疣毒凈制劑對(duì)高危型人乳頭瘤病毒感染患者宮頸局部免疫細(xì)胞的影響

唐虹，龍泳伶，劉麗華，孫瓊洋

1.廣東省中醫(yī)院，廣東 廣州 510120

2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州 510006

高危型人乳頭瘤病毒(High risk-human papillomavirus，HR-HPV)持續(xù)感染是宮頸癌變的必要因素。HPV作為一種入侵的微生物病原體，感染后可通過人體自身的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答而清除[1]。目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)針對(duì)HPV多集中在對(duì)疫苗的研究，而廣大已感染HR-HPV的患者尚缺乏有效的治療措施[2]。疣毒凈是廣東省中醫(yī)院的院內(nèi)制劑，用于治療因HPV導(dǎo)致的多種疾病，包括宮頸癌前病變、生殖器尖銳濕疣、皮膚扁平疣等，臨床療效顯著[3～5]。肖靜等[6]研究亦發(fā)現(xiàn)疣毒凈制劑能清除宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級(jí)(CINⅠ)以下患者的HR-HPV，對(duì)宮頸病變程度也有明顯的改善作用。本研究擬通過對(duì)HR-HPV感染患者疣毒凈治療前后宮頸局部免疫細(xì)胞的數(shù)量變化進(jìn)行研究，探討是否存在差異性，為疣毒凈是否能改善HPV感染患者的細(xì)胞免疫功能提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，現(xiàn)總結(jié)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2013年1月—2017年12月于本院婦科門診行宮頸HR-HPV檢測(cè)為陽性，陰道鏡下宮頸活檢病理診斷為HPV感染(SPI)、CINⅠ的70例病例，根據(jù)是否接受疣毒凈制劑治療而分為治療組和對(duì)照組各35例。治療組年齡23～46歲，平均(34.2±7.9)歲；對(duì)照組年齡22～47歲，平均(33.0±7.0)歲。2組年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) HR-HPV(+)，CIN≤Ⅰ級(jí)。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 年齡18～50歲，有性生活史的女性患者；符合診斷標(biāo)準(zhǔn)；患者未參加任何臨床試驗(yàn)，未使用與試驗(yàn)藥物類似療效的藥物；近期無生育要求；無重大臟器疾患；隨訪期間無陰道沖洗，性生活均使用避孕套；愿意配合治療、隨診，并簽署知情同意書。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 有外生殖器真菌、滴蟲感染或其他合并癥；孕婦；免疫功能異?；颊撸粐?yán)重心血管疾病、肝腎疾病、造血系統(tǒng)疾病、全身慢性消耗性疾病患者；精神疾病、癔病患者；有藥物過敏史或變態(tài)反應(yīng)病史；CIN≥Ⅱ級(jí)。

2 研究方法

2.1 治療組 月經(jīng)結(jié)束3天后以10%疣毒凈外洗液(廣東省中醫(yī)院自制，由紫草、虎杖、大青葉、板藍(lán)根、苦參、黃柏等組成)沖洗陰道，抹干宮頸后使用疣毒凈點(diǎn)涂霜(廣東省中醫(yī)院自制，由鴉膽子、紫草、莪術(shù)、明礬、細(xì)辛、白及等組成)點(diǎn)涂宮頸管內(nèi)1 cm至鱗柱交界外側(cè)0.3 cm，限制活動(dòng)5 min后，再使用10%疣毒凈外洗液沖洗陰道。每個(gè)月經(jīng)周期中首周治療3次，之后每周2次，連用3周，治療3個(gè)月經(jīng)周期，共19次。

2.2 對(duì)照組 宮頸不上藥，研究進(jìn)行期間房事需戴避孕套。

3 觀察指標(biāo)與統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3.1 觀察指標(biāo) 治療前以及治療3月結(jié)束后第1次月經(jīng)干凈3～7天行宮頸HR-HPV檢測(cè)，行陰道鏡下宮頸活檢、頸管搔刮，將組織物送病理檢測(cè)。查閱HPV檢測(cè)報(bào)告、病理活檢報(bào)告并記錄。宮頸病變程度指標(biāo)：好轉(zhuǎn)：宮頸病變程度減輕(CINⅠ或HPV感染轉(zhuǎn)為宮頸慢性炎)；維持：宮頸病變程度相同；惡化：宮頸病變程度加重。病理科調(diào)取入組患者宮頸組織活檢的蠟塊進(jìn)行切片，免疫組化染色，測(cè)定宮頸活檢組織中基底層及上皮層中的CD4+、CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算CD4+/CD8+比值。

3.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。計(jì)量資料組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 研究結(jié)果

4.1 2組HR-HPV轉(zhuǎn)陰率比較 見表1。3月后，治療組HR-HPV轉(zhuǎn)陰率為74.3%，對(duì)照組HR-HPV轉(zhuǎn)陰率為14.3%，2組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

表1 2組HR-HPV轉(zhuǎn)陰率比較 例(%)

4.2 2組宮頸活檢結(jié)局比較 見表2。3月后，治療組好轉(zhuǎn)率為88.6%，對(duì)照組好轉(zhuǎn)率為45.7%，2組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表2 2組宮頸活檢結(jié)局比較 例(%)

4.3 2組宮頸組織中CD4+、CD8+細(xì)胞表達(dá)情況比較 見表3。3月后，治療組宮頸組織CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)值較治療前上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)值與治療前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。提示經(jīng)疣毒凈治療后，宮頸局部的CD4+細(xì)胞增加，細(xì)胞免疫力增強(qiáng)。對(duì)照組CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)值與隨訪前比較有所增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)值與隨訪前比較稍有增高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，提示隨訪期間，對(duì)照組宮頸局部的CD4+細(xì)胞增加幅度小，而CD8+細(xì)胞增多，細(xì)胞免疫力減弱。治療組宮頸組織CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)值高于對(duì)照組，CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)值低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。提示疣毒凈能加強(qiáng)CD4+細(xì)胞在宮頸局部的聚集或遷移，同時(shí)抑制CD8+細(xì)胞的聚集，加強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫能力。

表3 2組宮頸組織中CD4+、CD8+細(xì)胞表達(dá)情況比較(±s)個(gè)

表3 2組宮頸組織中CD4+、CD8+細(xì)胞表達(dá)情況比較(±s)個(gè)

與本組治療前/隨訪前比較，①P＜0.05；與對(duì)照組隨訪后比較，②P＜0.05

治療組 對(duì)照組時(shí) 間治療前/隨訪前治療后/隨訪后C D 4+1 6 2.4±4.8 1 9 2.2±4.4①②C D 8+4 9.4±6.4 3 8.6±5.3②C D 4+1 6 3.3±5.8 1 6 7.8±5.3 C D 8+4 1.1±5.9 8 1.7±1 2.7①

4.4 2組宮頸組織CD4+/CD8+比值比較 見表4。3月后，治療組宮頸組織CD4+/CD8+比值≥1的病例數(shù)多于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

表4 2組宮頸組織CD4+/CD8+比值比較 例(%)

5 討論

HR-HPV的持續(xù)感染會(huì)導(dǎo)致宮頸癌前病變及浸潤癌的發(fā)生。感染HPV之后，大部分的患者可通過自身免疫清除，而免疫功能較差的患者則可能持續(xù)感染甚至發(fā)生宮頸病變。正常人群清除HPV的時(shí)間，低危型平均需要5～6月，高危型平均需要 8～14 月[7]。

HR-HPV感染是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病名稱，可歸屬于中醫(yī)學(xué)帶下病的范疇。病因主要為風(fēng)邪、濕熱、寒邪、痰濕、生活因素等。而濕熱則為帶下病主要的致病因素，清熱祛濕解毒為其主要治則。疣毒凈外洗液中的紫草、虎杖、大青葉可清熱涼血，黃柏、苦參、板藍(lán)根可清熱燥濕解毒，全方有清熱祛濕解毒之效，能有效改善陰道微環(huán)境。而疣毒凈點(diǎn)涂霜中的紫草清熱涼血，莪術(shù)破血祛瘀，細(xì)辛祛風(fēng)散寒，均有清熱祛濕解毒之效，因疣毒凈點(diǎn)涂霜內(nèi)含有的鴉膽子有腐蝕贅疣的作用，故上藥時(shí)間不宜超過5～10 min，后需使用疣毒凈洗劑或其他滅菌注射用水清洗，以防灼傷宮頸。同時(shí)，藥方中加入的明礬、白及均可起收斂止血、消腫生肌的作用。陶萍萍等[8]將清熱解毒制劑(包含白花蛇舌草、苦參、大青葉、黃柏、鴉膽子等)作用于宮頸局部來治療宮頸HPV感染，結(jié)果顯示不僅能夠增加HPV清除率，還能上調(diào)Th1分泌的細(xì)胞因子，增強(qiáng)免疫力。本研究結(jié)果顯示，使用疣毒凈治療3月后，治療組HR-HPV清除率達(dá)到74%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)照組，同時(shí)宮頸病理學(xué)結(jié)果也有明顯的改善。

在清除HPV的過程中，細(xì)胞免疫起到關(guān)鍵作用。細(xì)胞免疫由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)，成熟T淋巴細(xì)胞分為CD4+T淋巴細(xì)胞或CD8+T淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞亞群之間的平衡是免疫監(jiān)視、免疫防御、穩(wěn)定發(fā)揮機(jī)體免疫功能的必備條件。CD4+/CD8+比值的正常范圍為1.2～1.9，一旦打破這種平衡，機(jī)體就容易被病原菌所感染，其比值低于1提示免疫功能低下或免疫功能處于抑制狀態(tài)，可能引起腫瘤的發(fā)生[9]。黃志欣等[10]報(bào)道保婦康栓能有效抑制HPV，可能是通過提高宮頸局部的細(xì)胞免疫功能起效，治療后CD4+細(xì)胞陽性率上升，CD8+細(xì)胞陽性率下降，從而發(fā)揮抑制病毒作用。本研究結(jié)果顯示，疣毒凈治療后，治療組宮頸組織中的CD4+細(xì)胞數(shù)較治療前增高(P＜0.05)，但CD8+細(xì)胞數(shù)沒有明顯的變化；對(duì)照組CD8+細(xì)胞數(shù)值較隨訪前升高(P＜0.05)；治療組宮頸組織CD4+/CD8+比值≥1的病例數(shù)多于對(duì)照組(P＜0.01)。因此，疣毒凈可能的作用機(jī)制是通過增加CD4+細(xì)胞表達(dá)，進(jìn)而提高CD4+/CD8+比值，起到改善機(jī)體細(xì)胞免疫功能的作用。

綜上所述，采用疣毒凈制劑治療宮頸HPV感染療效明顯，可有效提高HPV轉(zhuǎn)陰率和宮頸病變的組織學(xué)療效，作用機(jī)制可能與增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能有關(guān)，是防治HPV感染有效的中醫(yī)藥療法。