分散液相微萃取—液質聯(lián)用法快速測定黨參中有機磷農藥殘留

周卿　張艷　楊鑫

摘要：采用分散液相微萃取-液相色譜串聯(lián)質譜儀，建立黨參（Codonopsis Radix）中8種有機磷農藥的快速測定方法。以乙睛為分散劑，氯仿為萃取劑富集黨參中8種有機磷類農藥，采用+MRM監(jiān)測模式檢測，外標法定量。結果表明，8種有機磷農藥在各自濃度范圍內線性關系良好，相關系數(shù)均大于0.990 0；高、中、低3個濃度的加標回收率范圍在76.81%～110.25%；各農藥的方法檢測限范圍為0.006～1.300 μg/kg，表明該方法可用于黨參中多種有機磷農藥殘留量的快速測定。

關鍵詞：黨參（Codonopsis Radix）；有機磷類農藥；分散液相微萃?。灰嘿|聯(lián)用法

中圖分類號：O657.7+2；S567.23+9 文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2018）15-0081-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.15.021 開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Rapid Determination of Organophosphorus Pesticides Residues in Codonopsis Radix by Disperse Liquid-liquid Microextraction Coupled with Liquid

Chromatography-Mass Spectrometry

ZHOU Qing，ZHANG Yan，YANG Xin

（Teaching and Research Section of Pharmaceutical Analysis，College of Pharmacy，Zunyi Medical University，Zunyi 563003，Guizhou，China）

Abstract： To establish disperse liquid-liquid microextraction coupled with liquid chromatography-mass spectrometry（DLLME-LC-MS） method for determination of eight organophosphorus pesticides（dimethoate，dichlorvos，malathion，parathion，phorate，diazinon，ethion，chlorpyriphos） in Codonopsis radix. The eight organophosphorus pesticides in Codonopsis radix which was extracted by trichlormethane，and the acetonitrile was dispersant，then analysed by using mass spectrometric ditection in multiple reaction monitoring（MRM） mode under the optimal chromatographic conditions. The external standard method was adopted for quantitative analysis. The eight organophosphorus pesticides have a good linear relation respectively（r﹥0.999 0）. The recoveries at three spiked levels of eight organophosphorus pesticides ranged from 76.81% to 110.25%，the detection limits were 0.006～1.300 μg/kg. The method can be applied in detection of the organophosphorus pesticides residues analysis in Codonopsis radix.

Key words： Codonopsis radix； organophosphorus pesticides； disperse liquid-liquid microextraction； LC-MS

黨參（Codonopsis Radix）屬桔梗科植物，是傳統(tǒng)的補中益氣藥，同時也是貴州省十大道地藥材之一，在貴州省各地均有種植，但由于使用部位以根為主，使其易受農藥殘留的污染，建立高效、快速的農藥殘留檢測技術是保障其質量的基礎[1]。中藥材中農藥殘留是影響中藥材質量的重要因素之一，有機磷農藥因具有廣譜、高效等特點，是一類廣泛使用的殺蟲劑，各品種毒性不同，多數(shù)屬劇毒和高毒類，有些品種混合使用時還有增毒作用，因此加強中藥材中有機磷農藥殘留的檢測很有必要[2]。在中藥材的農藥殘留分析中，常用的樣品前處理方法有液液萃取、固相萃取、凝膠滲透色譜法等[3-5]，這些方法均需要消耗大量有機溶劑且耗時較長。分散液相微萃取是近年來發(fā)展的一種新型的、綠色的樣品前處理方法，具有樣品使用量小，有機溶劑消耗量少等優(yōu)點[6-8]。本研究選取了貴州省不同產(chǎn)地黨參藥材種植過程中常用或涉及使用的8種有機磷類農藥，采用分散液相微萃取聯(lián)合LC-MS技術，建立了同時快速測定黨參藥材中8種有機磷農藥殘留的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

ABSCIEX QTRAP4000型液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質譜儀（美國AB科技有限公司）；臺式高速冷凍離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）；XW-80A型渦旋混合儀（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；DN-36A型氮吹儀（上海比郎儀器有限公司）。

8種農藥對照品（樂果、對硫磷、甲拌磷、乙硫磷、敵敵畏、二嗪農、馬拉硫磷、毒死碑）均購自農業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所（質量濃度為100 μg/mL）；甲醇、乙睛為色譜純（美國TEDIA公司），氯仿為分析純（成都科龍化工試劑廠）；試驗用水為二次蒸餾水。

黨參藥材購自貴州省各地中藥材市場，經(jīng)遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院藥劑科中藥師楊建文鑒定為真品。

1.2 對照品溶液的配制

分別取樂果、敵敵畏、馬拉硫磷、對硫磷、甲拌磷、乙硫磷、二嗪農、毒死碑對照品溶液適量，用甲醇定容，分別制成濃度為10 μg/mL的對照品溶液，于4 ℃儲存待用。

1.3 樣品的微萃取過程

取黨參藥材，粉碎后過60目篩，精密稱取1.0 g，加入25 mL的甲醇，超聲30 min，經(jīng)微孔濾膜（0.22 μm）過濾后，取100 μL于尖底離心管中，加入900 μL 6% NaCl制成1 mL的黨參樣品溶液。在制備好的黨參溶液中迅速加入300 μL乙腈與90 μL氯仿混合溶液，混勻，使之成為水、分散劑、萃取劑乳狀混濁體系，于渦旋儀上渦旋90 s，再3 500 r/min離心5 min，取下層沉積相用N2吹干，加100 μL甲醇復溶后，進行LC-MS檢測。

1.4 色譜和質譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse plus C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流動相A為水，流動相B為乙腈。流速為0.60 mL/min，梯度洗脫程序：A∶B（95∶5）洗脫10 min，A∶B從95∶5變?yōu)?∶95洗脫10 min，然后保持5∶95比例5 min，共15 min。柱溫30 ℃，進樣量1 μL。

質譜條件：電噴霧離子化正離子模式（ESI+），多反應監(jiān)測（MRM）掃描模式；離子噴霧電壓：4 500 V；離子源溫度550 ℃；霧化氣流速55 mL/min，輔助氣流速55 mL/min，氣簾氣流速40 mL/min；其他相關參數(shù)見表1。離子流見圖1。

2 結果與分析

2.1 黨參藥材提取方法的選擇

在黨參藥材的提取方法中，采用甲醇為提取溶劑，比較了水蒸氣蒸餾、超聲提取、索氏提取3種方法，結果表明，超聲提取具有提取率高，操作簡便、快速的優(yōu)點，故選擇超聲提取法提取黨參藥材中的有機磷類農藥。

2.2 分散液相微萃取條件的優(yōu)化

2.2.1 萃取劑和分散劑的選擇 在分散液相微萃取方法中，萃取劑要求密度大于水，對待測物有較好的萃取效率，對檢測條件沒有干擾。在試驗中考查了常用的氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、甲苯等萃取劑對8種有機磷農藥萃取效率的影響，結果顯示采用氯仿時萃取效率高，且在選定色譜條件下，雜質峰干擾較小，故選擇氯仿作為萃取劑。

分散劑的作用是增加萃取劑在體系里的分散度，從而增大與待測物的接觸面積，在試驗中分別考察了乙腈、四氫呋喃、丙酮為分散劑時的萃取效果，結果顯示使用乙腈為分散劑時可與水及氯仿形成較好的乳濁液體系，萃取效率最高，且峰面積最大，丙酮的萃取率也較好，但出峰有干擾，四氫呋喃的萃取率最低，故選擇乙腈為分散劑。

2.2.2 萃取劑與分散劑體積的優(yōu)化 萃取劑氯仿的加入體積直接影響萃取效率的高低，試驗中考察了加入氯仿體積分別為30、50、70、90、120 μL的萃取效率。結果表明，當氯仿的加入體積為90 μL時，8種有機磷農藥的萃取效率都最高，故選擇萃取劑氯仿加入體積為90 μL。

分散劑乙腈的加入量會影響水/分散劑/萃取劑白色乳狀混濁體系的形成，從而影響萃取效率的高低。乙腈體積偏小，萃取劑未能在水相中分散均勻，不能保證樣品萃取完全，而當乙腈體積偏高時，會使待測物在水相中的溶解度加大，從而降低萃取效率，試驗中考察了乙腈的加入體積分別為100、200、300、400、500 μL時萃取效率的變化。結果表明，當乙睛的體積為300 μL時8種有機磷農藥的萃取效率最高。

2.2.3 萃取時間優(yōu)化 萃取時間是指加入萃取劑/分散劑體系到樣品溶液中后渦旋混勻的時間，混旋是為了增加萃取劑在水相中的分散度，保證萃取效果的完全與穩(wěn)定。試驗中分別考察了混旋時間為30、45、60、75、90、120 s對8種農藥萃取效率的影響，結果顯示當混勻時間為90 s時萃取效率最高，故選擇混旋時間為90 s。

2.2.4 鹽濃度的影響 在體系中加入鹽會影響待測物在水相中的溶解度，從而影響萃取效率。試驗中分別考察了加入0、3%、6%、9%、12%、15%的NaCl溶液對分析農藥萃取效率的影響，結果顯示加入NaCl后萃取效率要明顯高于未加入NaCl，且在加入含鹽量為6%時對各農藥的萃取效率最高。

試驗中還發(fā)現(xiàn)，在優(yōu)化的液相微萃取條件下，對中等極性至弱極性的有機磷類農藥提取效果較好，故該方法更適合于極性偏弱的有機磷類農藥的提取。

2.3 線性范圍、富集因子、定量限、檢測限

取“1.2”項下各對照品溶液，用甲醇稀釋配制含8種農藥的系列對照品溶液，采用“1.3”方法微萃取后，進行LC-MS測定，以峰面積（y）與對照品濃度（x）進行線性回歸，得到各種農藥的線性方程及其相關系數(shù)見表2。由表2可知，8種有機磷農藥在各自的線性范圍內線性關系良好，回歸系數(shù)在0.993 7～0.999 7。通過空白黨參基質加標，以信噪比（S/N=3）測定各農藥的檢測限在0.006～1.300 μg/kg；以信噪比（S/N=10）測定各農藥的定量限在0.02～5.00 μg/kg，表明該方法的檢測限均低于中國藥典中中草藥農藥殘留量的最高規(guī)定[9]。分散液相微萃取方法中的富集倍數(shù)按EF=■（Csed待測物在沉積相中的濃度，C0待測物在樣品中的原始濃度）計算。

2.4 回收率和精密度

在黨參空白基質中添加高、中、低3個濃度水平的對照品混合溶液，按“1.3”方法萃取，每個添加水平重復測定5次（表3）。由表3可知，3個添加水平的平均回收率為76.81%～110.25%，RSD為1.06%～8.60%。

2.5 樣品檢測結果

采用上述建立的方法對貴州省7個不同產(chǎn)地的黨參樣品進行檢測，結果顯示部分產(chǎn)地中有樂果、敵敵畏、馬拉硫磷、二嗪農4種有機磷農藥被檢出，但均低于食品安全國家標準中農藥最大殘留限量。

3 小結

建立了分散液相微萃取-液相質譜法快速測定黨參中8種有機磷農藥殘留的方法。該方法中樣品的微萃取方法相較于其他方法在樣品前處理時間方面大大縮短，且有機溶劑使用量少、富集倍數(shù)高、操作簡便，可用于快速提取中藥材中微量甚至痕量級的農藥殘留，測定結果準確、可靠，靈敏度高，可用于黨參藥材中多種有機磷類農藥殘留的檢測。

參考文獻：

[1] 鄒元鋒，曹朝生，劉 江，等.黨參質量評價研究進展[J].中草藥，2010，41（3）：3-5.

[2] 牛佳鈺，肖純凌.有機磷農藥的殘留危害及檢測方法研究[J].安徽農業(yè)科學，2016，44（16）：87-89.

[3] 張婷亭，王靜靜，鞏志國，等.分散固相萃取-超高效液相色譜-質譜/質譜法測定干果果肉中56中農藥殘留[J].分析試驗室，2016，35（3）：287-289.

[4] 王連珠，周 昱，陳 泳，等.QuEChERS樣品前處理-液相色譜-串聯(lián)質譜法測定蔬菜中66種有機磷農藥殘留量方法評估[J].色譜，2012，30（2）：146-148.

[5] 曾家源，黃碩俊.有機磷農藥檢測方法的研究進展[J].廣東化工，2015，42（5）：70-71.

[6] REZAEE M，ASSADI Y，MILANIHOSSEINI M，et al.Determination of organic compounds in water using dispersive liquid-liquid Microextraction[J].Journal of Chromatography A，2006， 1116（1-2）：1-9.

[7] 張憲臣，華洪波，薄艷娜，等.超聲輔助分散液液微萃取-高效液相色譜法測定護膚水中9種熒光增白劑[J].分析測試學報，2016，35（11）：1451-1454.

[8] 孫 鵬，高玉玲，王金梅，等.漂浮固化分散液-液微萃取-氣相色譜法測定液態(tài)奶中5種擬除蟲菊酯類農藥殘留[J].農藥學學報，2016，18（4）：497-499.

[9] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（四部）[M].2015版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.