觀察多西紫杉醇和維甲酸對前列腺癌細胞系PC-3的體外體內(nèi)協(xié)同作用*

于 博

(莆田學院，福建 莆田 351100)

紫杉醇(PA)指的是從紫衫樹皮及樹葉中提取的天然抗癌新藥，多西紫杉醇指的是半合成紫杉醇衍生物，其主要是利用促進細胞微管聚合，避免微管正常生理解聚，對細胞有絲分裂過程造成影響，其對于多腫瘤都具有一定的誘導凋亡及生長抑制的作用。多西紫杉醇抗腫瘤效果及毒副作用均比紫杉醇優(yōu)。目前，多西紫杉醇在前列腺癌治療中的報道比較少[1]。那么本研究針對多西紫杉醇及維甲酸對于前列腺癌細胞系PC-3的體外體內(nèi)協(xié)同作用進行研究。

1 材料和方法

1.1細胞和培養(yǎng)條件 人前列腺PC-3細胞在10%小牛血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)，添加鏈霉素和青霉素。在37 ℃溫度下通過5%CO2進行常規(guī)培養(yǎng)，使用指數(shù)生長期5×106個細胞在24孔板中接種，培養(yǎng)12h之后添加不同濃度的多西紫杉醇及維甲酸，并且實現(xiàn)空白組、陽性組和陰性組三組。

1.2試劑和藥物 多西紫杉醇與維甲酸均為賽諾菲(杭州)制藥有限公司提供，噻唑藍、碘化丙啶均為上海恒遠生物科技有限公司提供。

1.3藥物處理和分組 將5×106/L細胞接種到96孔板中，每組細胞進行多種濃度多西紫杉醇單一用藥，不同濃度的維甲酸單一用藥，不同濃度的維酸鉀單一用藥，不同濃度維酸鉀和多西紫杉醇處理，并且創(chuàng)建空白組進行對照[2]。

1.4細胞增殖實驗 將各個藥物處理以后的細胞棄上清，對每個孔添加200 μl配置的MTT孵育，棄上清添加二甲基亞砜，混合之后在酶標儀中測定吸光度。

1.5細胞形態(tài)觀察 體外培養(yǎng)細胞通過各組藥物處理之后漂洗三次，丙酮固定八分鐘，95%、80%、70%梯度乙醇脫片，光鏡觀察和HE染色后光鏡觀察細胞形態(tài)。

1.6流式細胞儀分析 通過各組藥物處理24 h和48 h之后的PC-3細胞，消化分離為1×106/ml單細胞懸液，離心沉淀之后通過磷酸鹽緩沖液洗滌三次，并且利用乙醇實現(xiàn)固定，通過流式細胞儀進行分析[3]。

1.7免疫細胞化學 利用各個藥物處理之后的細胞玻片，通過超敏免疫組學化學試劑和進行檢測，以免疫組學化學染色步驟實現(xiàn)染色，如果細胞核中具有棕黃色染色為陽性表達細胞[4]。

1.8統(tǒng)計學分析 本研究數(shù)據(jù)利用SPSS 20.0實現(xiàn)統(tǒng)計學處理，計量資料利用表示，通過t進行檢驗，使用%表示計數(shù)資料，通過χ2進行檢驗，P≤0.05表示數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1多西紫杉醇及維甲酸對PC-3的生長抑制作用 各組藥物在作用24 h、48 h之后對于前列腺癌細胞系PC-2細胞的生長抑制作用結果進行表達，細胞存活率和藥物的濃度存在反比關系，而且還存在劑量依賴性，最為顯著的就是10-6mol/L濃度維甲酸和10-6mol/L多西紫杉醇40 h作用最為明顯(抑制率為72.9%，P<0.05)，見表1。

表1 多西紫杉醇及維甲酸對PC-3的生長抑制作用

2.2形態(tài)學觀察 人前列腺PC-3細胞利用不同濃度和配伍多西紫杉醇和維甲酸處理之后，其主要結果為不同程度的細胞周所、染色質(zhì)凝集及邊緣毛躁，并且嗜堿性提高為深藍色，核膜消失。最為顯著的為10-7mol/L多西紫杉醇和10-5mol/L濃度的維甲酸結合，詳見圖1，最不顯著的就是10-7mol/L維甲酸單一用藥。

圖1 10-7mol/L多西紫杉醇和10-5mol/L維甲酸 對PC-3誘導凋亡情況

3 討 論

目前，我國前列腺癌發(fā)病幾率在不斷地提高，患者常常會因為合并多種疾病不能夠?qū)崿F(xiàn)開放手術，內(nèi)窺鏡腔內(nèi)手術無法有效根治疾病，細胞對于雄激素治療沒有效果，對于一般依賴損傷細胞蛋白質(zhì)及DNA化療藥物具有一定的耐藥性，所以在對前列腺癌治療過程中，其主要目的就是誘導細胞凋亡及抑制生長繁殖[5]。多西紫杉醇能夠?qū)崿F(xiàn)細胞微管聚合，并且對微管正常解聚進行阻礙，對細胞有絲分裂進行影響，以此促進腫瘤細胞凋亡。維甲酸能夠利用細胞維甲酸和蛋白相互結合轉(zhuǎn)運到細胞核中，和核中的特異受體相互結合，實現(xiàn)細胞核中維甲酸信號的傳遞，每兩個維甲酸核受體都會構成二聚體，和靶基因維甲酸反應元件相互結合，對基因網(wǎng)絡活性進行調(diào)控，以此對細胞周期進行影響，實現(xiàn)細胞凋亡的有效促進[6]。

通過本研究表示，多西紫杉醇及維甲酸的相互作用能夠有效誘導前列腺癌細胞PC-3細胞凋亡，并且還能夠促進細胞毒作用，使抑制雄激素有效提高，促進腫瘤細胞凋亡消退。

綜上所述，多西紫杉醇和維甲酸兩者的協(xié)同作用能夠有效提高對前列腺癌細胞系PC-3生長抑制及誘導凋亡的作用，值得臨床推廣使用。