高效液相色譜法在抗生素類藥物殘留中的應(yīng)用

李翠萍

【摘 要】 抗生素藥物殘留危害人體健康，因此，需要一種有效的檢測技術(shù)來控制其殘留量，高效液相色譜法作為一種先進(jìn)高效的檢測技術(shù)，被用于抗生素殘留檢測中，本文對高效液相色譜法和抗生素類藥物作以概述，且簡單介紹了高效液相色譜法在抗生素藥物殘留中的應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法；抗生素；藥物殘留；應(yīng)用

【中圖分類號】R155.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】

A 【文章編號】1005-0019（2018）14-057-01

抗生素類藥物被廣泛用于醫(yī)療、畜牧、水產(chǎn)養(yǎng)殖等行業(yè)，然而大部分抗生素以原形排出體外，進(jìn)入環(huán)境中，污染水體和土壤，進(jìn)而造成藥物殘留，進(jìn)入人體產(chǎn)生蓄積，危害人體健康。通常用于檢測分析抗生素類藥物的方法主要有微生物法和化學(xué)分析法等，但是這兩種方法專一性比較差，而高效液相色譜法存在很多優(yōu)勢：如高效、高速、操作簡單、靈敏度高等，因此，高效液相色譜法被廣泛用于抗生素類藥物殘留的檢測分析[1]。

1 高效液相色譜法概述

高效液相色譜法，簡稱HPLC，是以經(jīng)典液相色譜法為基礎(chǔ)，引入氣相色譜理論，從而發(fā)展起來的一種現(xiàn)代化的分析方法。這種分析技術(shù)發(fā)展十分迅速，短短三十幾年時間，應(yīng)用已經(jīng)十分廣泛。高效液相色譜法適合分離分析熱穩(wěn)定性差、高沸點(diǎn)、相對分子量較大以及有生理活性的物質(zhì)，如核酸、表面活性劑、人體代謝產(chǎn)物、肽類、高聚物、藥物、稠環(huán)芳烴、殺蟲劑等。和氣相色譜法相比，高效液相色譜法樣品無需氣化，不受物質(zhì)揮發(fā)性限制。有數(shù)據(jù)表明：可以用高效液相色譜法分析的化合物占70～80%，而用氣相色譜法分析的化合物僅占20%。高效液相色譜法具有高效、高壓、高速且高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，因此已被廣泛用于對藥物的分析檢測。

2 抗生素類藥物概述

抗生素類藥物是指用于殺滅細(xì)菌或者抑制細(xì)菌生長的藥物，又名“抗細(xì)菌藥”、“抗細(xì)菌劑”?，F(xiàn)已廣泛應(yīng)用于臨床，其種類繁多，比如四環(huán)素類、β-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、磺胺類、喹諾酮類、多肽類、林可霉素類及其他類抗生素。

2.1 大環(huán)內(nèi)酯類

大環(huán)內(nèi)酯類抗生素是由鏈霉菌產(chǎn)生的一種廣譜抗生素，在動物治療以及飼料添加劑中應(yīng)用廣泛，常見的有紅霉素、羅紅霉素、克拉霉素等。如若過量使用會導(dǎo)致藥物殘留，長期使用造成蓄積，從而產(chǎn)生不良反應(yīng)：①胃腸道反應(yīng)；②肝毒性；③心臟毒性；④變態(tài)反應(yīng)等。目前，我國已經(jīng)規(guī)定了禽肉及蛋品中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的殘留限量，比如紅霉素的殘留限量為150μg /kg。

2.2 氯霉素類

氯霉素類抗生素是從委內(nèi)瑞拉鏈霉菌中分離提取的一種高效廣譜抗生素。在控制和治療動物傳染性疾病方面發(fā)揮了重要作用，但是氯霉素有很大的毒副作用：①骨髓造血障礙，如粒細(xì)胞和血小板減少，嚴(yán)重者導(dǎo)致再生障礙性貧血等；②灰嬰綜合征，故新生兒禁用；③損害神經(jīng)系統(tǒng)，如視神經(jīng)炎等；④消化道反應(yīng)；⑤過敏反應(yīng)。長期使用會導(dǎo)致藥物殘留，因此，在食用動物的飼養(yǎng)及治療中，我國已經(jīng)明令禁止使用氯霉素，并且規(guī)定動物性食品以及動物可食組織中氯霉素均不得檢出。

2.3 四環(huán)素類

四環(huán)素類抗生素是一種常見的廣譜抗菌素，其成本低、抗菌效果好、報酬高，因而被廣泛用于養(yǎng)殖業(yè)，常見的有四環(huán)素、米諾環(huán)素、金霉素、土霉素等。目前，四環(huán)素類抗生素在獸藥中居于首位。雖然抗菌效果比較好，但副作用比較大，不良反應(yīng)較多，比如①胃腸道反應(yīng)；②肝毒性；③腎毒性；④影響牙齒和骨骼發(fā)育⑤局部刺激；⑥過敏反應(yīng)等。

2.4 其他類抗生素

除上述抗生素外，還有其他抗生素類如氨基糖苷類、喹諾酮類、磺胺類等，也可用來預(yù)防和治療疾病。但是，同樣的道理，如果過量使用這些抗生素類藥物，也會造成殘留，產(chǎn)生蓄積，進(jìn)而危害人體健康。如氨基糖苷類存在耳毒性、腎毒性、神經(jīng)肌肉麻痹和變態(tài)反應(yīng)等不良反應(yīng)；氟喹諾酮類會導(dǎo)致光敏反應(yīng)、胃腸道反應(yīng)及結(jié)晶尿等；磺胺類抗生素[2]會導(dǎo)致過敏反應(yīng)、腎毒性、影響造血系統(tǒng)等。

3 高效液相色譜法在抗生素類藥物殘留檢測中的應(yīng)用

張科明等[3]采用液相色譜/質(zhì)譜法對豬肉中包括磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類等抗生素類藥物在內(nèi)的多類獸藥殘留進(jìn)行快速測定。結(jié)果表明：35種獸藥的檢出限為0.01-1.01μg/kg，定量限為0.04-3.37 μg/kg，在1.0-50.0μg/L 濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r>0.996，回收率介于71.8%-113.5%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.6%-9.8%。說明此方法靈敏度高、凈化效果好、操作簡單，可以定性及定量檢測分析豬肉中獸藥殘留。劉健明等[4]采用固相萃取/超高壓液相色譜/質(zhì)譜法檢測水中4 種四環(huán)素類抗生素，發(fā)現(xiàn)4 種抗生素呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r>0.999，四環(huán)素的加標(biāo)回收率為101.8%-106.0%，土霉素的加標(biāo)回收率107.5%-116.0%，金霉素的加標(biāo)回收率105.0%-106.0%，強(qiáng)力霉素的加標(biāo)回收率85.7%-92.3%，土霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、金霉素的最低檢測限分別為： 0.12 ng/L、 0.52ng/L、0.15ng/L、0.88ng/L。說明該方法可以快速、準(zhǔn)確檢測水體中四環(huán)素類抗生素。

王敏娟等[5]利用超高效液相色譜/質(zhì)譜法對雞蛋中21 種四環(huán)素類和喹諾酮類抗生素殘留進(jìn)行同時測定，結(jié)果表明：在2 μg/kg-100 μg/kg 濃度范圍內(nèi)，21種四環(huán)素類和喹諾酮類藥物呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù) r > 0.9940，檢出限為0.5 μg/kg-2.0 μg/kg，加標(biāo)回收率為79.5%-93.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于 10%。表明該方法可以用于檢測雞蛋中喹諾酮類、四環(huán)素類抗生素藥物殘留量。劉暢[6]采用超高效液相色譜/質(zhì)譜法檢測蔬菜中20種磺胺類抗生素殘留。結(jié)果表明：20種磺胺類獸藥在0.5-100 μg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均r>0.99，回收率為67.4%-116.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.1%-12.8% 。說明該方法可以同時檢測蔬菜中獸藥殘留。

劉文靜[7]采用高效液相色譜法對乳品飲料中4種四環(huán)素類藥物進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)4 種四環(huán)素類藥物的檢出限為2.0μg/kg-5.0μg/kg，在0.10μg/mL-1.00μg/mL 濃度范圍內(nèi)，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r2 大于0.994，定量限介于6.0μg/kg-15.0μg/kg之間，4種四環(huán)素類抗生素的加標(biāo)回收率達(dá)到77.6%-90.6%。程家興等[8]利用超高效液相色譜/質(zhì)譜法對養(yǎng)魚河水中的抗生素進(jìn)行檢測。發(fā)現(xiàn)的加標(biāo)回收率達(dá)到61.0%-98.4%，15 種抗生素的檢出限達(dá)到0.01-0.3 ng /L，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.6%-14.0%，15 種抗生素呈現(xiàn)良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r大于0. 990。曹慧等[9]采用超高效液相色譜/質(zhì)譜技術(shù)對牛奶中青霉素類藥物殘留進(jìn)行檢測。發(fā)現(xiàn)10種青霉素藥物的定量限為0.1-10.0μg/kg，回收率達(dá)到72.0%-110%，10種青霉素藥物呈現(xiàn)良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r>0.99，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.83%-9.33%。說明該方法適用于牛奶中青霉素類抗生素殘留的檢測。

4 展望

高效液相色譜法已經(jīng)廣泛用于抗生素類藥物殘留的檢測，但是，仍存在不足之處。隨著科技不斷創(chuàng)新發(fā)展，高效液相色譜技術(shù)將會和其他先進(jìn)技術(shù)聯(lián)用，使藥物分析水平無論是分析速度、檢測質(zhì)量還是檢測靈敏度方面，都將邁上一個新臺階。

參考文獻(xiàn)

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