秦嶺細鱗鮭腸黏膜結(jié)構(gòu)研究

左愈臻，紀 鵬，武凡琳，鄧 婕，賈 寧

（1.甘肅省天水市清水縣畜牧獸醫(yī)局，741400；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，蘭州 730070）

秦嶺細鱗鮭 （Brachymystaxlenok tsinlingensis）隸屬于鮭形目（Salmoniformes）鮭科（Salmonidae）細鱗鮭屬（Brachymystax Gunther）[1]，中國僅1屬1種，是一種野生名貴的陸封型冷水魚類，被列為國家Ⅱ級重點保護的水生野生動物。但由于人為偷捕、生境的破壞和自然災(zāi)害等因素的影響，使其分布范圍和存活數(shù)量逐年銳減。動物小腸不僅具有對營養(yǎng)物質(zhì)充分消化與吸收的功能，同時也具有免疫屏障功能[2]。近年來，雖然有學(xué)者對秦嶺細鱗鮭消化道做了部分研究[3]。但到目前為止，對秦嶺細鱗鮭腸各段黏膜組織結(jié)構(gòu)和黏膜免疫的相關(guān)研究，在國內(nèi)外尚未見報道。為保護我縣分布的秦嶺細鱗鮭這一珍稀物種，該試驗對秦嶺細鱗鮭腸黏膜結(jié)構(gòu)和黏膜免疫進行了初步研究，探討秦嶺細鱗鮭腸黏膜結(jié)構(gòu)對環(huán)境的適應(yīng)性。

1 材料與方法

1.1 實驗動物和樣品處理

5例秦嶺細鱗鮭（♂3，♀2，體長為14.1-31.6 cm，體重為25.8-260.4 g）腸由甘肅省天水市清水縣畜牧獸醫(yī)局人工馴化基地提供。將魚解剖后，迅速取出腸前、中、后3段，用新配置的生理鹽水沖洗干凈，置于4%多聚甲醛磷酸緩沖液（0.1 mol/L；pH=7.4）中固定。同時，在魚解剖后30 min內(nèi)從前段腸、中段腸和后段腸黏膜分別切取數(shù)塊（1 mm3），固定于2%多聚甲醛-2.5%戊二醛溶液中預(yù)固定，4℃冰箱保存。

1.2 石蠟切片及染色

常規(guī)石蠟包埋，制備連續(xù)橫斷切片(5 μm)，每隔10張取1張。經(jīng)HE染色、高碘酸-Schiff氏（PAS）染色和甲基綠派諾寧 （Methyl Green-Pyronin MGP）染色及甲苯胺藍（MTB）染色，光鏡下仔細研究腸結(jié)構(gòu)。

1.3 測量和數(shù)據(jù)處理

取各段腸絨毛走向平直、結(jié)構(gòu)完整的切片，用OLYMPUS BX-UCB/BX61型光學(xué)顯微鏡觀察、拍照、測量和計數(shù)。每段腸選擇5張切片，在低倍鏡下，每張切片選擇5個視野，每張照片選5根典型絨毛，用接目測微尺測定其高度（絨毛基部到絨毛頂端）和肌層厚度，分別計算各段腸中絨毛的平均高度和肌層厚度平均值。數(shù)據(jù)處理采用SPASS10.0進行單因素方差分析和比較。

2 結(jié)果

2.1 秦嶺細鱗鮭腸黏膜結(jié)構(gòu)

秦嶺細鱗鮭腸壁有四層，分別為黏膜層、黏膜下層、肌層和漿膜。黏膜層由黏膜上皮、固有層和黏膜肌層組成；肌層是平滑肌，有較厚且明顯的內(nèi)環(huán)肌和很薄而不明顯的外縱肌兩層。漿膜由單層扁平細胞構(gòu)成。前段腸壁較厚，黏膜有褶皺突向腸腔，腸絨毛密集且短寬，且頂端有典型的嗜酸性紋狀緣；固有層分布有一定數(shù)量的腸腺；黏膜下層未見腸腺，肌層相對厚，平均厚度為343.5±4.2 μm（圖 1A）。 中段腸壁較厚，有 16-20個長度不等的指狀絨毛突于腸腔 （平均長度330.6±16.3 μm）、固有層和黏膜下層未見腸腺分布（圖1B），肌層較薄。后段腸絨毛稀疏且粗而短小，黏膜上皮和固有層均有一定數(shù)量的集合淋巴小結(jié)，其生發(fā)中心明顯（圖1C），固有層有少量腸腺分布，肌層較厚。

秦嶺細鱗鮭不同腸段的腸絨毛高度以前段腸最高，平均高度為 460.4±23.8Aμm，中段腸、后段腸依次降低；前段腸、中段腸、后段腸絨毛高度相比差異極顯著（p<0.01）（表1）。肌層以前段腸最厚，平均厚度為 856.7±5.6Dμm，中段腸（平均58.3±2.4Iμm）、后段腸（平均 115.6±4.7Eμm）；前段腸、中段腸、后段腸肌層厚度相比差異極顯著（p<0.01）（表 1）。

圖1 秦嶺細鱗鮭腸黏膜結(jié)構(gòu)（HE）（A：前段腸；B：中段腸；C：后段腸）

表1 秦嶺細鱗鮭腸組織結(jié)構(gòu)變化特點

3 討論

動物腸道的功能包括消化與吸收。消化功能指的是將食物消化成為可以吸收的營養(yǎng)物質(zhì)，吸收功能指的是吸收營養(yǎng)物質(zhì)與水分。動物小腸黏膜結(jié)構(gòu)是否完整或狀態(tài)是否良好是保證其發(fā)揮基本功能的前提[4]。資料顯示，腸黏膜絨毛高度與肌層厚度是衡量小腸消化與吸收功能的兩個重要指標[5]。P Saenphoom[6]研究發(fā)現(xiàn)腸絨毛的高度和腸接觸營養(yǎng)物質(zhì)的面積有必然聯(lián)系。周艷華等[7]研究發(fā)現(xiàn)，小腸的黏膜與肌層的厚度和小腸節(jié)律性收縮與食糜機械消化效率有必然聯(lián)系。秦嶺細鱗鮭腸壁由黏膜層、黏膜下層、肌層和漿膜構(gòu)成。前段腸壁較厚，腸絨毛密集且短寬，頂端有典型的嗜酸性紋狀緣；固有層有一定數(shù)量的腸腺；黏膜下層未見腸腺。中段腸有16-20個長度不等的指狀絨毛突于腸腔，固有層和黏膜下層未見腸腺分布。后段腸絨毛稀疏且粗而短小，黏膜上皮和固有層均有一定數(shù)量的集合淋巴小結(jié)，其生發(fā)中心明顯，固有層有少量的腸腺分布。前段腸絨毛高度最高，三段腸從前到后依次降低且差異極顯著（p<0.01）。肌層以前段腸最厚，三段腸肌層厚度相比差異極顯著（p<0.01）。該研究結(jié)果在以往研究中無報道，相似報道也僅僅卿素珠[3]等人通過運用大體解剖、常規(guī)組織學(xué)方法對秦嶺細鱗鮭的消化系統(tǒng)組織形態(tài)進行系統(tǒng)觀察后發(fā)現(xiàn)秦嶺細鱗鮭消化道組織結(jié)構(gòu)與其肉食性功能密切相關(guān)。本文揭示的秦嶺細鱗鮭腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)及特點對于其對環(huán)境的適應(yīng)性有顯著價值。