十八反藥對(duì)甘草與甘遂配伍前后及其相應(yīng)經(jīng)方甘遂半夏湯對(duì)大鼠臟器及生化指標(biāo)影響的研究

王嘉琛，葉 花，劉 培，王鵬飛，劉炳辰，段秀俊

（山西中醫(yī)藥大學(xué)，山西太原030024）

“十八反”是中藥的傳統(tǒng)配伍禁忌，自張子和在《儒門(mén)事親》總結(jié)“十八反”以來(lái)，一直沿用至今，但自古以來(lái)破禁者屢見(jiàn)不鮮，如醫(yī)圣張仲景、藥王孫思邈、國(guó)醫(yī)大師朱良春等。甘草配伍甘遂是十八反藥對(duì)之一，張仲景《金匱要略》中的甘遂半夏湯即含有甘草與甘遂，功在濬痰逐飲，用于治療留飲脈伏，其人欲自利，利后雖自覺(jué)輕快，但心下仍然堅(jiān)滿(mǎn)者?，F(xiàn)代常用于治療肝硬化腹水、腫瘤等重癥急癥，也有獨(dú)特的療效［1］。

本實(shí)驗(yàn)選甘草與甘遂藥對(duì)及其相應(yīng)經(jīng)方甘遂半夏湯作為研究對(duì)象，通過(guò)考察甘草與甘遂配伍前后及其回歸到方劑對(duì)大鼠臟器指數(shù)及血清生化指標(biāo)的影響，循單藥→對(duì)藥→全方的路徑探究十八反藥對(duì)配伍的毒性變化情況，以期為十八反藥對(duì)的配伍研究及臨床應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)健康8 w齡Wistar大鼠50只，雌雄各半，體質(zhì)量180～220 g，由山西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)動(dòng)物中心提供，合格證：SCXK2009-0001。

1.1.2 儀器與試劑 FB124型分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）、HC-2518高速離心機(jī)（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）、BCD-196TMBA冰箱（青島海爾股份有限公司）、移液器（購(gòu)自上海盛創(chuàng)醫(yī)療器械有限公司椒江分公司），DNM-9602酶標(biāo)分析儀（北京普朗新技術(shù)有限公司）、TU-1810型紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TP）及白蛋白（ALb）試劑盒均由中生北控生物科技股份有限公司提供。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)藥材 甘遂為大戟科多年生草本植物甘遂的塊根，購(gòu)自安國(guó)市康達(dá)中藥材有限公司；甘草為豆科植物甘草的干燥根，購(gòu)自安國(guó)市康達(dá)中藥材有限公司；半夏為天南星科植物半夏的干燥塊莖，購(gòu)自亳州市萬(wàn)珍中藥飲片廠；白芍為毛茛科植物芍藥的干燥根，購(gòu)自安國(guó)市神禾中藥材飲片有限責(zé)任公司。以上藥材均由山西中醫(yī)藥大學(xué)裴香萍副教授鑒定為正品。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 藥液的制備 按甘遂半夏湯處方比例（炙甘草、甘遂、半夏、芍藥質(zhì)量比為 2∶1∶3∶5），精密稱(chēng)取甘草、甘遂單味藥、甘草與甘遂對(duì)藥、甘遂半夏湯全方，分別加水煎煮2次，每次30 min，合并煎液，分別濃縮至甘草2 kg/L，甘遂1 kg/L，甘草+甘遂3 kg/L，甘遂半夏湯11 kg/L，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 分組與給藥 健康Wistar大鼠50只，自由取食飲水，室內(nèi)溫度20℃～25℃，相對(duì)濕度40%～65%。適應(yīng)性飼養(yǎng)2 d。采用隨機(jī)區(qū)組法分為5組，每組10只，分別為生理鹽水組（對(duì)照組）、甘草組、甘遂組、甘遂+甘草組及甘遂半夏湯組。每天以0.2 mL/10 g的給藥體積灌胃各組藥液1次，連續(xù)灌服7 d，之后腹腔注射水合氯醛麻醉，腹腔主動(dòng)脈取血，以3 000 rpm離心15 min，分離血清。按照試劑盒方法檢測(cè)血清肝功能指標(biāo)。同時(shí)取心、肝、腎、脾稱(chēng)重，計(jì)算臟器指數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用方差分析，t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 對(duì)臟器指數(shù)的影響

各組之間大鼠心、肝、腎、脾臟器指數(shù)相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 對(duì)大鼠各臟器指數(shù)的影響 （g/100 g，±s）

表1 對(duì)大鼠各臟器指數(shù)的影響 （g/100 g，±s）

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2.2 對(duì)血清生化指標(biāo)的影響

甘草+甘遂組與對(duì)照組及甘遂半夏湯組比較，ALT 和 AST 明顯增高（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ALP、TP及ALb各組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 對(duì)大鼠血清生化指標(biāo)的影響 （±s）

表2 對(duì)大鼠血清生化指標(biāo)的影響 （±s）

注：與對(duì)照組比較，1）P＜0.05；與甘遂半夏湯組比較，2）P＜0.05

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3 討 論

甘遂，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，因其有毒，被列為下品。具有瀉水逐飲、破積通便功效，臨床上廣泛用于治療手術(shù)后粘連性腸梗阻［2］、重癥急性胰腺炎［3］、肝硬化所致腹水［4］等。然而甘遂對(duì)口腔、胃腸道、眼、皮膚黏膜等具有嚴(yán)重的刺激性，并有促發(fā)炎癥［5］、肝毒性［6］等副作用，尤其是在與甘草的合用中，常有爭(zhēng)議［7-9］。故實(shí)驗(yàn)選擇了甘草-甘遂作為研究對(duì)象，考察其于配伍前后及回歸到方劑中的毒性變化情況。

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)甘遂單味藥組中各項(xiàng)結(jié)果與對(duì)照組結(jié)果相差不大，可以推測(cè)甘遂單味藥在適宜劑量?jī)?nèi)對(duì)臟器影響并不明顯；甘草組中TP與對(duì)照組比較變化較明顯，可能與甘草的甜膩?zhàn)饔?，使血液中的水分相?duì)量減少相關(guān)［10］；甘草+甘遂組與對(duì)照組相比血清ALT和AST含量顯著增高，而甘遂半夏湯組與甘草+甘遂組相比血清ALT和AST含量顯著降低，表明十八反藥對(duì)甘遂、甘草配伍對(duì)大鼠肝細(xì)胞有損傷作用，配伍之后毒性增加，屬于配伍禁忌，與傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論相吻合。但甘遂半夏湯的全方配伍又可顯著降低十八反藥對(duì)甘草配伍甘遂對(duì)肝細(xì)胞的損傷，也從實(shí)驗(yàn)的角度說(shuō)明十八反藥對(duì)只要合理配伍也可用于臨床，研究結(jié)果也為十八反藥對(duì)自古至今的廣泛使用提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

肝臟作為人體最大的解毒器官，對(duì)于蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、脂肪、維生素等多種物質(zhì)的代謝起著重要的作用，是維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境平衡必不可少的環(huán)節(jié)。因此實(shí)驗(yàn)除采用臟器指數(shù)來(lái)表征十八反藥對(duì)甘草-甘遂及甘遂半夏湯對(duì)動(dòng)物臟器的毒性影響外，主要采用多種生化指標(biāo)來(lái)表征對(duì)肝臟的毒性影響。實(shí)驗(yàn)選擇臟器指數(shù)作為考察指標(biāo)主要是通過(guò)考察其是否有增生、充血、肥大等現(xiàn)象和萎縮、退化性行為等來(lái)評(píng)價(jià)甘草對(duì)甘遂及甘遂半夏湯對(duì)各臟器的毒性影響，實(shí)驗(yàn)采用ALT表征肝細(xì)胞的損傷程度，AST表征對(duì)肝細(xì)胞能量代謝的影響，ALP來(lái)表征肝外膽管等部位是否有水腫、梗阻等情況，用TP和ALb來(lái)表征血液中蛋白含量的變化。如此通過(guò)臟器指數(shù)及血清生化指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)甘草對(duì)甘遂及甘遂半夏湯對(duì)大鼠的毒性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說(shuō)服力較強(qiáng)。