豬偽狂犬病發(fā)病及其控制凈化試驗(yàn)

韓春華

(江蘇省南京市六合區(qū)畜牧獸醫(yī)站 211500)

豬偽狂犬病 (Pseudorabies.PR)是由皰疹病毒科、亞科中的豬皰疹病毒I型所引起豬、牛、羊等多種家畜和野生動(dòng)物感染的一種以發(fā)熱、奇癢 (除豬外)及腦脊髓炎為主要癥狀的急性傳染病。豬是偽狂犬病的唯一自然宿主，對(duì)其危害大。不同階段豬表現(xiàn)出的癥狀不同，母豬感染癥狀有空懷、不發(fā)情、配不上種，返情率高達(dá)90%，屢配不上，部分胚胎早期死亡、產(chǎn)仔數(shù)少、易流產(chǎn)、前后無明顯癥狀、早產(chǎn)、產(chǎn)弱仔，有的延遲分娩；成年公豬是潛在攜帶者，其攜帶并傳播病毒且不表現(xiàn)癥狀或突然不能使用；仔豬口吐白沫或流涎 (鏈球菌和水腫病均無流涎現(xiàn)象) (第七對(duì)面神經(jīng)麻痹)、角弓反張 (鏈球菌轉(zhuǎn)圈、水腫病半昏迷趴臥不動(dòng))(腦干受損)、個(gè)別豬觸摸反應(yīng)激烈 (神經(jīng)末梢受損或并發(fā)腦膜炎)、死亡率幾乎100%、頑固性拉人樣稀糞；斷奶以后仔豬：發(fā)病率20%～40%，死亡率10%～20%，表現(xiàn)為神經(jīng)癥狀、拉稀、嘔吐。一耳向前一耳向后，或兩耳緊貼腦后，屬第五對(duì)三叉神經(jīng)和第六對(duì)外展神經(jīng)機(jī)能障礙；中、大豬：臨床無癥狀或類感冒癥狀，但發(fā)生混感時(shí)是其中主要潛在病原，起幫兇作用。

偽狂犬基因缺失疫苗注射動(dòng)物后，動(dòng)物不能產(chǎn)生針對(duì)缺失蛋白的抗體，通過相應(yīng)缺失蛋白建立的血清學(xué)方法可以將感染野毒的血清學(xué)陽性豬與基因缺失疫苗豬區(qū)分開來。偽狂犬病目前已完成全基因組測(cè)序，多種與毒力和免疫原性相關(guān)的基因均已被定位，如TK、gG、gE、gB、gC、gD、gI等，其中TK為該病毒主要的毒力基因，目前Bartha、Buk毒株 (缺失gE基因)使用較多。代表疫苗：豬偽狂病活疫苗 (K61株)天然基因缺失弱毒苗，是一種gI、gE雙基因缺失弱毒疫苗，保留TK基因，該基因缺失阻斷弱毒株回復(fù)毒力的可能性，安全性高、產(chǎn)生免疫力快。本次2個(gè)試驗(yàn)場(chǎng)均使用揚(yáng)州威克生物工程有限公司生產(chǎn)的偽狂犬活疫苗Bartha-K61株。

本試驗(yàn)?zāi)康臄M在綜合國內(nèi)外凈化和根除豬場(chǎng)偽狂犬病科技與實(shí)踐成果的基礎(chǔ)上，立足六合區(qū)內(nèi)現(xiàn)有條件和技術(shù)，并結(jié)合本地實(shí)際情況進(jìn)行技術(shù)集成和現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)示范，以期探索并制訂一整套符合六合區(qū)實(shí)際情況、可操作性強(qiáng)的豬場(chǎng)偽狂犬病控制凈化方案，為六合區(qū)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)實(shí)施偽狂犬病控制凈化乃至根除規(guī)范的制定提供技術(shù)支撐。

1 試驗(yàn)材料與方法

本試驗(yàn)于2015年7月至2017年4月，對(duì)試驗(yàn)中所選擇2個(gè)種豬場(chǎng)進(jìn)行PRV-gE抗體監(jiān)測(cè)，每次樣品的采集、檢測(cè)、陽性豬的隔離處理都10d內(nèi)完成。

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 疫苗

豬偽狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗（Barth-k61弱毒株），國藥集團(tuán)揚(yáng)州威克生物工程有限公司生產(chǎn)。

1.1.2 試劑

豬偽狂犬病gE/gBELISA檢測(cè)試劑盒，法國IDvet公司生產(chǎn)，按照 《偽狂犬診斷技術(shù)》（GB/T18641-2002）中規(guī)定的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法檢測(cè)。

1.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

2個(gè)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)（A豬場(chǎng)種母豬約60頭、B豬場(chǎng)種母豬約50頭）的種豬群，這2個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)在2015年1～2月期間進(jìn)行豬偽狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗免疫。這2個(gè)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)的豬群均進(jìn)行口蹄疫、豬瘟和高致病性豬藍(lán)耳病的正常免疫。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 豬偽狂犬病PRV-gE野毒感染抗體與gB免疫抗體檢測(cè)

首次檢測(cè)是對(duì)全部種豬和后備豬作一次偽狂犬病PRV-gE抗體野毒感染檢測(cè)，陰性者留作種用。PRV-gE抗體陽性者及時(shí)淘汰，或立即免疫gE基因缺失疫苗進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，間隔4～6周后加強(qiáng)免疫1次并檢測(cè)gB免疫抗體，作為商品豬出欄。二次監(jiān)測(cè)是在首次監(jiān)測(cè)3個(gè)月再次進(jìn)行一次PRV-gE抗體檢測(cè)，再次淘汰/隔離陽性豬，同時(shí)檢測(cè)gB免疫抗體。第三次監(jiān)測(cè)在連續(xù)2次檢測(cè)結(jié)果均為陰性者，每6個(gè)月進(jìn)行一次抽檢，每次每群抽檢30～60頭份，不足30頭者全部檢測(cè)PRV-gE抗體，同時(shí)檢測(cè)gB免疫抗體，若抽檢出現(xiàn)PRV-gE抗體陽性，則全群檢測(cè)并淘汰/隔離陽性豬。連續(xù)2次抽檢結(jié)果均為gE抗體陰性且gB免疫抗體合格率≥70%，則該豬群為凈化豬群；否則按照凈化步驟循環(huán)進(jìn)行。

1.2.2 豬偽狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗免疫

本試驗(yàn)于2015年7月至2017年4月，對(duì)試驗(yàn)中所選擇2個(gè)種豬場(chǎng)進(jìn)行PRV-gE抗體監(jiān)測(cè)，每次樣品的采集、檢測(cè)、陽性豬的隔離處理都在5d內(nèi)完成。集中所有的陰性豬只，按照嚴(yán)格的管理措施和生物安全措施飼養(yǎng)，定期免疫、抽檢，觀察豬群PRV-gE抗體情況。對(duì)豬場(chǎng)內(nèi)所有種豬、后備豬及種豬場(chǎng)內(nèi)70～80日齡的育成/育肥豬均注射偽狂犬病gE基因缺失弱毒苗，種豬3次/年，即每4個(gè)月免疫1次；后備豬配種前免疫2次，育肥/育成豬免疫1次。

1.2.3 飼養(yǎng)管理

嚴(yán)格執(zhí)行防疫制度，科學(xué)制定免疫病種、免疫程序，建立免疫檔案；制定隔離制度，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，嚴(yán)格引種，商品豬實(shí)行全進(jìn)全出，生產(chǎn)區(qū)禁止飼養(yǎng)其他動(dòng)物；根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際，制定消毒計(jì)劃和程序，全面做好清潔和消毒，落實(shí)消毒責(zé)任；嚴(yán)格執(zhí)行生物安全管理措施，實(shí)行人員進(jìn)出控制隔離制度；規(guī)范飼養(yǎng)管理行為，加強(qiáng)監(jiān)測(cè)預(yù)警。

2 結(jié)果與分析

2個(gè)豬場(chǎng)不同類別豬群豬偽狂犬病的PRV-gE抗體檢測(cè)結(jié)果見附表。

每個(gè)豬場(chǎng)分6次檢測(cè)，2015年7月首次檢測(cè)，前4次間隔3個(gè)月，共檢測(cè)380頭份，淘汰偽狂犬病陽性豬14頭。隨著檢測(cè)次數(shù)的增加，豬群偽狂犬病的陽性率不斷下降，到第3次檢測(cè)時(shí)全部為陰性，第4次檢測(cè)時(shí)也全部為陰性。連續(xù)2次檢測(cè)陰性后，每隔6個(gè)月在2個(gè)豬場(chǎng)各抽檢50頭份，至2017年4月抽檢200頭份樣品，偽狂犬野毒抗體gE均為陰性，免疫抗體合格率gB≧70%，表明2個(gè)豬場(chǎng)偽狂犬病達(dá)到凈化階段。

3 討論與結(jié)論

全球臨床實(shí)踐均已證實(shí)，豬偽狂犬病是一種可以撲滅和凈化的疫病。目前美國及歐盟部分國家已經(jīng)做到了偽狂犬病的凈化。本次在六合區(qū)開展2個(gè)試驗(yàn)種豬場(chǎng)控制和凈化豬偽狂犬病的研究結(jié)果說明使用gE基因缺失苗進(jìn)行免疫，試驗(yàn)應(yīng)用gEELISA方法跟蹤監(jiān)測(cè)免疫種群，淘汰偽狂犬病陽性豬，在2個(gè)試驗(yàn)場(chǎng)均達(dá)到凈化偽狂犬病的目的，試驗(yàn)證明，依照我們的技術(shù)路線，按照 “檢測(cè)→淘汰/分群→免疫→檢測(cè)→淘汰-凈化”的程序，采取對(duì)野毒感染豬群進(jìn)行淘汰，對(duì)假定陰性豬群實(shí)施高密度免疫，同時(shí)加強(qiáng)消毒和提高綜合飼養(yǎng)管理水平等措施開展豬偽狂犬病凈化工作，可以達(dá)到凈化甚至根除偽狂犬病的目的。

附表 2個(gè)豬場(chǎng)不同類別豬群的PRV-gE抗體檢測(cè)結(jié)果