含馬兜鈴酸類中藥材中馬兜鈴總酸的含量

李紅妍

摘 要：馬兜鈴酸是一種腎毒素，具有一定的生理活性，但也能造成腎小管大量喪失，導(dǎo)致腎衰竭。在應(yīng)用含馬兜鈴酸類中藥材時(shí)，應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格控制其用量，盡可能避免其毒副作用。本文基于一種馬兜鈴總酸的含量測(cè)定方法，測(cè)定目前市售的幾種含馬兜鈴酸類中藥材中馬兜鈴總酸含量，以指導(dǎo)臨床用藥。

關(guān)鍵詞：馬兜鈴酸 含量 中藥材

中圖分類號(hào)：R282 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1003-9082（2018）10-00-01

馬兜鈴酸為硝基菲類有機(jī)酸類化合物，天然存在于諸如馬兜鈴屬與細(xì)辛屬等馬兜鈴科植物中，此外，在依靠吸食這類植物生存的蝴蝶體內(nèi)，也存有一定量的馬兜鈴酸。此類馬兜鈴科植物曾廣泛地被中醫(yī)作為原生藥材入藥。但同時(shí)馬兜鈴酸也是一種較為嚴(yán)重的致病因素，有相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道，馬兜鈴酸是一種腎毒素，可導(dǎo)致馬兜鈴酸腎病等嚴(yán)重疾病，同時(shí)還具有致癌作用及致突變作用。2017年10月27日，在世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的一份致癌物清單中，馬兜鈴酸、含馬兜鈴酸的植物均在其列。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外的臨床治療中，因服用過(guò)量的馬兜鈴酸而導(dǎo)致腎衰竭的病例也不在少數(shù)。

一、測(cè)定方法

本次測(cè)定以馬兜鈴總酸的含量為指標(biāo)，用紫外分光光度法測(cè)定市售的不同產(chǎn)地含馬兜鈴酸類中藥材中馬兜鈴總酸含量。紫外分光光度法是一種較為常用的定量測(cè)定、鑒別與雜質(zhì)檢查方法，其原理是通過(guò)測(cè)定待測(cè)物質(zhì)處在不同波長(zhǎng)時(shí)的吸光度獲得待測(cè)物質(zhì)的吸收光譜，結(jié)果以繪制波長(zhǎng)與吸光度之間的關(guān)系圖呈現(xiàn)。與其他測(cè)定方法相比較，紫外分光光度法具有較高的靈敏度，測(cè)定工作所涉及的儀器設(shè)備較為簡(jiǎn)單，操作也較為方便，選擇性好，同時(shí)能夠較快地獲得結(jié)果，因此得到了較為廣泛的應(yīng)用。

本次測(cè)定選擇的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)儀器型號(hào)為SP-752型，所測(cè)中藥材為購(gòu)于江蘇等地的青木香，購(gòu)于陜西等地的馬兜鈴，購(gòu)于吉林等地的關(guān)木通，購(gòu)于東北等地的遼細(xì)辛。無(wú)水乙醇、甲醇、甲酸、乙酸乙酯、鹽酸均為分析純。

二、測(cè)定步驟及結(jié)果

馬兜鈴酸Ⅰ和馬兜鈴酸Ⅱ在馬兜鈴科植物中的含量相對(duì)較高，二者被認(rèn)為是馬兜鈴屬以及細(xì)辛屬植物產(chǎn)生毒素、致癌的重要因素。在進(jìn)行待測(cè)材料的測(cè)定前先完成馬兜鈴酸Ⅰ對(duì)照品溶液的制備。精密稱定馬兜鈴酸I對(duì)照品，用無(wú)水乙醇配置濃度分別為0.03，0.025，0.02，0.015，0.01，0.005mg/mL的對(duì)照品溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為390nm，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定此時(shí)的吸光度，并以馬兜鈴酸Ⅰ的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制曲線，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在該范圍內(nèi)，馬兜鈴酸Ⅰ的濃度與其吸光度具有良好的線性關(guān)系。

在進(jìn)行供試品溶液的制備時(shí)，取適量藥材生品粉末，精密稱定0.3g。為優(yōu)化馬兜鈴總酸的提取條件，可采用正交試驗(yàn)法，即用正交表安排與分析多種因素試驗(yàn)，在馬兜鈴總酸的測(cè)定中，主要考察提取溶劑的濃度、溶劑的用量以及提取的方法，以馬兜鈴總酸含量為參考指標(biāo)安排正交試驗(yàn)：溶劑有濃度2.5%的氨水、濃度5%的氨水、濃度7.5%的氨水三種，溶劑的用量有40mL、50mL、60mL三種，提取的方法有冷浸過(guò)夜、超聲提取15min、超聲提取15min×2三種。稱重并補(bǔ)足重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液10mL，以6mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值為2，加乙酸乙酯10mL進(jìn)行4次萃取，合并有機(jī)層并用20mL水洗至中性，回收溶劑，加無(wú)水乙醇溶解殘?jiān)ㄈ葜?0mL，精密吸取2mL，用無(wú)水乙醇定容至5mL。由多次重復(fù)試驗(yàn)的結(jié)果分析，以60mL濃度為7.5%的氨水采用冷浸過(guò)夜的方法提取的效果最佳，且在馬兜鈴酸總酸含量的影響因素中，提取方法產(chǎn)生的影響較大，差異極為顯著，其次是溶劑的用量，差異較為顯著，而不同濃度的溶劑之間不存在顯著差異。

經(jīng)過(guò)上述試驗(yàn)分析，對(duì)馬兜鈴總酸的最優(yōu)提取方法，以青木香為例，精密稱定青木香生品粉末，過(guò)四號(hào)篩，加入60mL濃度為7.5%的氨水，經(jīng)冷浸過(guò)夜，補(bǔ)足重量，取續(xù)濾液10mL，以6mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值為2，加10mL乙酸乙酯進(jìn)行4次萃取，合并有機(jī)層并用20mL水洗至中性，回收溶劑，加無(wú)水乙醇溶解殘?jiān)?，定容?0mL，精密吸取2mL，用無(wú)水乙醇定容至5mL。

對(duì)各類含馬兜鈴酸類中藥材的樣品測(cè)定采用上述最優(yōu)的提取方法，分別進(jìn)行提取，并制成供試品溶液，重復(fù)測(cè)定5次計(jì)算出待測(cè)藥材中馬兜鈴總酸含量的平均值，以完成精密度試驗(yàn)；同時(shí)進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，驗(yàn)證方法的重復(fù)性是否良好；進(jìn)行加樣回收率試驗(yàn)，測(cè)出其平均回收率；在第0、2、6、12、24h測(cè)定含量的平均值，驗(yàn)證其穩(wěn)定性。試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果中，不同產(chǎn)地的含馬兜鈴酸類中藥材的馬兜鈴總酸含量為0.164%-0.734%，其中青木香的總酸含量為0.563%，馬兜鈴的總酸含量0.527%，關(guān)木通的總酸含量0.734%，遼細(xì)辛的總酸含量0.164%。

三、討論

本次試驗(yàn)采用紫外分光光度法，對(duì)不同地區(qū)市售的幾種含馬兜鈴酸類中藥材的馬兜鈴總酸含量進(jìn)行測(cè)定，以指導(dǎo)臨床治療中馬兜鈴酸類中藥材的應(yīng)用。本次測(cè)定的藥材包括江蘇等地的青木香、陜西等地的馬兜鈴、吉林等地的關(guān)木通、東北等地的遼細(xì)辛。測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地的含馬兜鈴酸類中藥材的馬兜鈴總酸含量介于0.164%-0.734%之間，其中關(guān)木通的總酸含量最高，達(dá)到0.734%，遼細(xì)辛的總酸含量最低，為0.164%。

紫外分光光度法是一種較為常用的定量測(cè)定方法，定量測(cè)定時(shí)，在最大的吸收波長(zhǎng)處，對(duì)一定濃度的樣品溶液的吸光度進(jìn)行測(cè)量，并與待測(cè)溶液的吸光度進(jìn)行比較，從而計(jì)算出待測(cè)溶液的濃度。此外，也可以采用吸收系數(shù)法求算。本次試驗(yàn)所用的紫外分光光度計(jì)，是根據(jù)待測(cè)物質(zhì)的吸收光譜，對(duì)其結(jié)構(gòu)、成分以及物質(zhì)之間的相互作用進(jìn)行研究的有效手段。紫外分光光度計(jì)的自動(dòng)化程度較高，應(yīng)用更加開(kāi)放靈活，具有較強(qiáng)的兼容性，操作簡(jiǎn)單，便于維護(hù)，因而具有較高的效率。基于本文所述的方法測(cè)定含馬兜鈴酸類中藥材馬兜鈴總酸的含量，能夠迅速得到準(zhǔn)確的結(jié)果，從而為臨床的應(yīng)用提供相應(yīng)的數(shù)據(jù)參考。

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