不同品種藍(lán)靛果化學(xué)成分及抗氧化活性比較

朱力國(guó)，郭 陽(yáng)，唐思媛，徐福成，包怡紅*

（1.黑河市林業(yè)科學(xué)院，黑龍江 黑河 164300；2.東北林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040；3.黑河市中俄林業(yè)科技合作園區(qū)，黑龍江 黑河 164300）

藍(lán)靛果（Lonicera caerulea）是野生漿果類落葉小灌木，忍冬科忍冬屬植物，又稱為藍(lán)靛果、羊奶子、山茄子等。其個(gè)體小，呈橢圓形，深皮薄而軟，質(zhì)地細(xì)膩，果汁含量豐富[1]。主要產(chǎn)地為我國(guó)東北山區(qū)地帶，尤其是大小興安嶺及長(zhǎng)白山地區(qū)，四川、西北等地也有分布。藍(lán)靛果呈藍(lán)色、紫色，其花色苷含量豐富，還富含多種維生素、礦物質(zhì)、黃酮類物質(zhì)多酚、蕓香苷等抗氧化成分[2]。已有研究表明，藍(lán)靛果中的活性物質(zhì)具有抗氧化、抗炎、抗菌、預(yù)防癌癥、心腦血管疾病等多種生理功效[3-5]。但不同種類藍(lán)靛果間的成分及活性比較未見報(bào)道。

本試驗(yàn)對(duì)4種藍(lán)靛果的理化指標(biāo)、抗氧化物質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定，通過比較藍(lán)靛果水提物與醇提物的3種體外抗氧化指標(biāo)：1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhy drazyl，DPPH）自由基（DPPH·）、超氧陰離子自由基（O2-·）、羥基自由基（·OH）清除能力說明其抗氧化活性的差異，為藍(lán)靛果忍冬種類的綜合加工利用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

藍(lán)靛果（1-100-82、藍(lán)彷垂、加洛奇卡、藍(lán)鳥）：黑河林業(yè)局提供，采摘商業(yè)熟藍(lán)靛果于-40℃速凍備用；酒石酸鉀鈉、葡萄糖、硝酸鋁、乙醇、鹽酸（均為分析純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；福林酚試劑、DPPH、鄰苯三酚、三羥甲基氨基甲烷（均為分析純）：上海阿拉丁試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

JYL-C91T型榨汁機(jī)：九陽(yáng)股份有限公司；DK-98-1型恒溫水浴鍋：天津市泰斯特儀器有限公司；721型可見光分光光度計(jì)：上海精密科學(xué)儀器有限公司；TGL-16G型高速離心機(jī)：北京普析通用儀器有限公司；PHS-3C型精密pH計(jì)：上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 理化指標(biāo)的測(cè)定

水分含量：參照GB 5009.3—2010直接干燥法[6]；灰分含量：參照GB/T 5009.4—2010食品中灰分的測(cè)定[7]；可滴定酸含量（以檸檬酸計(jì)）：參照GB/T 12456—2008食品中總酸的測(cè)定方法[8]；還原糖含量（以葡萄糖計(jì)）：參照GB/T 5009.7—2008食品中還原糖的測(cè)定[9]；百粒質(zhì)量：隨機(jī)選取100粒藍(lán)靛果，測(cè)定其質(zhì)量。

1.3.2 抗氧化物質(zhì)含量的測(cè)定

總黃酮的提取、測(cè)定：提取條件為提取時(shí)間6.6 h、提取溫度61.3℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)55%vol，重復(fù)提取3次，合并提取液[10]。按照參考文獻(xiàn)[11]的方法進(jìn)行測(cè)定。

總花色苷的提取、測(cè)定：提取條件為料液比1∶10（g∶mL），添加0.1%鹽酸酸化的體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇，超聲輔助提取90min，溫度40℃，提取至殘?jiān)鼰o色[12]。按照參考文獻(xiàn)[12]的方法進(jìn)行測(cè)定。

總多酚的提取、測(cè)定：提取條件為料液比1∶25（g∶mL）、提取溫度40℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)50%、超聲功率300 W、提取時(shí)間90 min[13]。按照參考文獻(xiàn)[13]的方法進(jìn)行測(cè)定。

1.3.3 抗氧化物的制備及抗氧化活力的測(cè)定

水提物的制備：稱取50 g勻漿后的藍(lán)靛果果漿，以蒸餾水為溶劑，料液比1∶20（g∶mL），80 ℃浸提2 h，抽濾，得到藍(lán)靛果水提物，定容至50 mL，4℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

醇提物的制備：稱取50 g勻漿后的藍(lán)靛果果漿，以體積分?jǐn)?shù)40%、60%、80%的乙醇為溶劑，在料液比1∶2（g∶mL），超聲時(shí)間60 min，超聲溫度50℃，超聲功率200 W的條件下提取。將提取液3 000 r/min離心5 min，取上清液濃縮，定容至50 mL，4℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

以4種藍(lán)靛果的水提物與醇提物為受試底物，測(cè)定不同濃度提取物的3種抗氧化活性（DPPH自由基清除能力、超氧陰離子清除能力、羥基自由基清除能力）。

（1）DPPH自由基清除能力

取各濃度提取物2 mL，加入0.2 mol/L的DPPH 2 mL，反應(yīng)時(shí)間為30 min，以溶劑為對(duì)照，在波長(zhǎng)517 nm處測(cè)定其吸光度值A(chǔ)i。然后取各濃度提取物2 mL，與2 mL乙醇混合，測(cè)定其在波長(zhǎng)517 nm處的吸光度值A(chǔ)j。取2 mL DPPH，與2 mL溶劑混合后在波長(zhǎng)517 nm處的吸光度值A(chǔ)e[14]。DPPH自由基的清除能力（K）計(jì)算公式如下：

（2）超氧陰離子清除能力

取0.2 mL樣品溶液加入50 mmol/L的Tris-HCl緩沖液（pH8.2）5.7mL，25℃水浴鍋中溫育10min后，加入6mmol/L鄰苯三酚0.1 mL，測(cè)定反應(yīng)時(shí)間1 min時(shí)波長(zhǎng)320 nm處的吸光度值A(chǔ)s，以等濃度樣品溶液為參比；用等體積水代替樣品，以Tris-HCl為空白，測(cè)定反應(yīng)進(jìn)行5min時(shí)波長(zhǎng)320nm處的吸光度值A(chǔ)0。超氧陰離子自由基的清除能力（S）計(jì)算公式如下：

（3）羥基自由基清除能力

取1 mL樣品溶液，加入1 mL甲基紫（2.0×10-4mol/L）、1 mLFe3+（1.0×10-3mol/L），調(diào)節(jié)溶液pH為4.5，稀釋至10mL，30 min后于578 nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)s，甲基紫和Tris-HCl緩沖液為空白，以相同體積的Tris-HCl緩沖液和水溶液為參比分別測(cè)得A與A0。羥基自由基的清除能力（X）計(jì)算公式如下：

1.3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用Origin8.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，用SPSS19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析，利用SigmaPlot14.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 理化指標(biāo)的測(cè)定

對(duì)4種藍(lán)靛果的水分含量、百粒質(zhì)量、總酸含量、還原糖含量、灰分含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如表1所示。

表1 4種藍(lán)靛果的理化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果Table 1 Determination results of physicochemical indexes of four Lonicera edulis

由表1可知，4種不同品種藍(lán)靛果的基本成分存在一定差異。藍(lán)彷垂百粒質(zhì)量最高，與1-100-82相比差異不顯著（P＞0.05），與其他兩種藍(lán)靛果相比差異極顯著（P＜0.01）；總酸（以檸檬酸計(jì)）含量與藍(lán)鳥相比差異極顯著（P＜0.01），與加洛奇卡相比差異不顯著（P＞0.05），與1-100-82相比差異顯著（P＜0.05）；還原糖含量最高，與其他3種藍(lán)靛果相比差異極顯著（P＜0.01）；灰分含量最高，與其他3種藍(lán)靛果相比有極顯著性差異（P＜0.01），表明其中鈣、鎂、鉀等礦物質(zhì)元素含量較高[15]；因此藍(lán)彷垂在4種藍(lán)靛果中更適宜鮮食。藍(lán)鳥的總酸含量最高，與其他3個(gè)品種相比差異極顯著（P＜0.01），還原糖（以葡萄糖計(jì)）含量最低，適口性低于其他3種藍(lán)靛果。

2.2 抗氧化活性物質(zhì)含量的測(cè)定

藍(lán)靛果中功能性物質(zhì)的存在，賦予了其抗氧化、抗炎等活性功能。4種藍(lán)靛果的抗氧化活性物質(zhì)含量結(jié)果見表2。

表2 4種藍(lán)靛果抗氧化活性物質(zhì)含量比較Table 2 Comparison of antioxidant active substance contents in four Lonicera edulis

由表2可知，不同藍(lán)靛果多酚含量差異性極顯著（P＜0.01）。藍(lán)鳥的多酚含量及黃酮含量均最高，分別為612.08 mg/g、458.20mg/100g，與其他3種藍(lán)靛果相比差異極顯著（P＜0.01），藍(lán)鳥的活性物質(zhì)含量突出，適宜作為活性物質(zhì)的提取加工品種。加洛奇卡的花色苷含量最高，為322.64 mg/100 g，與其他3種藍(lán)靛果相比差異極顯著（P＜0.01）。

2.3 抗氧化活力的測(cè)定

2.3.1 水提物的抗氧化活性

對(duì)4種藍(lán)靛果不同濃度水提物抗氧化性的測(cè)定結(jié)果如表3所示。

表3 4種藍(lán)靛果不同濃度水提物抗氧化性差異Table 3 Differences in antioxidant activity of Lonicera edulis with different concentrations of aqueous extract

由表3可知，不同樣品濃度下，0.25 mg/mL 1-100-82水提物清除·OH能力最低，為5.9%。藍(lán)鳥水提物在不同樣品濃度時(shí)對(duì)DPPH·、O2-·、·OH清除率都達(dá)到最大，當(dāng)樣品濃度為2.00 mg/mL時(shí)，清除率分別為為30.7%、30.9%、27.4%。

2.3.2 醇提物的抗氧化活性

（1）DPPH·清除能力

圖1 不同乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)藍(lán)靛果醇提物DPPH·清除率的影響Fig.1 Effect of different alcohol concentration on DPPH·scavenging ability of ethanol extract of Lonicera edulis

由圖1可以看出，在不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液提取的4種藍(lán)靛果醇提物的DPPH·清除能力大小依次為藍(lán)鳥＞加洛奇卡＞藍(lán)彷垂＞1-100-82。在體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇溶液中提取抗氧化物質(zhì)的DPPH·清除率高于其他體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液。藍(lán)鳥在體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇溶液提取物清除DPPH·的能力最高，為76.3%。

（2）O2-·清除能力

圖2 不同乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)藍(lán)靛果醇提物O2-·清除率的影響Fig.2 Effect of different ethanol concentration on O 2-·scavenging ability of ethanol extract of Lonicera edulis

由圖2可知，在乙醇體積分?jǐn)?shù)為20%、40%、80%時(shí)，藍(lán)靛果醇提物對(duì)O2-·清除率大小順序?yàn)樗{(lán)鳥＞加洛奇卡＞藍(lán)彷垂＞1-100-82；當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%時(shí)，對(duì)O2-·清除能力大小順序?yàn)榧勇迤婵ǎ?-100-82＞藍(lán)彷垂＞藍(lán)鳥。這可能是由于不同抗氧化物質(zhì)在不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液中溶出的含量不同，對(duì)不一樣的自由基結(jié)合能力也不相同[16]。加洛奇卡藍(lán)靛果的體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇提取物對(duì)O2-·清除率為86.3%，達(dá)到最高。

（3）·OH清除能力

圖3 不同乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)藍(lán)靛果醇提物OH·清除率的影響Fig.3 Effect of different ethanol concentration on OH·scavenging ability of ethanol extract of Lonicera edulis

由圖3可以看出，在乙醇體積分?jǐn)?shù)為20%、40%、80%時(shí)，藍(lán)靛果醇提物對(duì)·OH清除能力大小順序?yàn)樗{(lán)鳥＞加洛奇卡＞藍(lán)彷垂＞1-100-82；當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%時(shí)，藍(lán)靛果醇提物對(duì)·OH清除能力大小順序?yàn)?-100-82＞加洛奇卡＞藍(lán)彷垂＞藍(lán)鳥，可能是由于體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇溶液的提取物對(duì)·OH的清除能力最強(qiáng)，尤其1-100-82最為明顯，·OH清除率為71.5%。

2.4 藍(lán)靛果抗氧化活性與抗氧化物含量的相關(guān)性

從表4可以看出，藍(lán)靛果水提物的DPPH·清除能力、O2-·清除能力、·OH清除能力與總多酚、總黃酮含量均呈現(xiàn)極顯著的相關(guān)性（P＜0.01）?？偦ㄉ蘸颗cO2-·清除能力無顯著相關(guān)性（P＞0.05），與DPPH·清除能力、·OH清除能力呈現(xiàn)極顯著相關(guān)（P＜0.01）、顯著性相關(guān)（P＜0.05）。

不同品種藍(lán)靛果的醇提物抗氧化活性與抗氧化物含量的相關(guān)性分析結(jié)果如表5所示。

表4 藍(lán)靛果水提物抗氧化活性與抗氧化物含量的相關(guān)性Table 4 Correlation between antioxidant activity and antioxidant content of Lonicera edulis aqueous extract

表5 藍(lán)靛果醇提物抗氧化活性與抗氧化物含量的相關(guān)性Table 5 Correlation between antioxidant activity and antioxidant content of ethanol extract of Lonicera edulis

由表5可知，藍(lán)靛果醇提物的DPPH·清除能力與總多酚含量呈極顯著相關(guān)性（P＜0.01），與O2-·清除能力呈負(fù)顯著相關(guān)性（P＜0.05）與·OH清除能力呈負(fù)極顯著相關(guān)性（P＜0.01）；總黃酮含量與O2-·清除能力、·OH清除能力呈負(fù)極顯著相關(guān)性（P＜0.01），與DPPH·清除能力呈正顯著相關(guān)性（P＜0.05）；總花色苷含量與DPPH·清除能力呈極顯著相關(guān)性（P＜0.05），與·OH清除能力呈顯著相關(guān)性，與O2-·清除能力無相關(guān)性（P＞0.05）。醇提物與水提物抗氧化活性與抗氧化物含量的相關(guān)性分析說明多酚是藍(lán)靛果抗氧化的主要活性部分。

3 結(jié)論

4種藍(lán)靛果種植條件及環(huán)境相同，同為高叢藍(lán)靛果，接受光照時(shí)常及比例近似相同。通過對(duì)不同品種藍(lán)靛果營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的測(cè)定可知，不同種類的藍(lán)靛果水分、總酸、還原糖、多酚、黃酮、花色苷含量差異顯著，表明藍(lán)靛果的品種差異對(duì)果實(shí)品質(zhì)的影響是差異顯著的。藍(lán)彷垂百粒質(zhì)量（135.50 g）、還原糖含量（9.51 g/100 g）高，適宜鮮食；藍(lán)鳥多酚、黃酮含量最高（612.08 mg/g、458.20 mg/100 g），加洛奇卡花色苷含量最高（322.64 mg/100 g），適宜作為活性物質(zhì)的提取加工品種；4種藍(lán)靛果的醇提物抗氧化活性均優(yōu)于水提物，在乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%時(shí)，抗氧化活力達(dá)到最高。