牛初乳粉中免疫球蛋白IgG增強(qiáng)免疫力功能的研究

◎ 秦蘭霞

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030）

牛初乳通常是指母牛分娩后7天內(nèi)所分泌的乳汁[1]?，F(xiàn)代科學(xué)研究證實(shí)，牛初乳是自然界免疫因子最為富集的生物資源[2]，其天然含有大量具不同生理活性的功能性組分[3]，主要分為生長因子和免疫因子兩大類。免疫球蛋白是牛初乳中最引人注目的免疫因子，按抗原性不同可分為五類：IgG、IgA、IgM、IgE和IgD[4]，其中最主要的免疫因子是含量很高，具有抗原結(jié)合特性的IgG。IgG能夠結(jié)合、凝集抗原，具有中和毒素和病原微生物（如病毒）的作用，是母體向幼崽傳遞特異性免疫力的主要載體[5]。國內(nèi)外很多的研究表明，免疫球蛋白IgG對犢牛和人體的免疫功能有影響。如Gutzwiller對初生小牛腹瀉情況的研究表明，從出生第二天開始用添加初乳成分的牛乳喂養(yǎng)小牛，能有效防止新生牛腹瀉的發(fā)生[6]。Sugisawa等[7]發(fā)現(xiàn)，牛初乳能促進(jìn)外周血中的中性粒細(xì)胞發(fā)揮吞噬作用，而且這種激活作用是對初乳濃度和其中IgG濃度依賴的，提示牛初乳能強(qiáng)烈激活中性粒細(xì)胞的吞噬作用，從而在新生兒的非特異性免疫過程中發(fā)揮一定的促進(jìn)作用。

本研究對一款奶片產(chǎn)品進(jìn)行動物功能性試驗(yàn)，其IgG含量達(dá)到8%，以驗(yàn)證該產(chǎn)品對機(jī)體免疫力功能的影響。

1 材料與方法

1.1 樣品

市售牛初乳粉產(chǎn)品，樣品為乳黃色粉末，牛初乳粉的應(yīng)用的氣味。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物

SPF級ICR小白鼠：遼寧長生生物技術(shù)有限公司。選擇健康雌性小鼠，體重18～22 g，共分為5組，分別進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和NK細(xì)胞活性測定；進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)；進(jìn)行半數(shù)溶血值（HC50）測定和抗體生成細(xì)胞檢測；進(jìn)行碳廓清實(shí)驗(yàn)及動物臟/體比值測定；進(jìn)行小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)。

1.3 劑量設(shè)計

市售牛初乳粉產(chǎn)品免疫球蛋白IgG含量為10%，推薦量每人每日1袋，每袋1 g，含有效成分免疫球蛋白IgG為0.1 g，如成人體重以60 kg計，則相當(dāng)于0.001 7 g/kg.BW。小鼠的等效劑量為人體推薦量的10倍，即每日0.017 g/kg.BW（中劑量），高、低各設(shè)一個劑量組，即0.051 g/kg.BW（高劑量，是人體推薦量的30倍）和0.008 g/kg.BW（低劑量，是人體推薦量的5倍），并設(shè)蒸餾水為對照組。每組動物則按體重的2%灌胃容積進(jìn)行灌胃，各實(shí)驗(yàn)組的溶劑均為蒸餾水，連續(xù)灌胃30天后測各項(xiàng)免疫指標(biāo)。

1.4 儀器與試劑

動物天平、離心機(jī)、分析天平、顯微鏡、722分光光度計、二氧化碳培養(yǎng)箱和酶標(biāo)儀等。

無菌手術(shù)器械、微量注射器（25 μL）、血色素吸管、游標(biāo)卡尺（精密度0.01 mm）、24孔培養(yǎng)板等。

綿羊紅細(xì)胞（SRBC）、雞紅細(xì)胞、Hank’s液（pH7.2～7.4）、RPMI 1640培養(yǎng)液、小牛血清、印度墨汁、氧化型輔酶I、Giemsa染液、0.2 mol/L的Tris-HCl緩沖液（pH8.2）、青霉素和鏈霉素等。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

依據(jù)《保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗(yàn)方法》2003版[8]對增強(qiáng)免疫力功能試驗(yàn)項(xiàng)目的要求，分別進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（足跖增厚法）（DTH）、ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（MTT法）、抗體生成細(xì)胞檢測（Jerne 改良玻片法）、半數(shù)溶血值（HC50）的測定、小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)、臟器/體重比值測定、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（半體內(nèi)法）、NK細(xì)胞活性測定（乳酸膠氫酶LDH測定法）。

1.6 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定

用SPSS分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 牛初乳粉免疫球蛋白對小鼠體重的影響

小鼠給予牛初乳粉30天后對小鼠體重的影響見表1。

表1 牛初乳粉對小鼠體重的影響表

由表1結(jié)果可見，各劑量組受試動物的初始體重和終末體重與對照組相比較均沒有顯著性差異（P＞0.05），表明在此實(shí)驗(yàn)條件下牛初乳粉對小鼠體重的增長沒有影響。

2.2 牛初乳粉免疫球蛋白對小鼠臟器/體重比值的影響

經(jīng)口給予小鼠牛初乳粉30天后，結(jié)果對臟器/體重比值的影響見表2。

表2 牛初乳粉對小鼠臟器/體重比值的影響表

由表2可知，給予小鼠不同劑量的牛初乳粉30天，其脾臟/體重比值和胸腺/體重比值在低、中、高劑量組與對照組間比較均沒有顯著性差異（P＞0.05），表明牛初乳粉對小鼠的臟器/體重比值無影響。

2.3 牛初乳粉免疫球蛋白對小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化影響

經(jīng)口給予小鼠牛初乳粉30天，結(jié)果對小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化影響見表3。

表3 牛初乳粉對小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響表

由表3可知，給予不同劑量的牛初乳粉30天，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析處理，各劑量組的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能與對照組比較均沒有顯著性差異（P＞0.05），表明牛初乳粉不能增強(qiáng)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能。

2.4 牛初乳粉免疫球蛋白對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）的影響

經(jīng)口給予小鼠牛初乳粉30天后，結(jié)果對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）的影響見表4。

表4 牛初乳粉對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）的影響表

由表4可知，給予小鼠不同劑量的牛初乳粉30天，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析處理，其足跖腫脹度（足跖厚度）在注射SRBC前后差值，高、中、低劑量組與對照組間比較有極顯著性差異（P＜0.01），說明牛初乳粉能增強(qiáng)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。

2.5 牛初乳粉免疫球蛋白對小鼠抗體生成細(xì)胞的影響

經(jīng)口給予小鼠牛初乳粉30天后，結(jié)果對小鼠抗體生成細(xì)胞的影響見表5。

表5 牛初乳粉對小鼠抗體生成細(xì)胞的影響表（X±SD）

由表5可知，給予不同劑量的牛初乳粉30天，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析處理，各劑量組的小鼠抗體生成細(xì)胞與對照組間比較均沒有顯著性差異（P＞0.05），表明牛初乳粉不能增強(qiáng)小鼠抗體生成細(xì)胞功能。

2.6 牛初乳粉免疫球蛋白對小鼠半數(shù)溶血值（HC50）的影響

經(jīng)口給予小鼠牛初乳粉30天后，結(jié)果對小鼠半數(shù)溶血值（HC50）的影響見表6。

由表6可知，給予小鼠不同劑量的牛初乳粉30天，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析處理，高、中、低劑量組的半數(shù)溶血值（HC50）與對照組比較有極顯著性差異（P＜0.01），表明牛初乳粉能提高小鼠半數(shù)溶血值（HC50）。

表6 牛初乳粉對小鼠半數(shù)溶血值（HC50）的影響表

2.7 牛初乳粉免疫球蛋白對小鼠碳廓清功能的影響

經(jīng)口給予小鼠牛初乳粉30天后，結(jié)果對小鼠碳廓清能力的影響見表7。

表7 牛初乳粉對小鼠碳廓清功能的影響表

由表7可知，給予小鼠不同劑量的牛初乳粉30天，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析處理，高、中、低劑量組吞噬指數(shù)與對照組比較有極顯著性差異（P＜0.01），表明牛初乳粉能夠增加小鼠的碳廓清功能。

2.8 牛初乳粉免疫球蛋白對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的影響

經(jīng)口給予小鼠牛初乳粉30天后，結(jié)果對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的影響見表8。

表8 牛初乳粉對小鼠巨噬細(xì)胞吞噬紅細(xì)胞的影響表

由表8可見，給予小鼠不同劑量的牛初乳粉30天，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析處理，高、中、低劑量組吞噬率和吞噬指數(shù)與對照組比較有極顯著性差異（P＜0.01），說明牛初乳粉能夠增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。

2.9 牛初乳粉免疫球蛋白對小鼠NK細(xì)胞活性的影響

經(jīng)口給予小鼠牛初乳粉30天后，結(jié)果對小鼠NK細(xì)胞活性的影響見表9。

表9 牛初乳粉對小鼠NK細(xì)胞活性的影響表（X±SD）

由表9可知，給予小鼠不同劑量的牛初乳粉30天，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析，高、中、低劑量組NK細(xì)胞活性與對照組相比較有極顯著性差異（P＜0.01），說明牛初乳粉能夠增強(qiáng)小鼠NK細(xì)胞的活性。

3 結(jié)論

經(jīng)口經(jīng)予小鼠不同劑量的牛初乳粉30天，進(jìn)行了四類檢驗(yàn)共計7項(xiàng)試驗(yàn)，即細(xì)胞免疫功能（小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)）、體液免疫功能（抗體生成細(xì)胞檢測和半數(shù)溶血值HC50的測定）、單核-巨噬細(xì)胞功能（小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)）以及NK細(xì)胞活性測定。結(jié)果表明該牛初乳粉可明顯增強(qiáng)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，提高小鼠的半數(shù)溶血值（HC50），增加小鼠的碳廓清功能，增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能和NK細(xì)胞的活性。由此可見，該牛初乳粉可增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能和NK細(xì)胞活性，即該牛初乳粉具有增強(qiáng)免疫力功能的作用。