(dá)升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；24 h時(shí)BDNFmRNA表達(dá)升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 （見(jiàn)表 3）

表3 密蒙花方對(duì)RGC-5細(xì)胞BDNFmRNA表達(dá)的影響

表3 密蒙花方對(duì)RGC-5細(xì)胞BDNFmRNA表達(dá)的影響

注：★★高糖組與正常組比較P＜0.01；▲中藥組與高糖組比較，P＜0.05，▲▲中藥組與高糖組比較，P＜0.01

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密蒙花方對(duì)RGC-5細(xì)胞CNTF mRNA表達(dá)的影響：與正常組相比，高糖組CNTFmRNA表達(dá)降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與高糖組相比，中藥組CNTF mRNA表達(dá)增加，隨時(shí)間延長(zhǎng)mRNA表達(dá)逐漸增加，12 h時(shí)與高糖組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，24 h時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）；36h時(shí)CNTF mRNA表達(dá)增高明顯差，異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 （見(jiàn)表 4）

表4 中藥組對(duì)高糖狀態(tài)下RGC-5細(xì)胞CNTF mRNA表達(dá)的影響

表4 中藥組對(duì)高糖狀態(tài)下RGC-5細(xì)胞CNTF mRNA表達(dá)的影響

注：★★高糖組與正常組比較P＜0.01；▲中藥組與高糖組比較，P＜0.05，▲▲中藥組與高糖組比較，P＜0.01

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密蒙花方對(duì)RGC-5細(xì)胞Sigma-1R mRNA表達(dá)的影響：與正常組相比，高糖組Sigma-1R mRNA表達(dá)降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與高糖組相比，中藥組Sigma-1RmRNA表達(dá)增加，在12 h和24 h時(shí)增加 （P＜0.01）；36 h時(shí)表達(dá)升高沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（見(jiàn)表5）

表5 中藥組對(duì)高糖狀態(tài)下RGC-5細(xì)胞Sigma-1RmRNA表達(dá)的影響

表5 中藥組對(duì)高糖狀態(tài)下RGC-5細(xì)胞Sigma-1RmRNA表達(dá)的影響

注：★★高糖組與正常組比較P＜0.01；▲中藥組與高糖組比較，P＜0.05；▲▲ 中藥組與高糖組比較，P＜0.01

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2.5 Western blot法檢測(cè)RGC-5細(xì)胞BDNF、CNTF及Sigma-1R蛋白水平

BDNF蛋白表達(dá)：高糖組明顯低于正常組，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)量逐漸降低至36 h時(shí)最低。中藥組與高糖組比較，在12 h時(shí)略有升高，在24 h時(shí)表達(dá)量最高，36 h時(shí)降低，但仍明顯高于高糖組。（見(jiàn)圖3）

CNTF蛋白表達(dá)：高糖組明顯低于正常組，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低，至36 h時(shí)最低。中藥組與高糖組比較，在12 h時(shí)略有升高，在24 h時(shí)最高，36 h時(shí)降低，其與β-actin的比值仍高于高糖組。

圖3 Western blot法檢測(cè)RGC-5細(xì)胞BDNF、CNTF及Sigma-1R蛋白水平。σ1：Sigma-1R

Sigma-1R蛋白表達(dá)：高糖組Sigma-1R蛋白表達(dá)明顯低于正常組，參照與β-actin的比值各時(shí)間點(diǎn)未見(jiàn)明顯差異。中藥組與高糖組比較，在12 h、24 h時(shí)表達(dá)量升高明顯，36 h時(shí)表達(dá)量降低，其與β-actin的比值仍高于高糖組。

3 討論

DR的研究重點(diǎn)一直在于微血管病變，近年來(lái)的研究表明[1-3],DR神經(jīng)元的損傷發(fā)生在微血管改變之前，因此重視對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的防護(hù)對(duì)于早期DR的防治具有重要意義。本課題組長(zhǎng)期采用中醫(yī)藥對(duì)DR進(jìn)行防治，提出“心腎論治早期DR”的新思路，并在此辨證思路的指導(dǎo)下創(chuàng)立密蒙花方，對(duì)于早期DR臨床上取得良好療效。密蒙花方是在密蒙花、交泰丸（黃連、肉桂）的基礎(chǔ)上加黃芪、女貞子、益母草等藥而成。諸藥相配，具有益氣養(yǎng)陰、和血明目的作用。

視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 (retinal ganglion cell，RGC)是視網(wǎng)膜內(nèi)層的主要組成部分，是視覺(jué)器官的第三神經(jīng)元，其樹(shù)突在內(nèi)叢狀層，軸突形成軸索穿出眼球進(jìn)入神經(jīng)纖維層，構(gòu)成視神經(jīng)，由視神經(jīng)將視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞感受到的光刺激信息傳遞至大腦枕葉完成視功能，是具有視網(wǎng)膜視覺(jué)信號(hào)輸出功能的神經(jīng)元。RGCs進(jìn)行性死亡是視功能不可逆性損害的主要原因。研究表明，RGCs損傷是糖尿病視網(wǎng)膜病變中的重要環(huán)節(jié)，保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞會(huì)延緩糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生[1]。

Whitmire W[2]發(fā)現(xiàn)DR早期視網(wǎng)膜損傷可表現(xiàn)為：視網(wǎng)膜內(nèi)層RGCs數(shù)目減少，RGCs損害的主要途徑是RGCs軸突軸漿運(yùn)輸阻斷導(dǎo)致神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子缺乏，造成RGCs的原發(fā)性損傷，通過(guò)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，激發(fā)一系列級(jí)聯(lián)式反應(yīng)，激活了某些誘導(dǎo)凋亡的基因，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步引起RGCs的繼發(fā)性損害。因此補(bǔ)充神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡可能有一定的防治作用。動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)充腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子可減少R GC凋亡［3］。RGCs存活或軸突再生依賴于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。其中腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）、視網(wǎng)膜睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 (CNTF)在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和Muller纖維中表達(dá),并且對(duì)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的生存起重要作用[4-5]。

國(guó)內(nèi)外大量研究證實(shí)，體外培養(yǎng)時(shí)25～30mmol/L的高糖濃度，可等同于糖尿病時(shí)體內(nèi)高糖狀態(tài)[6]，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與此相符。研究采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖顯示高糖組吸光度值顯著降低抑制RGC-5增殖（P＜0.01），與高糖組比較，中藥組吸光度值顯著升高，表現(xiàn)出明顯的促進(jìn)RGC-5增殖的作用，并且呈濃度依賴關(guān)系（P＜0.01）。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)RGC-5細(xì)胞凋亡率證明高糖可誘導(dǎo)GRC-5出現(xiàn)凋亡，且呈時(shí)間依賴性。本試驗(yàn)研究通過(guò)mRNA和蛋白表達(dá)檢測(cè)，證實(shí)睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和腦源性營(yíng)養(yǎng)因子水平在高糖下表達(dá)下降，而在中藥組表達(dá)升高。提示密蒙花方含藥血清可通過(guò)升高細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)生長(zhǎng)因子水平，從而起到保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的作用。

Sigma受體曾被視為阿片類受體的一個(gè)亞型，它參與保護(hù)神經(jīng)、影響細(xì)胞活性和增殖、調(diào)節(jié)離子通道等生物學(xué)功能。研究表明[7]，Sigma-1R的激活能夠抑制谷氨酸興奮性毒性所致的培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)元的凋亡,其機(jī)制可能與抑制NMDAR和AMPAR介導(dǎo)的Ca2+內(nèi)流，阻止胞內(nèi)鈣超載有關(guān)[8]。本研究中糖尿病模型組Sigma-1R蛋白水平降低，中藥組與DM模型組相比，Sigma-1R蛋白水平升高，提示密蒙花方能通過(guò)調(diào)節(jié)Sigma-1R參與抑制谷氨酸興奮性毒性,發(fā)揮保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的作用，有研究提出Sigma-1R與GRP78結(jié)合后被激活參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激[9]。其如何通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑發(fā)揮作用有待進(jìn)一步研究。

密蒙花方是高健生研究員通過(guò)多年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出來(lái)防治糖尿病視網(wǎng)膜病變有效的方劑，臨床觀察具有防護(hù)早期糖尿病視網(wǎng)膜病變作用[10-11]。本研究中，中藥密蒙花方可以上調(diào)睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和腦源性營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)，Sigma-1RmRNA及蛋白水平升高，且體外培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡明顯減少，進(jìn)而推斷密蒙花方可防治高糖下體外培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞發(fā)生凋亡和損傷，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF、CNTF表達(dá)和Sigma介導(dǎo)有關(guān)。