土生鱗傘菌絲體多糖對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)及抗氧化功能的初步探究

陳佳　李作美

【摘 要】磷傘菌是世界分布廣泛的一種藥食兩用菌菇，本文以我國(guó)特有土生磷傘菌為樣本，通過建立免疫低下動(dòng)物模型，研究土生鱗傘菌絲體多糖對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)及抗氧化功能，為該鱗傘菌絲體多糖功能性產(chǎn)品開發(fā)提供一定的理論依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】鱗傘菌；多糖；免疫；抗氧化

中圖分類號(hào)： TQ920.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 2095-2457（2018）17-0080-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.17.039

【Abstract】Phomatochoria is a kind of mushroom distributed in the world widely. In this study， immunocompromised animal model was established， to research the effect of polysaccharide from Pholiota dinghuensis Bi on immunologic and anti-oxidation function in rats. The results could provide a theoretical basis for development of functional product.

【Key words】Pholiota dinghuensis Bi；Polysaccharide；Immunologic；Anti-oxidation function

真菌是一種含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分以及獨(dú)特藥效物質(zhì)，既能滋補(bǔ)養(yǎng)生，又能防病益壽的日常保健食品。食用菌含有大量的多糖并且種類繁多，在對(duì)其功能研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，食用菌多糖具有提高免疫功能、預(yù)防心血管疾病、抗衰老、抗氧化、預(yù)防腫瘤等多種生理活性，如靈芝、香菇等。磷傘菌為常見菌菇類，本文以我國(guó)特有土生磷傘菌為樣本，提取純化磷傘菌絲體多糖，通過動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)，研究土生鱗傘菌絲體多糖對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)及抗氧化功能，為該菌未來功能性產(chǎn)品開發(fā)提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

土生鱗傘菌絲體多糖樣品，本實(shí)驗(yàn)室通過DEAE分離后，使用SephadexG-100凝膠柱純化鑒定，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度大于98.9%。MDA、SOD、NO測(cè)定試劑盒，IL-2、TNF-αElisa測(cè)定試劑盒均購(gòu)于R & D公司，其中各試劑盒內(nèi)微孔板內(nèi)表面已包被大鼠抗特異性單克隆抗體各指標(biāo)均按試劑盒說明進(jìn)行規(guī)范操作。

1.2 動(dòng)物飼養(yǎng)及模型的建立

125只Balb/c小鼠，體重100-105克，購(gòu)自省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。按體重相似隨機(jī)分為5組，空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、低劑量組、中劑量和高劑量組。以寵物小鼠飼料預(yù)飼3天，并觀察動(dòng)物生長(zhǎng)狀況。建立模型：除空白對(duì)照組外，其余4組小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺（80mg/kg·d）3天，建立免疫抑制模型。建模后，低、中、高劑量組分別以20mg/kg·d、40mg/kg·d、80mg/kg·d 三種濃度的土生鱗傘菌絲體多糖灌胃7天，空白對(duì)照組、模型對(duì)照組以等體積無菌生理鹽水灌胃7天。

1.3 采樣

飼養(yǎng)期結(jié)束后，采用擊昏后斷頭采血，血液離心后，血清于-20℃保存待測(cè)內(nèi)臟稱重。器官指數(shù)=臟器重量（g）/體重（g）×100

1.4 指標(biāo)測(cè)定

血清NO 和總NOS 活性測(cè)定： 酶法；SOD 總活力測(cè)定：黃嘌呤氧化酶法；MDA 含量測(cè)定：TBA 法；IL-2、TNF-α采用酶聯(lián)免疫ELISA法測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

所有結(jié)果采用SAS9.0software進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 土生鱗傘菌絲體多糖對(duì)小鼠肝臟、脾臟指數(shù)的影響

從表1結(jié)果看出，模型對(duì)照組較空白組、劑量組的肝臟、脾臟指數(shù)明顯下降，說明環(huán)磷酰胺致小鼠免疫低下，免疫抑制模型構(gòu)建有效。與模型對(duì)照組相比，土生鱗傘菌絲體多糖的三個(gè)劑量組均能顯著提高肝臟、脾臟指數(shù)（P<0.05）。

2.2 土生鱗傘菌絲體多糖對(duì)小鼠血清NO 和總NOS 活性

表2結(jié)果表明，小鼠血清中總NOS活性，土生鱗傘菌絲體多糖劑量組顯著高于模型對(duì)照組（P<0.05），而劑量組小鼠血清NO含量顯著低于模型對(duì)照組（P<0.05），說明土生鱗傘菌絲體多糖具有增強(qiáng)機(jī)體抗氧化功能，提高NOS活性，抑制NO產(chǎn)生。

2.3 土生鱗傘菌絲體多糖對(duì)小鼠IL-2、TNF-α的影響

從表3結(jié)果可以看出，較模型對(duì)照組，土生鱗傘菌絲體多糖劑量組小鼠血清IL-2和TNF-α水平顯著高于模型對(duì)照組（P<0.05），并且高劑量組小鼠血清IL-2和TNF-α水平顯著高于空白對(duì)照組。說明土生鱗傘菌絲體多糖具有調(diào)節(jié)免疫功能的作用，能夠改善和緩解機(jī)體免疫低下狀態(tài)。

2.4 土生鱗傘菌絲體多糖對(duì)小鼠SOD、MDA水平的影響

表4結(jié)果表明，隨著土生鱗傘菌絲體多糖劑量的增加，小鼠血清SOD酶活性升高（P<0.05），機(jī)體MDA水平下降。說明土生鱗傘菌絲體多糖可以刺激體內(nèi)SOD酶活，抑制脂質(zhì)過氧化的發(fā)生，在一定程度上提升了機(jī)體的抗氧化能力。

3 討論

NO作為自由基及傳遞介質(zhì)在傳遞調(diào)節(jié)信息、參與炎癥和組織細(xì)胞的損傷和增殖、胃腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)和粘膜保護(hù)等，當(dāng)機(jī)體內(nèi)NO生成失衡時(shí)，則會(huì)誘發(fā)疾病[1]。機(jī)體產(chǎn)生的自由基能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，并因此形成脂質(zhì)過氧化物，是自由基毒性的具體表現(xiàn)。MDA是不飽和脂肪酸過氧化作用的最終產(chǎn)物，其機(jī)體內(nèi)水平高低反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度及細(xì)胞受損程度，而血清中SOD活力的高低則反映機(jī)體清除氧自由基的能力。本研究結(jié)果表明，小鼠在灌服土生鱗傘菌絲體多糖制劑后，血清中NO、MDA水平下降，SOD、NOS活性增高，并且具有劑量依賴性。說明土生鱗傘菌絲體多糖能夠增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，抑制脂質(zhì)氧化。IL-2是免疫反應(yīng)和炎性反應(yīng)中重要的調(diào)節(jié)劑，可通過激活JAK/STAT信號(hào)通路，刺激細(xì)胞增殖，其在發(fā)揮自分泌作用的同時(shí)，還增強(qiáng)CTL的細(xì)胞毒活性，增強(qiáng)細(xì)胞間的接觸和誘導(dǎo)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，誘導(dǎo)NK細(xì)胞增殖，增強(qiáng)NK細(xì)胞的活性，誘導(dǎo)LAK細(xì)胞和TIL，活化B細(xì)胞，促進(jìn)免疫球蛋白分泌[2]。TNF-α由巨噬細(xì)胞分泌的一種小分子蛋白，主要由單核-巨噬細(xì)胞分泌；TNF-β主要由活化的T淋巴細(xì)胞分泌，兩者有相似致熱性[3]，在腫瘤的形成、免疫反應(yīng)和應(yīng)激反應(yīng)方面都具有重要的作用[4]，而IL-2可誘導(dǎo)產(chǎn)生促炎因子TNF-а。本研究結(jié)果表明，小鼠服用土生鱗傘菌絲體多糖后，免疫器官重量增加，并且IL-2和TNF-α水平升高，說明土生鱗傘菌絲體多糖具有調(diào)節(jié)免疫的作用，在一定程度上可促進(jìn)機(jī)體免疫功能。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明土生鱗傘菌絲體多糖能夠增強(qiáng)小鼠機(jī)體抗氧化能力，在一定程度上調(diào)節(jié)機(jī)體免疫水平，促進(jìn)免疫功能。

【參考文獻(xiàn)】

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