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    枳葛口服液對(duì)酒精性肝病大鼠脂質(zhì)代謝的影響*

    2018-10-30 06:23:40蔡麗君劉友平楊國(guó)川
    關(guān)鍵詞:口服液酒精性低劑量

    蔡麗君,劉友平,李 志,李 波,楊國(guó)川,魏 嵋**

    (1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院 瀘州 646000;2.西南醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院瀘州 646000;3.成都市新津縣中醫(yī)醫(yī)院 新津 611430)

    酒精性肝?。╝lcoholic liver disease,ALD)是指長(zhǎng)期大量飲酒后所出現(xiàn)的肝臟病理性損傷,從病理形態(tài)學(xué)上將ALD分為幾種形式:輕癥ALD、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纖維化和肝硬化五大類型[1-3]。其中酒精性脂肪肝是由于過(guò)量飲酒導(dǎo)致甘油三酯及膽固醇等在肝組織堆積,從而出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變性的疾病[4]?,F(xiàn)代研究證實(shí),酒精性脂肪肝在酒精性肝損傷的病理發(fā)展過(guò)程中占有重要地位,并呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì),因此脂質(zhì)代謝在ALD進(jìn)展中發(fā)揮的作用受到廣泛關(guān)注[5,6]。枳葛口服液是我院全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病著名專家教授經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期臨床探索總結(jié)出的幾味藥食同源純中藥解酒經(jīng)驗(yàn)組方,具有解酒保肝、健脾利濕活血之功效,用于對(duì)長(zhǎng)期大量飲酒造成的醉酒及預(yù)防酒精性肝損傷收到良好的效果,但具體作用機(jī)制不清楚。為了探討枳葛口服液的健脾利濕活血作用,本研究側(cè)重觀察枳葛口服液對(duì)酒精性肝損傷模型大鼠脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及藥品

    清潔級(jí)SD雄性大鼠共90只,體質(zhì)量170 g-210 g,由西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。枳葛口服液由西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供,規(guī)格20 mL×6支/盒,處方組成:枳椇子、葛根、山楂等,有效期2年,批號(hào)20151026。解酒靈口服液由黃石市今陽(yáng)保健品廠提供,規(guī)格10 mL×6支/盒,處方組成:甘草、枸杞子等,有效期18個(gè)月,生產(chǎn)批號(hào)20150401。

    1.1.2 試劑

    瀘州老白干購(gòu)于中國(guó)·瀘州老窖股份有限公司,酒精度52%VOL,生產(chǎn)批號(hào)20150604。普通飼料由西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。蘇木素-伊紅(Hematoxylin and Eosin,HE)染液及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alartine arninotransferase,ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)、甘 油 三 酯(triglycerides,TG)、總膽固醇(total cholesterol,TC)測(cè)定試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 造模及給藥

    SD雄性大鼠90只適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后隨機(jī)分為6組:正常組、ALD動(dòng)物模型組(模型組)、枳葛口服液高劑量組(高劑量組)、枳葛口服液中劑量組(中劑量組)、枳葛口服液低劑量組(低劑量組)及解酒靈口服液陽(yáng)性對(duì)照組(對(duì)照組),每組15只。每天9點(diǎn)灌胃:正常組采用蒸餾水灌胃1.0 mL/100 g/天,其余每組均給予52%瀘州老白干灌胃1.0 mL/100 g/天,同時(shí)高、中、低劑量三組各分別灌服枳葛口服液1.0 mL/100 g天、0.5 mL/100 g/天和0.25 mL/100 g/天,對(duì)照組灌胃解酒靈口服液0.5 mL/100 g/天。以上各組均自由飲水,普通飼料,每天20點(diǎn)以后禁食不禁水,持續(xù)12周。

    1.2.2 標(biāo)本采集

    最后1次給藥后12 h禁食,用1%戊巴比妥鈉按照0.4 mL/100 g體重腹腔注射麻醉,腹主動(dòng)脈取血后,4℃冰箱放置12 h后離心留取血清,-80℃冰箱保存,用于檢測(cè)ALT、AST、TG、TC;肝臟稱重后取部分肝左葉以4%甲醛固定,做HE病理染色;剩余肝組織用于檢測(cè)TC、TG含量。

    1.2.3 指標(biāo)檢測(cè)及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    計(jì)算肝臟指數(shù),即肝臟指數(shù)=完整肝臟濕重/體重×100%;HE染色觀察肝組織的結(jié)構(gòu);全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清ALT、AST、TG、TC含量;比色法檢測(cè)肝組織TC、TG含量。統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,定量資料采用均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間對(duì)比采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用最小差異顯著性法(least significance of difference,LSD),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,當(dāng)P<0.05時(shí)認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 各組大鼠肝組織HE染色的比較

    正常組大鼠肝小葉及細(xì)胞形狀大小結(jié)構(gòu)均勻,邊界分明、呈現(xiàn)放射狀布列整齊規(guī)則;模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)不規(guī)則,邊界模糊,細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)大面積大小泡性脂肪空泡,部分細(xì)胞核偏移;高劑量組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)接近正常組;與模型組相比,中劑量組和對(duì)照組均有所改善;模型組和低劑量組基本類似,見(jiàn)圖1。

    2.2 各組大鼠肝臟指數(shù)的比較

    圖1 各組大鼠HE染色鏡下圖(×400)

    表1 各組肝臟指數(shù)的比較(S,n=15)

    表1 各組肝臟指數(shù)的比較(S,n=15)

    注:與正常組比較aP<0.01,bP<0.05;與模型組比較cP<0.01,dP<0.05;與對(duì)照組比較eP<0.05。

    肝臟指數(shù)2.056±0.211 3.417±0.231a 2.102±0.139ce 2.442±0.121bd 2.762±0.166a 2.51±0.32bd分組正常組模型組高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組

    表2 各組ALT、AST、TC、TG的比較(S,n=15)

    表2 各組ALT、AST、TC、TG的比較(S,n=15)

    注:與正常組比較aP<0.01,bP<0.05;與模型組比較cP<0.01,dP<0.05;與對(duì)照組比較eP<0.05。

    血清TG/(mmol/L)0.17±0.02 0.56±0.10a 0.27±0.04bce 0.43±0.07ad 0.47±0.07a 0.45±0.08ad分組正常組模型組高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組ALT/(u/L)43.02±2.99 57.58±3.36a 46.±2.76ce 51.11±2.24bd 54.41±2.23a 51.98±2.16bd AST/(u/L)79.12±8.32 102.18±7.56a 84.26±7.93ce 91.06±7.39bd 94.82±7.22ad 92.80±7.42bd血清TC/(mmol/L)1.49±0.24 1.89±0.24a 1.58±0.22ce 1.77±0.22bd 1.84±0.29a 1.82±0.34bd

    與正常組比較,除高劑量組外各組肝臟指數(shù)均顯著升高(P<0.01或0.05),其中模型組和低劑量組升高最為明顯(P<0.01)。與模型組比較,各組肝臟指數(shù)在高、中、低劑量組及對(duì)照組均有所下降,但下降趨勢(shì)分別呈現(xiàn)一定的遞減趨勢(shì),即枳葛口服液高劑量組下降最為明顯(P<0.01),幾乎接近正常組;其次是中劑量組及對(duì)照組(P<0.05);低劑量組降低最不顯著。與解酒靈口服液對(duì)照組比較,僅高劑量組肝臟指數(shù)有顯著性差異(P<0.05),中、低劑量組差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05)(表1、圖2)。

    2.3 各組大鼠血清ALT、AST、TG、TC的比較

    與正常組比較,除高劑量組外各組血清ALT、AST、TC、TG含量均顯著升高(P <0.01或0.05),其中模型組和低劑量組升高最為明顯(P<0.01)。與模型組比較,ALT、AST、TC、TG血清含量在高、中、低劑量組及對(duì)照組均有所下降,且組間下降趨勢(shì)同以上肝臟指數(shù)的下降趨勢(shì),即枳葛口服液高劑量組下降最為明顯(P<0.01),其次是中劑量組及對(duì)照組(P<0.05),低劑量組降低最不顯著。同樣與解酒靈口服液對(duì)照組比較,僅高劑量組血清ALT、AST、TC、TG含量有顯著性差異(P<0.05),中、低劑量組差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05)(表2、圖3,4)。

    2.4 各組大鼠肝組織TG、TC的比較

    圖2 各組肝臟指數(shù)的比較

    圖3 各組血清ALT、AST含量比較

    圖4 各組血清TC、TG含量比較

    與正常組比較,同樣除高劑量組外各組肝組織TC、TG含量均顯著升高(P<0.01或0.05),其中模型組和低劑量組升高最為明顯(P<0.01)。與模型組比較,肝組織TC、TG含量在高、中、低劑量組及對(duì)照組均有所下降,且組間下降趨勢(shì)及組間比較顯著性差異性比較均同以上肝臟指數(shù)及ALT、AST、TC、TG血清含量。同樣與解酒靈口服液對(duì)照組比較,僅高劑量組肝組織TC、TG含量有顯著性差異(P <0.05),中、低劑量組差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05)(表3、圖5)。

    表3 各組肝組織TC、TG的比較(S,n=15)

    表3 各組肝組織TC、TG的比較(S,n=15)

    注:與正常組比較aP<0.01,bP<0.05;與模型組比較cP<0.01,dP<0.05;與對(duì)照組比較eP<0.05。

    肝組織TG/(mmol/L)2.48±0.33 3.91±0.30a 2.68±0.23ce 3.08±0.26bd 3.49±0.33a 3.15±0.36bd分組正常組模型組高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組肝組織TC/(mmol/L)7.25±1.41 9.22±0.88a 7.71±0.90ce 8.28±0.65bd 8.83±0.93a 8.37±0.54bd

    圖5 各組肝組織TC、TG含量比較

    3 討論

    ALD的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,如與能量代謝、氧化應(yīng)激、免疫調(diào)節(jié)、脂質(zhì)代謝等有關(guān)[5,7];其中脂肪代謝異常是酒精性肝損傷發(fā)生的關(guān)鍵因素之一[4]。因?yàn)楦闻K是脂類代謝的主要器官,不僅是合成甘油三酯、膽固醇等脂質(zhì)物質(zhì)最主要的場(chǎng)所,同時(shí)擔(dān)負(fù)著脂質(zhì)的轉(zhuǎn)化與排泄等重要作用,因此當(dāng)肝細(xì)胞功能受損時(shí),將會(huì)影響血脂、脂蛋白及載脂蛋白的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝等生理代謝過(guò)程,導(dǎo)致機(jī)體脂代謝紊亂[8-10]。本研究通過(guò)單純酒精性肝損傷大鼠模型觀察枳葛口服液的解酒護(hù)肝機(jī)制發(fā)現(xiàn):模型組不管從病理學(xué)改變(見(jiàn)圖1),肝臟指數(shù)(見(jiàn)表1,圖2)及明顯升高的ALT、AST、TC、TG(見(jiàn)表2,3及圖3,4,5),都充分說(shuō)明在單純持續(xù)的乙醇刺激下大鼠因機(jī)體脂代謝紊亂而發(fā)生了較嚴(yán)重的肝脂肪變性,肝功能受損嚴(yán)重,這與其它相關(guān)類似實(shí)驗(yàn)較一致[11-13]。這可能是乙醇在代謝的過(guò)程中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物乙醛及自由基等破壞肝細(xì)胞線粒體的氧化功能,導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷、脂代謝紊亂而使TC、TG大量沉積在肝臟中[14]。當(dāng)給予乙醇刺激的同時(shí)給予不同劑量枳葛口服液并解酒靈口服液做對(duì)照時(shí),各實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟指數(shù)、血清ALT、AST、TC、TG及肝組織中TC、TG均低于模型組,其中高劑量枳葛口服液組值最低并幾乎接近正常組值,對(duì)照組解酒靈口服液與中劑量枳葛口服液療效相當(dāng)(見(jiàn)表1、表2、表3)。通過(guò)各組各數(shù)據(jù)柱狀圖發(fā)現(xiàn),以上所有數(shù)據(jù)在這六組中的變化趨勢(shì)非常一致(見(jiàn)圖2、圖3、圖4、圖5),說(shuō)明高劑量枳葛口服液(1.0 mL/100 g/天)確實(shí)能在飲酒人群中起到有效的降脂保肝作用。

    中藥防治酒精性肝病優(yōu)勢(shì)明顯,具有良好的應(yīng)用前景[15-17]。我院著名中醫(yī)專家孫同郊教授結(jié)合西醫(yī)對(duì)酒精性肝病的理解,認(rèn)為酒含濕熱之毒,濕熱隱伏于血分,導(dǎo)致氣滯、血瘀等失調(diào)性改變;濕困脾土,使脾失健運(yùn);故而認(rèn)為“脾虛血瘀”是酒精性肝病的基本病機(jī)[18]。鑒于以上理解并經(jīng)過(guò)幾十年的臨床探索,孫同郊教授總結(jié)出了具有明顯健脾利濕活血之功效的解酒經(jīng)驗(yàn)方——枳葛口服液,其組成藥方主要有:枳椇子、葛根、山楂等。相關(guān)研究證實(shí):枳椇子水煎液可以顯著降低TC、TG[20,21];葛根素是潛在的降血脂藥物,它能提高高脂血癥患者冠狀動(dòng)脈血流,而葛根異黃酮能夠降低糖尿病小鼠血糖,改善小鼠體重,使血清TC、TG的含量降低,從而抑制糖脂代謝紊亂[21,22];山楂含有黃酮類及解脂酶,它能明顯抑制膽固醇合成的限速酶活力,從而減少內(nèi)源性膽固醇的生成,并且通過(guò)促使脂肪分解、清除,從而降低血脂[23,24]??梢?jiàn),枳葛口服液的健脾利濕活血之功效可能與其改善大鼠脂質(zhì)代謝紊亂密切相關(guān),從而防止肝臟發(fā)生進(jìn)一步肝脂肪變性。

    綜上所述,早期、定量的枳葛口服液對(duì)酒精性肝損傷有一定的阻斷或抑制作用,其機(jī)制可能與改善大鼠脂質(zhì)代謝紊亂有關(guān);為了更好地為廣大飲酒人群提供安全可靠、行之有效的保健制劑,我們擬對(duì)枳葛口服液的保健機(jī)制做進(jìn)一步研究以期為其保健功能評(píng)價(jià)及開(kāi)發(fā)利用提供一定的科學(xué)依據(jù)。

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