中性粒細(xì)胞參與大皰性類天皰瘡發(fā)生的相關(guān)機(jī)制

王亞男，趙文玲，李 麗

作者單位:100730北京，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院皮膚科

大皰性類天皰瘡 (bullous pemphegoid，BP)是一種獲得性自身免疫性皰病，臨床上以軀干、四肢出現(xiàn)張力性大皰為主要特點(diǎn)。BP患者體內(nèi)的循環(huán)自身抗體，如抗BP180、BP230抗體，攻擊真表皮交界處半橋粒的組分BP180(BPAG2或XVII型膠原)、BP230(BPAG1e)，通過激活補(bǔ)體、肥大細(xì)胞脫顆粒、中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞聚集等過程產(chǎn)生多種蛋白酶，降解真表皮交接處的正常組織結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致真表皮分離，產(chǎn)生水皰［1］。早在1997年，Liu等［2］發(fā)現(xiàn)被動(dòng)轉(zhuǎn)移鼠模型注射抗鼠BP180抗體可誘發(fā)水皰的形成，而用抗中性粒細(xì)胞特異性抗體消耗小鼠循環(huán)中的中性粒細(xì)胞后可見IgG、C3沉積在真表皮交界處，但沒有炎癥反應(yīng)或水皰發(fā)生。由此證實(shí)中性粒細(xì)胞在BP的發(fā)生中起到至關(guān)重要的作用，中性粒細(xì)胞的有無直接決定了水皰能否形成。Oswald等［3］通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用Ly-6G特異性單克隆抗體可使BP動(dòng)物模型外周血中中性粒細(xì)胞明顯減少，預(yù)先用Ly-6G單克隆抗體消耗中性粒細(xì)胞后BP動(dòng)物模型的水皰臨床活動(dòng)評(píng)分明顯降低，說明消耗中性粒細(xì)胞可以部分地抑制水皰的形成。血液中中性粒細(xì)胞變化與BP的關(guān)系正在引起更多的關(guān)注，為了更深入地了解BP的發(fā)病機(jī)制，本文就中性粒細(xì)胞參與BP的炎癥反應(yīng)過程進(jìn)行綜述，為BP的防治研究尋找潛在的靶點(diǎn)。

1 中性粒細(xì)胞的早期聚集

BP180IgG抗體在攻擊真表皮交界處時(shí)，抗體Fab及Fc段分別結(jié)合相應(yīng)受體參與下游反應(yīng)，其中抗體Fab段與抗原BP180的結(jié)構(gòu)域，即主要的抗原致病表位NC16A結(jié)合，并通過巨胞飲的方式內(nèi)吞入表皮角質(zhì)形成細(xì)胞［4］，而抗體Fc段與中性粒細(xì)胞免疫球蛋白 (Ig)Fc段受體FcRIII結(jié)合［5］，明顯加快致病性抗體的降解，降低致病性抗體的循環(huán)半衰期，從而減少致病性IgG抗體［6］?？乖贵w結(jié)合后激活補(bǔ)體通路，包括經(jīng)典激活途徑和旁路激活途徑，其中經(jīng)典激活途徑是參與BP發(fā)生的主要途徑［7］，生成補(bǔ)體C3a、C5a等，其中經(jīng)典補(bǔ)體激活途徑的產(chǎn)物C5a可通過直接及間接的方式促進(jìn)中性粒細(xì)胞聚集，一方面作為中性粒細(xì)胞趨化因子直接誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞趨化［5］;另一方面，通過刺激局部細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)，如白細(xì)胞介素 (interleukin，IL)-8，間接誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞聚集［7］，減少中性粒細(xì)胞向皮損處聚集，進(jìn)而對(duì)BP起到治療作用［8］。同時(shí)C3a和 C5a可共同激活肥大細(xì)胞，后者釋放糜蛋白酶，促進(jìn)中性粒細(xì)胞聚集。因此抗原抗體結(jié)合后主要通過補(bǔ)體激活及肥大細(xì)胞脫顆粒，促進(jìn)中性粒細(xì)胞聚集，此為中性粒細(xì)胞的早期聚集［9-11］。

另外，在中性粒細(xì)胞聚集過程中還需要整合素介導(dǎo)的黏附及滲出。Liu等［2］分別用抗淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1(lymphocyte function associated antigen-1，LFA-1)(CD11a/CD18)抗體、抗巨噬細(xì)胞抗原復(fù)合體1(macrophage antigen complex-1，MAC-1)抗體 (CD11b/CD18)對(duì)野生型小鼠進(jìn)行預(yù)處理，發(fā)現(xiàn)注射了BP180致病性IgG抗體的小鼠并沒有水皰產(chǎn)生，且MAC-1基因敲除小鼠體內(nèi)出現(xiàn)中性粒細(xì)胞的浸潤，最終沒有水皰產(chǎn)生。說明中性粒細(xì)胞表面的整合素LFA-1及MAC-1對(duì)于中性粒細(xì)胞的聚集發(fā)揮了重要的作用，其中LFA-1主要參與早期及晚期中性粒細(xì)胞的聚集;而MAC-1主要作用于晚期中性粒細(xì)胞的聚集及凋亡［12-13］。同時(shí)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，一種在BP患者皰液中大量存在的中性粒細(xì)胞趨化因子脂質(zhì)介質(zhì)白三烯B4(lipid mediator leukotriene B4，LTB4)及其受體BLT1在中性粒細(xì)胞的聚集過程中也發(fā)揮關(guān)鍵作用。LTB4是致病性BP180抗體沉積于真表皮交界處后中性粒細(xì)胞浸潤皮膚的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因子，缺乏LTB4合成的關(guān)鍵酶5-脂氧合酶的小鼠表現(xiàn)出抵抗中性粒細(xì)胞募集的現(xiàn)象，因而炎癥反應(yīng)受到抑制［14-15］。研究發(fā)現(xiàn)，減少中性粒細(xì)胞聚積至30%即可抑制表皮下水皰的形成，因此，中性粒細(xì)胞的量與疾病的嚴(yán)重性直接相關(guān)［13］。

2 中性粒細(xì)胞對(duì)皮膚組織的損傷機(jī)制及晚期聚集

聚集的中性粒細(xì)胞釋放中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶 (neutrophil elastase，NE)、組織蛋白酶 (cathepsin G，CG)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9，MMP-9)［6］，共同參與組織基底膜的損傷。Lin等［12］研究發(fā)現(xiàn)，缺乏NE的小鼠不能誘發(fā)出BP，NE的主要作用是降解BP180的胞外結(jié)構(gòu)域，形成多肽P561及P506，B6小鼠局部注射NE后可促進(jìn)中性粒細(xì)胞向皮膚浸潤，而注射α1蛋白酶抑制劑可完全阻斷上述中性粒細(xì)胞趨化過程，主要原因在于NE降解BP180的多肽產(chǎn)物P561對(duì)中性粒細(xì)胞具有趨化作用。α1蛋白酶抑制劑是主要的NE抑制劑，其活性中心環(huán)與目標(biāo)絲氨酸蛋白酶結(jié)合可形成高度穩(wěn)定的、滅活的絲氨酸蛋白酶復(fù)合物，從而抑制絲氨酸蛋白酶，即中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的降解作用。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，先天性α1蛋白酶抑制因子缺乏的患者對(duì)NE的抑制作用減弱，過多的NE可降解肺泡壁的蛋白組分，造成肺氣腫，因此，國外已將α1蛋白酶抑制劑用于部分肺氣腫患者的治療［16］，目前尚無治療BP的相關(guān)報(bào)道。MMP-9通過間接抑制α1蛋白酶抑制劑來調(diào)節(jié)NE的活性，MMP-9與NE還可將BP180切割成一些三肽，例如脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸 (proline-glycine-proline，PGP)，對(duì)中性粒細(xì)胞產(chǎn)生趨化作用［6］，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞進(jìn)一步聚集，炎癥反應(yīng)加重，形成炎癥的正反饋環(huán)路，此即中性粒細(xì)胞的晚期聚集。因此NE、MMP-9除了具有對(duì)BP180及胞外基質(zhì)的切斷作用外，還參與促進(jìn)晚期中性粒細(xì)胞的聚集作用［12］(圖1)。此外中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞可產(chǎn)生趨化因子配體10(Cxc chemokine ligand 10，CXCL10)［17］，激活胞外激酶1/2、P38、PI3K(Akt) 通路［18］，進(jìn)一步激活還原型輔酶氧化酶 (nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate oxidase，NADPHO)，產(chǎn)生活性氧［19］，活性氧及血纖維蛋白溶酶系統(tǒng)可激活MMP-9的前體物質(zhì)，促進(jìn)MMP-9的產(chǎn)生。中性粒細(xì)胞與肥大細(xì)胞產(chǎn)生的IL-17可促進(jìn)CXCL10的產(chǎn)生，進(jìn)一步上調(diào)MMP-9與NE 的產(chǎn)生［6，20-21］，甲強(qiáng)龍或復(fù)合體A(一種新型的非甾體激素受體配體)可抑制這個(gè)過程［17，19-20］，說明甲強(qiáng)龍可通過抑制中性粒細(xì)胞而對(duì)BP發(fā)揮治療作用。

圖1 BP發(fā)生和發(fā)展過程中中性粒細(xì)胞對(duì)皮膚組織的損傷機(jī)制IL:白細(xì)胞介素;NE:中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶;MMP-9:基質(zhì)金屬蛋白酶9;CG:組織蛋白酶;PGP:脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸

3 小結(jié)

BP180IgG抗體可攻擊皮膚組織的基底膜帶，通過激活補(bǔ)體、肥大細(xì)胞脫顆粒而促進(jìn)中性粒細(xì)胞的早期聚集，聚集的中性粒細(xì)胞釋放多種蛋白酶以裂解基底膜帶，從而產(chǎn)生水皰;同時(shí)，上述過程中的裂解物通過趨化作用促進(jìn)中性粒細(xì)胞的晚期聚集，加重疾病的嚴(yán)重程度。綜上所述，中性粒細(xì)胞在BP的發(fā)生和發(fā)展中扮演關(guān)鍵的角色，深入了解中性粒細(xì)胞參與BP的分子機(jī)制有助于為BP的治療尋找新的靶點(diǎn)。