李翠萍
【摘 要】 抗生素藥物殘留危害人體健康,因此,需要一種有效的檢測技術(shù)來控制其殘留量,高效液相色譜法作為一種先進(jìn)高效的檢測技術(shù),被用于抗生素殘留檢測中,本文對高效液相色譜法和抗生素類藥物作以概述,且簡單介紹了高效液相色譜法在抗生素藥物殘留中的應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法;抗生素;藥物殘留;應(yīng)用
【中圖分類號(hào)】R155.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】
A 【文章編號(hào)】1005-0019(2018)14-057-01
抗生素類藥物被廣泛用于醫(yī)療、畜牧、水產(chǎn)養(yǎng)殖等行業(yè),然而大部分抗生素以原形排出體外,進(jìn)入環(huán)境中,污染水體和土壤,進(jìn)而造成藥物殘留,進(jìn)入人體產(chǎn)生蓄積,危害人體健康。通常用于檢測分析抗生素類藥物的方法主要有微生物法和化學(xué)分析法等,但是這兩種方法專一性比較差,而高效液相色譜法存在很多優(yōu)勢:如高效、高速、操作簡單、靈敏度高等,因此,高效液相色譜法被廣泛用于抗生素類藥物殘留的檢測分析[1]。
1 高效液相色譜法概述
高效液相色譜法,簡稱HPLC,是以經(jīng)典液相色譜法為基礎(chǔ),引入氣相色譜理論,從而發(fā)展起來的一種現(xiàn)代化的分析方法。這種分析技術(shù)發(fā)展十分迅速,短短三十幾年時(shí)間,應(yīng)用已經(jīng)十分廣泛。高效液相色譜法適合分離分析熱穩(wěn)定性差、高沸點(diǎn)、相對分子量較大以及有生理活性的物質(zhì),如核酸、表面活性劑、人體代謝產(chǎn)物、肽類、高聚物、藥物、稠環(huán)芳烴、殺蟲劑等。和氣相色譜法相比,高效液相色譜法樣品無需氣化,不受物質(zhì)揮發(fā)性限制。有數(shù)據(jù)表明:可以用高效液相色譜法分析的化合物占70~80%,而用氣相色譜法分析的化合物僅占20%。高效液相色譜法具有高效、高壓、高速且高靈敏度等優(yōu)點(diǎn),因此已被廣泛用于對藥物的分析檢測。
2 抗生素類藥物概述
抗生素類藥物是指用于殺滅細(xì)菌或者抑制細(xì)菌生長的藥物,又名“抗細(xì)菌藥”、“抗細(xì)菌劑”。現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于臨床,其種類繁多,比如四環(huán)素類、β-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、磺胺類、喹諾酮類、多肽類、林可霉素類及其他類抗生素。
2.1 大環(huán)內(nèi)酯類
大環(huán)內(nèi)酯類抗生素是由鏈霉菌產(chǎn)生的一種廣譜抗生素,在動(dòng)物治療以及飼料添加劑中應(yīng)用廣泛,常見的有紅霉素、羅紅霉素、克拉霉素等。如若過量使用會(huì)導(dǎo)致藥物殘留,長期使用造成蓄積,從而產(chǎn)生不良反應(yīng):①胃腸道反應(yīng);②肝毒性;③心臟毒性;④變態(tài)反應(yīng)等。目前,我國已經(jīng)規(guī)定了禽肉及蛋品中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的殘留限量,比如紅霉素的殘留限量為150μg /kg。
2.2 氯霉素類
氯霉素類抗生素是從委內(nèi)瑞拉鏈霉菌中分離提取的一種高效廣譜抗生素。在控制和治療動(dòng)物傳染性疾病方面發(fā)揮了重要作用,但是氯霉素有很大的毒副作用:①骨髓造血障礙,如粒細(xì)胞和血小板減少,嚴(yán)重者導(dǎo)致再生障礙性貧血等;②灰嬰綜合征,故新生兒禁用;③損害神經(jīng)系統(tǒng),如視神經(jīng)炎等;④消化道反應(yīng);⑤過敏反應(yīng)。長期使用會(huì)導(dǎo)致藥物殘留,因此,在食用動(dòng)物的飼養(yǎng)及治療中,我國已經(jīng)明令禁止使用氯霉素,并且規(guī)定動(dòng)物性食品以及動(dòng)物可食組織中氯霉素均不得檢出。
2.3 四環(huán)素類
四環(huán)素類抗生素是一種常見的廣譜抗菌素,其成本低、抗菌效果好、報(bào)酬高,因而被廣泛用于養(yǎng)殖業(yè),常見的有四環(huán)素、米諾環(huán)素、金霉素、土霉素等。目前,四環(huán)素類抗生素在獸藥中居于首位。雖然抗菌效果比較好,但副作用比較大,不良反應(yīng)較多,比如①胃腸道反應(yīng);②肝毒性;③腎毒性;④影響牙齒和骨骼發(fā)育⑤局部刺激;⑥過敏反應(yīng)等。
2.4 其他類抗生素
除上述抗生素外,還有其他抗生素類如氨基糖苷類、喹諾酮類、磺胺類等,也可用來預(yù)防和治療疾病。但是,同樣的道理,如果過量使用這些抗生素類藥物,也會(huì)造成殘留,產(chǎn)生蓄積,進(jìn)而危害人體健康。如氨基糖苷類存在耳毒性、腎毒性、神經(jīng)肌肉麻痹和變態(tài)反應(yīng)等不良反應(yīng);氟喹諾酮類會(huì)導(dǎo)致光敏反應(yīng)、胃腸道反應(yīng)及結(jié)晶尿等;磺胺類抗生素[2]會(huì)導(dǎo)致過敏反應(yīng)、腎毒性、影響造血系統(tǒng)等。
3 高效液相色譜法在抗生素類藥物殘留檢測中的應(yīng)用
張科明等[3]采用液相色譜/質(zhì)譜法對豬肉中包括磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類等抗生素類藥物在內(nèi)的多類獸藥殘留進(jìn)行快速測定。結(jié)果表明:35種獸藥的檢出限為0.01-1.01μg/kg,定量限為0.04-3.37 μg/kg,在1.0-50.0μg/L 濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r>0.996,回收率介于71.8%-113.5%之間,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.6%-9.8%。說明此方法靈敏度高、凈化效果好、操作簡單,可以定性及定量檢測分析豬肉中獸藥殘留。劉健明等[4]采用固相萃取/超高壓液相色譜/質(zhì)譜法檢測水中4 種四環(huán)素類抗生素,發(fā)現(xiàn)4 種抗生素呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r>0.999,四環(huán)素的加標(biāo)回收率為101.8%-106.0%,土霉素的加標(biāo)回收率107.5%-116.0%,金霉素的加標(biāo)回收率105.0%-106.0%,強(qiáng)力霉素的加標(biāo)回收率85.7%-92.3%,土霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、金霉素的最低檢測限分別為: 0.12 ng/L、 0.52ng/L、0.15ng/L、0.88ng/L。說明該方法可以快速、準(zhǔn)確檢測水體中四環(huán)素類抗生素。
王敏娟等[5]利用超高效液相色譜/質(zhì)譜法對雞蛋中21 種四環(huán)素類和喹諾酮類抗生素殘留進(jìn)行同時(shí)測定,結(jié)果表明:在2 μg/kg-100 μg/kg 濃度范圍內(nèi),21種四環(huán)素類和喹諾酮類藥物呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù) r > 0.9940,檢出限為0.5 μg/kg-2.0 μg/kg,加標(biāo)回收率為79.5%-93.9%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于 10%。表明該方法可以用于檢測雞蛋中喹諾酮類、四環(huán)素類抗生素藥物殘留量。劉暢[6]采用超高效液相色譜/質(zhì)譜法檢測蔬菜中20種磺胺類抗生素殘留。結(jié)果表明:20種磺胺類獸藥在0.5-100 μg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)均r>0.99,回收率為67.4%-116.6%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.1%-12.8% 。說明該方法可以同時(shí)檢測蔬菜中獸藥殘留。
劉文靜[7]采用高效液相色譜法對乳品飲料中4種四環(huán)素類藥物進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)4 種四環(huán)素類藥物的檢出限為2.0μg/kg-5.0μg/kg,在0.10μg/mL-1.00μg/mL 濃度范圍內(nèi),呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r2 大于0.994,定量限介于6.0μg/kg-15.0μg/kg之間,4種四環(huán)素類抗生素的加標(biāo)回收率達(dá)到77.6%-90.6%。程家興等[8]利用超高效液相色譜/質(zhì)譜法對養(yǎng)魚河水中的抗生素進(jìn)行檢測。發(fā)現(xiàn)的加標(biāo)回收率達(dá)到61.0%-98.4%,15 種抗生素的檢出限達(dá)到0.01-0.3 ng /L,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.6%-14.0%,15 種抗生素呈現(xiàn)良好線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r大于0. 990。曹慧等[9]采用超高效液相色譜/質(zhì)譜技術(shù)對牛奶中青霉素類藥物殘留進(jìn)行檢測。發(fā)現(xiàn)10種青霉素藥物的定量限為0.1-10.0μg/kg,回收率達(dá)到72.0%-110%,10種青霉素藥物呈現(xiàn)良好線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)r>0.99,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.83%-9.33%。說明該方法適用于牛奶中青霉素類抗生素殘留的檢測。
4 展望
高效液相色譜法已經(jīng)廣泛用于抗生素類藥物殘留的檢測,但是,仍存在不足之處。隨著科技不斷創(chuàng)新發(fā)展,高效液相色譜技術(shù)將會(huì)和其他先進(jìn)技術(shù)聯(lián)用,使藥物分析水平無論是分析速度、檢測質(zhì)量還是檢測靈敏度方面,都將邁上一個(gè)新臺(tái)階。
參考文獻(xiàn)
[1] 張律,岳亞軍,賴少陽,等·高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定生活飲用水中11種抗生素[J]·食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào),2017,6(6):2204-2210.
[2] 吳曉蓮,包艷萍,向壘,等.固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定蔬菜中8種磺胺類抗生素[J].環(huán)境化學(xué),2013,32(6):1038-1044.
[3] 張科明,梁飛燕,鄧明,等.QuEChERS 結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定豬肉中多類獸藥殘留[J].色譜,2016,34(9):860~867.
[4] 劉健明,喬晉,陳明,等.固相萃取- 超高壓液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜測定水中4 種四環(huán)素類抗生素[J].城鎮(zhèn)供水. 2018(2) :44-47.
[5] 王敏娟,胡佳薇,田麗,等.21 種喹諾酮及四環(huán)素類抗生素殘留[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志. 2017, 27(4):473-476.
[6] 劉暢.蔬菜中二十種磺胺類抗生素殘留的QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué),2018(6):101-105.
[7] 劉文靜.高效液相色譜法檢測乳品飲料中四環(huán)素類抗生素[J].食品研究與開發(fā).2016,37(21):133-137.
[8] 程家興,趙起越,李令軍,等.固相萃取/超高效液相色譜-質(zhì)譜法篩查及檢測養(yǎng)魚河水中抗生素[J]. 分析測試學(xué)報(bào),2018,37(3): 275-281.
[9] 曹慧,陳小珍,朱巖,等.多壁碳納米管凈化-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)同時(shí)測定牛奶中青霉素類藥物殘留[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào),2015,36(1):23-28.