豬瘟病毒微生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

趙嘉寧

摘 要：關(guān)于豬瘟，主要是由豬瘟病毒所引起的具有高度接觸性的傳染病，且具有較高的死亡率，因而受到各國對(duì)該病毒的關(guān)注。而本文主要就針對(duì)豬瘟病毒微生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行重點(diǎn)探討和分析，以期能夠更好的保證有關(guān)豬瘟防控工作的有序進(jìn)行。

關(guān)鍵詞：豬瘟病毒；生物學(xué)；檢測(cè)技術(shù)

因豬瘟是由該病毒所引發(fā)的高傳染性疾病，且在流行范圍較廣，如果得不到及時(shí)的遏制，勢(shì)必會(huì)給養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)重的影響。在這種形勢(shì)下，則需要有關(guān)部門加強(qiáng)對(duì)相關(guān)檢測(cè)技術(shù)的研究和應(yīng)用，以此能夠?qū)υ摬《咀龊孟鄳?yīng)的防控工作，減少病毒感染對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展所產(chǎn)生的影響

一、豬瘟病毒基因結(jié)構(gòu)及功能

（一）豬瘟病毒的基本特征。結(jié)合相關(guān)調(diào)查表明，豬瘟病毒屬于黃病毒科，還包含其它病毒，即，能牛病毒性腹瀉病毒、羊邊界病病毒[1]。因這三種病毒在各方面具有較為密切的聯(lián)系，一旦感染其中一個(gè)病毒，則會(huì)在對(duì)其他病毒產(chǎn)生不同程度的交叉保護(hù)反應(yīng)。另外，豬瘟病毒還可在多個(gè)細(xì)胞中生長繁殖，如豬胚、乳豬啤、腎等。

（二）豬瘟病毒基因組。在這方面，能夠發(fā)現(xiàn)有關(guān)豬瘟病毒的基因組基本上是由三個(gè)部分所組成的，分別是5，非編碼區(qū)（5，UTR）、編碼區(qū)（TR）以及3，非編碼區(qū)（3，UTR）。在這其中，基因組的5，沒有甲基化帽狀結(jié)構(gòu)，且在3，也缺少Poly（A）結(jié)構(gòu)。因而在翻譯相關(guān)起始機(jī)制上與常見的真核生物中的mRNA是不同的。這就需要相關(guān)人員在豬瘟研究工作中注重這方面。

二、關(guān)于豬瘟病毒微生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)

（一）聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)技術(shù)

1.反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)。對(duì)于反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)的出現(xiàn)，已經(jīng)逐漸應(yīng)用在豬瘟病毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中。該技術(shù)的使用，能夠?qū)ωi病中所存在的多種病原進(jìn)行有效區(qū)分，具體就有：口蹄疫病毒、豬細(xì)小病毒以及豬繁殖與呼吸綜合征病毒等[2]。在過去所使用的PCR技術(shù)與常規(guī)實(shí)施診斷方法相比，雖然在方式上更為簡(jiǎn)單，但是在當(dāng)前分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)的快速發(fā)展趨勢(shì)下，該技術(shù)在應(yīng)用過程中所存在的問題也開始凸顯出來。

2.多重RT-PCR。通過對(duì)RT-PCR的改進(jìn)和創(chuàng)新后，已經(jīng)發(fā)展出多重RT-PCR。這種技術(shù)的應(yīng)用，能夠?qū)ωi體內(nèi)中所帶有的各種病原體予以快速檢測(cè)。由此可見，多重RT-PCR作為快速且高速的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)手段，只需要進(jìn)行一次試驗(yàn)工作就能夠?qū)Χ喾N病毒進(jìn)行有效檢測(cè)，進(jìn)而為相關(guān)人員在病原檢測(cè)上提供極大的便利。但是在實(shí)際應(yīng)用過程中，這種方法對(duì)各方面的要求比較高，特別是對(duì)引物設(shè)計(jì)這方面的要求，十分嚴(yán)格。這是因病毒檢測(cè)種類越多，則就需應(yīng)用較多的引物設(shè)計(jì)，因而在此環(huán)節(jié)中，很容易出現(xiàn)失誤，導(dǎo)致擴(kuò)增片段的長度會(huì)受到不同程度的限制。在這種情況下，在這種方法應(yīng)用上，最多可對(duì)2-3種病原進(jìn)行檢測(cè)，如果檢測(cè)到4種及以上病原時(shí)，是會(huì)在一定程度上影響該方式檢測(cè)的靈敏度。

3.套式RT-PCR。關(guān)于套式RT-PCR，又被稱為巢式PCR。主要作用就是對(duì)豬瘟病毒進(jìn)行檢測(cè)以及對(duì)豬瘟病毒與其他病毒進(jìn)行有效區(qū)別。另外，其所具有的敏感度要高于比較常見的PT-PCR，且所具有的特異性也相對(duì)較高。在該技術(shù)中，可通過對(duì)抗原-ELLSA和RT-nPCR 這幾種實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)進(jìn)行深入比較，能夠清楚的發(fā)現(xiàn)，RT-nPCR更加具有優(yōu)越性。同時(shí)也是檢測(cè)豬瘟病毒感染的最重要方法。

4.熒光定量RT-PCR技術(shù)。結(jié)合實(shí)際發(fā)現(xiàn)，當(dāng)前所使用的水解探針模式中的Re-al-time RT–PCR，在檢測(cè)豬瘟病毒中得到較好的應(yīng)用。但是在使中所呈現(xiàn)出的假陰性結(jié)果，則會(huì)在內(nèi)一定程度上凸顯出其所存在的不足[3]。這種情況的出現(xiàn)，主要是因探針的結(jié)合點(diǎn)明顯出現(xiàn)突變，進(jìn)而會(huì)對(duì)接下來的檢測(cè)造成干擾。在這種現(xiàn)象下，基于其他相關(guān)檢測(cè)模式下，如引物探針能量轉(zhuǎn)移等也會(huì)受到干擾。

綜合來說，熒光定量PCR既能夠?qū)悠愤M(jìn)行較好的定量檢測(cè)，同時(shí)還具有較強(qiáng)的特異性，進(jìn)而保障結(jié)果準(zhǔn)確。

（二）DNA芯片技術(shù)。關(guān)于DNA芯片技術(shù)，作為現(xiàn)代化基因診斷技術(shù)，在實(shí)際應(yīng)用中具有較多的優(yōu)勢(shì)，如高效、敏感以及自動(dòng)化等。比如，在Gladue DP，則就可借助DNA芯片技術(shù)，來檢測(cè)豬細(xì)胞中所出現(xiàn)的基因模式以及體外感染豬病毒強(qiáng)株后發(fā)生的反應(yīng)，進(jìn)而幫助相關(guān)人員對(duì)這些基因與先天免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)機(jī)制所存在的聯(lián)系。另外，相關(guān)人員能夠利用DNA芯片技術(shù)，進(jìn)一步檢測(cè)豬瘟病毒。以此能夠在最大程度上保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜合上述，在生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展下，極大的提高我國對(duì)豬瘟病毒分子生物學(xué)的檢測(cè)技術(shù)水平。通過本文對(duì)豬瘟病毒微生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)深入分析后，現(xiàn)階段所使用的豬瘟病毒分子生學(xué)物檢測(cè)技術(shù)，除了傳統(tǒng)的RT-PCR技術(shù)之外，還可根據(jù)實(shí)際需要，使用套式RT-PCR、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)、熒光定量RT-PCR技術(shù)、DNA芯片技術(shù)等。這些檢測(cè)技術(shù)在應(yīng)用上都具有自己的優(yōu)缺點(diǎn)，因而相關(guān)人員在使用這些檢測(cè)方法上，則可將這些方式進(jìn)行適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合，以此能夠達(dá)到取長補(bǔ)短的效果。隨著近幾年我國在分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，促使豬瘟病毒技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中具有更高的靈敏度，推動(dòng)相關(guān)部門對(duì)豬瘟監(jiān)測(cè)工作的有序開展，滿足當(dāng)前社會(huì)發(fā)展對(duì)這方面的要求。

參考文獻(xiàn)：

[1]褚建軍.豬瘟病的防治新方法[J].吉林農(nóng)業(yè)，2018（08）：72.

[2]陳景容.不同豬瘟病毒株在ST細(xì)胞上的增殖研究[J].福建畜牧獸醫(yī)，2017，39（03）：9-11.

[3]吳艷萍.當(dāng)前豬瘟病的特點(diǎn)及免疫失敗原因分析[J].中國動(dòng)物保健，2016，18（12）：3-4.