511例孕中期羊水細(xì)胞染色體分析

柯買春

(江西省九江市婦幼保健院，九江 332000)

染色體病是染色體異常引起的一類遺傳性疾病，包括染色體數(shù)目異常和染色體機(jī)構(gòu)異常，是導(dǎo)致新生兒缺陷的最常見(jiàn)原因之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，染色體病占新生兒出生缺陷的5%-10%[1]，給家庭和社會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重負(fù)擔(dān)。倡導(dǎo)國(guó)家優(yōu)生優(yōu)育政策，減少染色體異?；純撼錾瑢?duì)胎兒進(jìn)行宮內(nèi)診斷十分必要。本文通過(guò)選取來(lái)我院九江市婦幼保健院產(chǎn)科門診就診的511例孕中期孕婦作為研究對(duì)象，對(duì)具有相關(guān)產(chǎn)前診斷指征的孕婦進(jìn)行羊水穿刺，分析其胎兒染色體核型，判斷胎兒染色體異常情況，為指導(dǎo)產(chǎn)前診斷工作提供一定的參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 511例孕婦均選自2016年5月10日~2018年2月13日就診于我院九江市婦幼保健院產(chǎn)科門診的孕中期孕婦，年齡19-46歲，孕周17-22周，其中175例為唐氏篩查高風(fēng)險(xiǎn)者，190例為高齡孕婦，36例孕婦B超顯示NT增高，5例孕婦是夫妻雙方其中一方染色體有異常者，63例為無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷為高風(fēng)險(xiǎn)者，其他42例孕婦都具有羊水穿刺指征，如不良孕產(chǎn)史，唐氏分娩史，唐氏篩查中危等。

1.2 方法

1.2.1 抽取羊水 在B超影像指導(dǎo)下對(duì)孕婦進(jìn)行羊水穿刺，抽取羊水20ml均分兩無(wú)菌離心管盛裝，如混有母血，滴2滴無(wú)菌肝素抗凝劑于羊水中并混勻。

1.2.2 羊水細(xì)胞培養(yǎng) 將羊水進(jìn)行離心1200g/r 7min，棄上清液，取0.5ml培養(yǎng)液加入留有羊水細(xì)胞沉淀物的離心管中，并用吸管輕輕吹打混勻，接種于培養(yǎng)中并置于溫度為37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，全程無(wú)菌操作。一周后觀察羊水細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，視生長(zhǎng)情況決定收獲細(xì)胞時(shí)間。

1.2.3 收獲細(xì)胞 收細(xì)胞前3-4h，加入秋水仙素處理，使染色體處于分裂中期。然后將培養(yǎng)液倒入新的干凈的離心管，往培養(yǎng)基中加入1管羊水消化液放入水浴箱溫浴2min，加入培養(yǎng)液終止消化，并用刮細(xì)胞器刮取培養(yǎng)基中羊水細(xì)胞，倒入離心管中離心1200g/r 7min，棄上清液，留細(xì)胞底物，再加入0.4%枸櫞酸鈉低滲液溫浴低滲4min 30s，立即加固定液 （甲醇∶冰乙酸=3：1）進(jìn)行預(yù)固定。然后離心1200g/r 7min，棄上清液留底物，加入固定液進(jìn)行固定3次。

1.2.4 滴片染色 將固定好的底物懸浮液離心1200g/r 7min，棄上清液留底物，加入少許固定液混勻底物進(jìn)行滴片 （預(yù)先置于冰箱中的干凈的冰玻片），并放入烤箱80℃ 3h，烤好的玻片用吉姆薩進(jìn)行染色，置于高倍鏡下觀察并分析染色體核型。

2 結(jié)果

2.1 64例異常染色體的具體情況 64例異常染色體，占比12.5%，包括具有產(chǎn)前診斷指征異常染色體者23例（異常占比4.5%）和無(wú)創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測(cè)高風(fēng)險(xiǎn)異常染色體41例。具體情況見(jiàn)下表1。

表1 64例異常染色體的具體情況

2.2 具有產(chǎn)前診斷指征孕婦檢測(cè)的具體情況 511例受檢者檢測(cè)出23例具有產(chǎn)前診斷指征孕婦胎兒染色體異常，異常占比4.5%（23/511），其中包括175例唐氏篩查高風(fēng)險(xiǎn)查出異常核型8例，檢測(cè)異常率4.6%(8/175)，190例高齡孕婦查出9例異常染色體，檢測(cè)異常率4.7%(9/190)，36例B超檢查NT增高者異常核型4例，檢測(cè)異常率11.2%(4/36)，5例父母其中一方染色體異常者查出異常核型2例，檢測(cè)異常率40%(2/5)，具體情況見(jiàn)下表2。

表2 具有產(chǎn)前診斷指征孕婦檢測(cè)的具體情況

2.3 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前DNA檢測(cè)染色體異常的具體情況在無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前DNA檢測(cè)高風(fēng)險(xiǎn)者中，24例無(wú)創(chuàng)21三體高風(fēng)險(xiǎn)者查出23例染色體異常，檢測(cè)異常率率95.8%（23/24），18例無(wú)創(chuàng)18三體高風(fēng)險(xiǎn)者查出5例異常，檢測(cè)異常率27.8%(5/18)，21例無(wú)創(chuàng)顯示性染色體異常者檢測(cè)出13例染色體異常，檢測(cè)異常率61.9%（13/21），具體情況見(jiàn)下表3。

表3 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前DNA檢測(cè)高風(fēng)險(xiǎn)者行羊水檢測(cè)染色體異常的具體情況

3 討論

有關(guān)文獻(xiàn)資料顯示，全世界每年約有500萬(wàn)新生兒出生缺陷，其中70%為遺傳性出生缺陷[2]。染色體病是細(xì)胞遺傳性疾病的主要研究對(duì)象，目前尚沒(méi)有技術(shù)方法可以有效治療染色體病，只能做好預(yù)防工作，因此對(duì)胎兒進(jìn)行宮內(nèi)診斷防止染色體異常患兒出生十分重要。

本研究511例受檢孕婦檢查出胎兒染色體異常者64例，其中無(wú)創(chuàng)顯示高風(fēng)險(xiǎn)者41例，其他具有產(chǎn)前診斷指征染色體異常者23例，占比4.5%（23/511），與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[3，4]。 具有產(chǎn)前診斷指征染色體數(shù)目（包括嵌合體）異常者12例：2例嵌合體、2 例性染色體異常（45，XO；47，XXX）和 8例21三體綜合癥，其中21三體綜合癥占比34.8%（8/23），是染色體異常核型的主要類型，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[5，6]，應(yīng)特別關(guān)注；11例染色體結(jié)構(gòu)異常者包括6例平衡易位（包括羅伯遜易位）和5例9號(hào)染色體的臂間倒位，9號(hào)染色體的臂間倒位在人群中的發(fā)生率高達(dá)1%，為防止畸形患兒的出生，對(duì)9染色體臂間倒位片段比較長(zhǎng)者必須加強(qiáng)宮內(nèi)診斷。

511例具有產(chǎn)前診斷指征孕中期孕婦中唐氏篩查高危者175例，查出染色體異常者8例，占比4.6%：2例染色體數(shù)目異常 （包括嵌合體）、3例平衡易位（包括羅伯遜易位）和3例9號(hào)染色體的臂間倒位；190例高齡孕婦查出染色體異常者9例，占比4.7%，其中染色體數(shù)目異常者7例（5例為21三體綜合癥，1例為性染色體異常，1例嵌合體）、1例羅伯遜易位和1例9號(hào)染色體的臂間倒位；高齡孕婦中查出21三體綜合癥異常率高達(dá)2.6%，高齡孕婦的胎兒宮內(nèi)診斷必須高度重視；36例B超顯示胎兒異常者查出染色體異常4例，占比11.2%：1例9號(hào)染色體臂間倒位、1例性染色體異常和2例21三體綜合癥，B超是檢查胎兒是否異常的重要技術(shù)，NT值大于2.5㎜可以有效的檢出孕早期胎兒染色體異常和染色體結(jié)構(gòu)異常，特別是對(duì)21三體綜合癥的檢測(cè)，NT值越高胎兒染色體異常風(fēng)險(xiǎn)越大；5例父母一方染色體異常者查出胎兒染色體異常者2例，占比高達(dá)40%，染色體攜帶者是指染色體結(jié)構(gòu)異常但表型正常的個(gè)體，在生育后代中，由于減少分裂作用，只有1/18可能性生育正常兒，1/18可能為攜帶者，其余都是畸形兒，因此，父母為染色體異常攜帶者必須進(jìn)行胎兒宮內(nèi)診斷，防止染色體異常患兒出生。

511例孕中期孕婦中無(wú)創(chuàng)DNA檢測(cè)顯示高風(fēng)險(xiǎn)者63例，其中無(wú)創(chuàng)21三體高風(fēng)險(xiǎn)者24例，查出染色體異常者23例，占比高達(dá)95.8%；無(wú)創(chuàng)18三體高風(fēng)險(xiǎn)者18例，查出染色體異常者5例，占比27.8%；無(wú)創(chuàng)性染色體高風(fēng)險(xiǎn)者21例，查出染色體異常者13例，占比61.9%。由此可見(jiàn)，無(wú)創(chuàng)DNA檢測(cè)胎兒染色體異常存在假陽(yáng)性，特別對(duì)13、18和性染色體的檢測(cè)，如果無(wú)創(chuàng)DNA檢測(cè)陽(yáng)性者，必須羊水穿刺進(jìn)行細(xì)胞染色體核型分析以作最后確認(rèn)結(jié)果。

綜上所述，羊水細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)于優(yōu)生咨詢產(chǎn)前診斷有重要意義，產(chǎn)前診斷中密切關(guān)注具有產(chǎn)前診斷指征的孕中期孕婦，并對(duì)其進(jìn)行羊膜穿刺細(xì)胞染色體核型分析是十分必要的。羊水穿刺進(jìn)行胎兒染色體核型分析是診斷胎兒染色體是否異常的金標(biāo)準(zhǔn)，能有效的判斷胎兒染色體異常的核型，是防止染色體異?；純撼錾闹匾罁?jù)。