顱腦創(chuàng)傷血清標(biāo)志物miR—124的表達及其意義的研究

毛劍

【摘要】 目的：研究顱腦創(chuàng)傷血清標(biāo)志物miR-124（腦組織特異性的miRNA-124）的表達及其意義。方法：選取2014年11月-2015年6月本院接診的顱腦創(chuàng)傷患者38例為研究組，另選38例正常人為正常組。研究組采取積極的手術(shù)治療，正常組不予以任何治療措施。比較兩組miR-124、白細胞介素10（IL-10）、調(diào)節(jié)性T細胞（Treg細胞）的表達水平及治療前格拉斯哥昏迷量表（GCS）評分、預(yù)后格拉斯哥結(jié)局評分（GOS）。結(jié)果：入院4、24 h，研究組miR-124、IL-10水平和Treg細胞比例均顯著高于正常組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；研究組治療前GCS評分明顯低于正常組（P<0.05）；兩組預(yù)后GOS評分和miR-124表達水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：血清標(biāo)志物miR-124與顱腦創(chuàng)傷診斷和預(yù)后有一定的關(guān)系，其能夠幫助臨床醫(yī)師開展個體化治療和早期更精確地估計預(yù)后，值得在臨床大力推廣。

【關(guān)鍵詞】 顱腦創(chuàng)傷； 血清標(biāo)志物； miR-124

【Abstract】 Objective：To study the expression and significance of serum marker miR-124 （brain specific miRNA-124） in patients with traumatic brain injury.Method：A total of 38 patients with craniocerebral trauma admitted to our hospital from November 2014 to June 2015 were selected as study group，and another 38 normal people were selected as normal group.The study group received active surgical treatment，while normal group did not receive any treatment.The expression level of miR-124，interleukin 10（IL-10），regulatory T cells（Treg cells） and the scores of the lasto Coma Scale（GCS） before treatment and the prognosis of Glasgow outcome score（GOS） between two groups were compared.Result：After admission 4 and 24 h，the levels of miR-124，IL-10 and Treg cell proportions in study group were significantly higher than those of normal group（P<0.05）.The GCS score of study group before treatment was significantly lower than that of normal group（P<0.05）.The prognosis of GOS and miR-124 expression level between two groups were compared，the differences were not statistically significant（P>0.05）.Conclusion：Serum marker miR-124 has a certain relationship with the prognosis of traumatic brain injury，which can help clinicians carry out individualized treatment and early accurate estimation of prognosis，it is worth popularizing in clinical practice.

【Key words】 Craniocerebral trauma； Serum markers； miR-124

First-authors address：No.184 Hospital，Yingtan 335000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.20.025

顱腦外傷是神經(jīng)外科的多發(fā)疾病，改善預(yù)后是一切醫(yī)療活動的核心和最終目標(biāo)，早期判斷顱腦創(chuàng)傷病情嚴(yán)重性，對預(yù)后進行估計并給予合適的個體化治療對重型顱腦創(chuàng)傷患者至關(guān)重要[1-2]。目前臨床上常用的患者預(yù)后估計工具主要包括臨床指標(biāo)（GCS評分、并發(fā)癥、瞳孔變化等）、影像學(xué)資料（CT、MR等）和顱內(nèi)壓變化等[3]。盡管這些工具給顱腦創(chuàng)傷救治工作帶來了很大改善，但其本身亦存在各種局限性，如難以從病理生理學(xué)角度判斷腦損傷程度、對病情嚴(yán)重性定量程度不足、容易受各種臨床因素如醉酒、鎮(zhèn)靜和肌肉松弛藥物的影響[4]。因此，急需一種新的預(yù)后預(yù)測和分級方法，能夠在顱腦創(chuàng)傷急性期對預(yù)后進行充分定量，并且穩(wěn)定性高，能夠直接反應(yīng)腦損傷病理生理學(xué)變化，幫助臨床醫(yī)師開展個體化治療和早期更精確地估計預(yù)后。研究表明，顱腦損傷后機體可應(yīng)激產(chǎn)生一系列的炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答，形成“瀑布效應(yīng)”進一步加重腦損傷[5]。miR-124（腦組織特異性的miRNA-124）在神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究較多，在腦缺血中表達上調(diào)，并且和膠質(zhì)瘤、阿爾茨海默病的發(fā)生發(fā)展有一定關(guān)系[6]，且研究發(fā)現(xiàn)心肺復(fù)蘇后血清miR-124的表達明顯升高，并與顱腦損傷的程度有一定關(guān)系，還可參與調(diào)解免疫反應(yīng)[7]。因此本研究選取本院接診的38例顱腦創(chuàng)傷患者和38例正常人作為對比，研究顱腦創(chuàng)傷血清標(biāo)志物miR-124的表達及其意義。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年11月-2015年6月本院接診的顱腦創(chuàng)傷患者38例為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：有明確頭部外傷史；年齡18～75歲；格拉斯哥昏迷量表（GCS）評分3～15分[8]；經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，且患者或家屬自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：曾經(jīng)損傷過腦顱的患者；患有肝腎功能不全，缺血性心臟病，甲狀腺功能異常，2型糖尿病的患者；臨床資料不完全患者等。另選38例正常人（醫(yī)院體檢的健康成年人）為正常組。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 （1）miR-124的檢測：入院4、24 h，抽取兩組靜脈血，肝素抗凝，利用熒光定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)（RT-PCR）測定外周血中單個核細胞中miR-124表達量，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算miR-124表達量。（2）白細胞介素（IL-10）的檢測：將已分離的血漿標(biāo)本從冰箱取出置于室溫下，待溶解后離心取上清液，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELIAS）檢測血清中IL-10的含量。（3）Treg細胞的檢測：利用購自美國BD公司流式細胞儀檢測Treg細胞，并采用Cellquest Pro軟件進行分析。

1.2.2 治療方法 參考顱腦創(chuàng)傷臨床救治指南（第3版）[9]，對顱腦創(chuàng)傷患者應(yīng)采取積極的手術(shù)治療；正常組不予以任何治療措施。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) （1）比較兩組入院4、24 h的miR-124、IL-10水平和Treg細胞比例。（2）患者病情及預(yù)后評估，采用格拉斯哥結(jié)局評分（GOS）評估治療15 d后的預(yù)后情況。其中5分：總體痊愈良好，有些小的殘疾，能夠恢復(fù)正常生活；4分：中度殘疾，但尚可獨立生活，可以在保護下工作；3分：嚴(yán)重殘疾，日常生活不能獨立，需要別人照顧；2分長期持續(xù)的植物生存狀態(tài)，存在眼部的活動和睡眠周期；1分：死亡[10]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 18.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，組內(nèi)比較采用配對t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較 兩組年齡、性別比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

2.2 兩組入院4、24 h的miR-124、IL-10水平和Treg細胞比 例比較 入院4、24 h，研究組miR-124、IL-10水平和Treg細胞比例均顯著高于正常組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3 兩組GCS、預(yù)后GOS評分及miR-124比較 研究組治療前GCS評分明顯低于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；研究組治療15 d后，兩組預(yù)后GOS評分和miR-124表達水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

3 討論

顱腦外傷是外界暴力直接或間接作用于頭部所造成的損傷[11-12]。常見的腦外傷有頭皮裂傷、頭皮撕脫傷、頭皮血腫、顱骨骨折、腦震蕩、腦挫裂傷、顱內(nèi)血腫等。受傷后有不同程度的頭痛、嘔吐、視乳頭水腫及意識、思維、感覺、運動障礙。顱腦外傷病情復(fù)雜、變化快，病情嚴(yán)重性不易判斷[13]。故早期判斷顱腦創(chuàng)傷病情嚴(yán)重性，對預(yù)后進行估計并給予合適的個體化治療對重型顱腦創(chuàng)傷患者至關(guān)重要[14-15]。目前臨床上常用的患者預(yù)后估計工具主要包括臨床指標(biāo)（GCS評分、并發(fā)癥、瞳孔變化等）、影像學(xué)資料（CT、MR等）和顱內(nèi)壓變化等[16]。盡管這些工具給顱腦創(chuàng)傷救治工作帶來了很大改善，但其本身亦存在各種局限性，如難以從病理生理學(xué)角度判斷腦損傷程度、對病情嚴(yán)重性定量程度不足、容易受各種臨床因素如醉酒、鎮(zhèn)靜和肌肉松弛藥物的影響[17]。因此，急需一種新的預(yù)后預(yù)測和分級方法，能夠在顱腦創(chuàng)傷急性期對預(yù)后進行充分定量，并且穩(wěn)定性高，能夠直接反應(yīng)腦損傷病理生理學(xué)變化，幫助臨床醫(yī)師開展個體化治療和早期更精確地估計預(yù)后。世界關(guān)于miR-124的研究剛剛起步[18-19]，因此關(guān)于血清miR-124與顱腦創(chuàng)傷預(yù)后關(guān)系的研究具有創(chuàng)新性。

miRNAs是一類由20～25個核苷酸組成、具有調(diào)控功能且存在于真核細胞的內(nèi)源性非編碼RNA。其在機體內(nèi)的表達與代謝、個體發(fā)育、疾病進展等密切相關(guān)，而miR-124作為一種腦組織特異性miRNA，在顱腦損傷中其含量有明確改變[20]。生理狀態(tài)下，外周血中miR-124表達較低，但腦組織損傷時可反應(yīng)性的被釋放入血，增加其在血液中的濃度[21]。一方面，miR-124可通過對輔助T細胞（Th1/Th17）分化和活化T細胞分泌細胞因子的調(diào)控作用參與機體的免疫應(yīng)答[22]；另一方面，miR-124存在可調(diào)控AT1R及轉(zhuǎn)錄因子的靶基因，在改善內(nèi)皮細胞遷移期內(nèi)miR-124表達升高的過程中，可促進炎性因子和特異性抗體的釋放，對顱腦組織損傷有一定影響[23]。另外，miR-124若過度激活則可能造成免疫細胞的過度活化和促炎因子的爆發(fā)性釋放，進而加重顱腦損傷。Treg細胞通過分泌IL-10和轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β1）對免疫功能有增強和抑制的雙重作用，對維持細胞免疫平衡有不容忽視的作用[24]。此外，有學(xué)者研究表明，顱腦損傷患者miR-124升高，可促進Treg細胞增殖，從而使機體免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)均處于混亂的失衡狀態(tài)，不利于患者預(yù)后[25]。

因此，為了進一步研究顱腦創(chuàng)傷血清標(biāo)志物miR-124的表達及其意義，本研究選取本院接診的38例顱腦創(chuàng)傷患者和38例正常人進行研究，結(jié)果如下：入院4、24 h，研究組miR-124、IL-10水平和Treg細胞比例均顯著高于正常組，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），表明此3種指標(biāo)對顱腦創(chuàng)傷有一定診斷價值。研究組治療前GCS評分明顯低于正常組（P<0.05）；兩組預(yù)后GOS評分和miR-124表達水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。提示治療后研究組兩者表達水平與正常人相近。這充分說明血清標(biāo)志物miR-124作為一種新手段在顱腦創(chuàng)傷急性期對預(yù)后進行充分定量，并且穩(wěn)定性高，能夠直接反應(yīng)腦損傷病理生理學(xué)變化，幫助臨床醫(yī)師開展個體化治療和早期更精確地估計預(yù)后。

綜上所述，血清標(biāo)志物miR-124對顱腦創(chuàng)傷的診斷和預(yù)后有一定的關(guān)系，其能夠幫助臨床醫(yī)師開展個體化治療和早期更精確地估計預(yù)后，值得在臨床大力推廣。

參考文獻

[1]唐敏.顱腦外傷術(shù)后康復(fù)期心理狀態(tài)及其影響因素分析[J].實用臨床醫(yī)藥雜志，2015，19（2）：91-92.

[2]莊君燦，黃奇花，呂偉垣，等.急診綠色通道對顱腦外傷患者臨床療效的影響[J].實用醫(yī)學(xué)雜志，2015，31（3）：433-436.

[3]史立信，王清濤，臧穎卓，等.彌漫性軸索損傷的臨床及預(yù)后相關(guān)因素分析[J].神經(jīng)損傷與功能重建，2016，11（6）：551-552.

[4]武曉靈，喻莉，龍鼎.suPAR及D-二聚體對創(chuàng)傷性顱腦損傷患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的判斷價值[J].實用醫(yī)學(xué)雜志，2017，33（2）：234-237.

[5]魯增，龍振海.重組EPO輔助治療對重度顱腦損傷患者神經(jīng)功能恢復(fù)、炎癥反應(yīng)、紅細胞糖代謝的影響[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2017，23（2）：213-216.

[6]呂中華，譚春雷，王洪濱，等.miR-124調(diào)控SOS1表達及對U87膠質(zhì)瘤細胞增殖的影響[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2017，25（13）：2023-2026.

[7]董杰，韓輝.MicroRNA-124作為缺血性腦卒中標(biāo)志物的研究進展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2017，23（2）：244-248.

[8]李迪，王文志，孫海欣.腦出血臨床評估量表研究進展[J].中華老年心腦血管病雜志，2016，18（1）：103-105.

[9]江基堯，朱誠，羅其中.顱腦創(chuàng)傷臨床救治指南[M].3版.上海：第二軍醫(yī)大學(xué)出版社，2007：108-114.

[10]唐學(xué)柱，李智慧，劉長瑞.雙靶點軟通道微創(chuàng)對高血壓丘腦出血患者血腫清除率、腦積水緩解率及術(shù)后GOS評分的影響[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2017，16（15）：1528-1530.

[11] Matambemba D，Mugikura S，Nakagawa A，et al.Intraventricular Hemorrhage on Initial Computed Tomography as Marker of Diffuse Axonal Injury after Traumatic Brain Injury[J].J Neurotrauma，2015，32（5）：359-365.

[12] Zgaljardic D J，Seale G S，Schaefer L A，et al.Psychiatric Disease and Post-Acute Traumatic Brain Injury[J].J Neurotrauma，2015，32（23）：1911-1925.

[13]馬海，李楊，丘奕軍，等.延長垂直帶蒂下斜方肌皮瓣轉(zhuǎn)位修復(fù)巨大頭皮缺損并顱骨外露的臨床療效[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2015，37（22）：2307-2309.

[14]袁莉.鈉代謝紊亂對重型顱腦損傷患者病情及預(yù)后評價臨床應(yīng)用研究[J].中國實驗診斷學(xué)，2015，19（6）：903-905.

[15]蔣世雙，茍小紅，李丹，等.早期氣管切開對重型顱腦損傷患者預(yù)后影響的Meta分析[J].重慶醫(yī)學(xué)，2017，46（5）：654-657.

[16]張麗君，周昊，邱妮妮.早期彌漫性軸索損傷患者CT影像特點與預(yù)后危險因素分析[J].中國CT和MRI雜志，2017，15（9）：25-27.

[17]楊彥龍，常濤，羅濤，等.重型創(chuàng)傷性腦損傷救治多模態(tài)監(jiān)測的研究進展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2017，23（7）：1346-1349.

[18]鐘阿紅，許希中，余進進，等.miR-124在腫瘤研究中的進展[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2015，35（4）：531-535.

[19]孫孟坊，王豐，金孟浩，等.miR-124修飾的骨髓間充質(zhì)干細胞對大鼠脊髓損傷的作用研究[J].全科醫(yī)學(xué)臨床與教育，2017，15（4）：372-375.

[20]蘇鑫洪，葉玉勤，楊永祥，等.小鼠皮層神經(jīng)元機械損傷后miR-124的動態(tài)變化及意義[J].中華神經(jīng)外科疾病研究雜志，2017，16（3）：229-233.

[21]周貴勤，陳新壽，師寧，等.顱腦損傷患者外周血miRNA-124與Treg細胞和IL-10表達的關(guān)系[J].神經(jīng)損傷與功能重建，2016，11（6）：518-520.

[22]譚輝，王鍵，尹婷婷，等.益氣活血方基于miR-124調(diào)控Wnt通路促進神經(jīng)再生[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2017，37（8）：1047-1053.

[23]魏川江，劉嫻，王策，等.miR-221在腦膠質(zhì)瘤中的表達及調(diào)控關(guān)系[J].中國臨床神經(jīng)外科雜志，2017，22（7）：463-466.

[24]呼鐵民，齊寶柱，田甜，等.人腦膠質(zhì)瘤中ADAM17、EGFR和CD4+CD25+Treg的表達及免疫調(diào)節(jié)機制[J].中國老年學(xué)雜志，2017，37（20）：5063-5065.

[25]李嘉民，張笑娣.丁苯酞注射液對PCI患者的臨床療效評價及對CECs和CD4+CD25+Treg細胞水平的影響[J].貴州醫(yī)藥，2017，41（6）：594-596.

（收稿日期：2018-03-27） （本文編輯：董悅）