D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀臨床性能評(píng)價(jià)

陳 娟 吳志成* 楊恒歌 賴小婷

在臨床中C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)與白細(xì)胞聯(lián)合檢測(cè)應(yīng)用廣泛，但同時(shí)檢測(cè)血常規(guī)及全血CRP的一體機(jī)目前較為少見(jiàn)[1]。D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀能夠進(jìn)行全血細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞5分類和CRP測(cè)定。該儀器采用庫(kù)爾特原理檢測(cè)紅細(xì)胞(red blood cell，RBC)、血小板(platelet，PLT)的數(shù)目和體積分布，采用半導(dǎo)體激光流式技術(shù)測(cè)量白細(xì)胞總數(shù)(white blood cell，WBC)并對(duì)其進(jìn)行分類。采用免疫散射比濁法進(jìn)行CRP檢測(cè)，并根據(jù)樣本中血細(xì)胞壓積結(jié)果對(duì)CRP結(jié)果進(jìn)行修正。該儀器有多種進(jìn)樣方式，既可以自動(dòng)也可以手動(dòng)，既可以采用靜脈血也可以用末梢血進(jìn)行測(cè)量，血量少時(shí)還可以用微量稀釋再測(cè)定，適合于那些很難采到血液樣本的患者，且操作維護(hù)簡(jiǎn)單。根據(jù)“全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程”和實(shí)驗(yàn)室對(duì)血細(xì)胞分析儀的基本要求，本研究對(duì)D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀主要性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，并與日本XN-9000型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行比對(duì)實(shí)驗(yàn)，檢驗(yàn)其是否符合國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T406-2012)以及實(shí)驗(yàn)室高效檢驗(yàn)的要求。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)樣本

選取北京大學(xué)深圳醫(yī)院門診檢驗(yàn)科2017年10月至2018年1月就診的47例門診患者的47份血樣標(biāo)本，采集其含乙二胺四乙酸抗凝血1.5～2.0 ml備用，所有樣本均在4 h內(nèi)檢測(cè)完畢。

1.2 儀器與試劑

(1)D7-CRP全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(深圳帝邁公司)及其原裝配套試劑：①LYA-1。批號(hào)為20170619，效期為20190618；②LYA-2。批號(hào)為20170624，效期為20190623；③LYA-3。批號(hào)為20170615，效期為20190614；④DIL-A。批號(hào)為20171017，效期為20191016；⑤CRP-R1。批號(hào)為20180801，效期為20190731；⑥CRP-R2。批號(hào)為20180801，效期為20190731。

(2)XN-9000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(日本Sysmex公司)及原裝配套試劑、質(zhì)控品及校準(zhǔn)品。

(3)血球及CRP質(zhì)控品：①血球。批號(hào)為E5125-02，效期為2018-1-10；②CRP。批號(hào)為463LPC，效期為2018-6-28，Randox提供。

(4)校準(zhǔn)品。批號(hào)為PLUS1117，效期為2017-12-5。

(5)線性評(píng)價(jià)物。批號(hào)為CL123，效期為2017-11-25，美國(guó)R&D Systems提供，均在有效期內(nèi)使用。

1.3 檢測(cè)方法

根據(jù)國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T406-2012)“臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求”進(jìn)行操作，對(duì)D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的WBC、RBC、血紅蛋白(hemoglobin，HGB)、紅細(xì)胞平均體積(mean corpuscular volume，MCV)、PLT的本底計(jì)數(shù)、攜帶污染率、批內(nèi)/日間精密度、線性、正確度、不同吸樣模式的結(jié)果可比性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的結(jié)果可比性和準(zhǔn)確度以及CRP的本底計(jì)數(shù)、攜帶污染率、精密度等方面進(jìn)行評(píng)價(jià)。所有操作均嚴(yán)格按照“全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程”[2]的要求，判斷標(biāo)準(zhǔn)參考國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T406-2012)[3]。

1.4 檢測(cè)與評(píng)價(jià)指標(biāo)

(1)空白計(jì)數(shù)。用稀釋液作為樣本在分析儀上連續(xù)檢測(cè)3次，3次檢測(cè)結(jié)果的最大值應(yīng)在允許范圍內(nèi)。

(2)攜帶污染率[4]。分別針對(duì)不同檢測(cè)項(xiàng)目，取一份高濃度的臨床樣本(EDTA-K2或EDTA-K3抗凝靜脈血)，混合均勻后連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為H1、H2及H3；再取一份低濃度的臨床樣本，混合均勻后連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為L(zhǎng)1、L2及L3。其攜帶污染率計(jì)算為公式1：

(3)高值樣本要求。①WBC＞90.0×109/L；②RBC＞6.20×1012/L；③HGB＞220 g/L；④PLT＞900×109/L。

(4)低值樣本要求。0＜WBC＜3.0×109/L，0＜RBC＜1.50×1012/L，0＜HGB＜50 g/L，0＜PLT＜30×109/L。

(5)精密度。①批內(nèi)精密度：取1份濃度水平在[WBC：(4.0～10.0)×109/L、RBC：(3.5～5.5)×1012/L、HGB：(110～160)g/L、HCT：(35～55)%、MCV：(80～100)fl、MCH：(27～34)pg、MCHC：(320～360)g/L、PLT：(100～300)×109/L]的臨床樣本，按常規(guī)方法重復(fù)檢測(cè)11次，計(jì)算后10次檢測(cè)結(jié)果和算術(shù)平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，計(jì)算變異系數(shù)；②日間精密度：取同批號(hào)高、中、低3個(gè)水平的質(zhì)控品，連續(xù)檢測(cè)20 d，每份標(biāo)本在檢測(cè)當(dāng)日至少進(jìn)行1次室內(nèi)質(zhì)控，剔除失控?cái)?shù)據(jù)(失控結(jié)果已得到糾正)逐項(xiàng)計(jì)算20 d內(nèi)檢測(cè)結(jié)果的變異系數(shù)。

(6)線性。分別使用濃縮及稀釋的方法獲得接近檢測(cè)上限(廠商制定)的高值樣本，及略高于檢出限的低值樣本，根據(jù)臨床常見(jiàn)值確定線性驗(yàn)證的濃度系列，配制不同濃度的樣本，每份樣本重復(fù)檢測(cè)3次，計(jì)算平均值，將實(shí)測(cè)值(Y)與理論值(X)作比較，計(jì)算Y=aX+b，驗(yàn)證線性范圍應(yīng)符合美國(guó)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(The Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)的EP6文件要求[5]：a值在1.00±0.05范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)≥0.975。

(7)正確度。選擇10份檢測(cè)結(jié)果在參考區(qū)間內(nèi)的健康體檢者的新鮮血樣本，每份樣本檢測(cè)2次，以實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部規(guī)范操作檢測(cè)系統(tǒng)(XN-9000儀器檢測(cè)系統(tǒng))為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，分別計(jì)算D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀和XN-9000型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀2種儀器所有檢測(cè)結(jié)果的均值，以XN-9000型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)均值為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算偏倚。

(8)不同吸樣模式的結(jié)果可比性[6]。每次校準(zhǔn)后，取5份臨床樣本分別使用不同模式進(jìn)行檢測(cè)，每份樣本各檢測(cè)2次，以開放模式為標(biāo)準(zhǔn)，分別計(jì)算不同模式下檢測(cè)結(jié)果均值間的相對(duì)差異[7]。

(9)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的結(jié)果可比性。選取20份臨床新鮮全血樣本，分別在D7-CRP型和XN-9000型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢測(cè)。XN-9000型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀已校準(zhǔn)，并參加國(guó)家臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量控制，所有室間質(zhì)量控制結(jié)果均在控，評(píng)價(jià)方案和標(biāo)準(zhǔn)參照原衛(wèi)生部2012版“臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求”和CLSI批準(zhǔn)的EP9-A2文件[8]計(jì)算D7-CRP型與XN-9000型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀之間的相對(duì)偏差。要求20份標(biāo)本中16份滿足此標(biāo)準(zhǔn)為比對(duì)合格[9]。具體要求：①WBC偏差≤±7.5%(當(dāng)WBC＜2×109/L時(shí)，其偏差≤±10.0%)；②RBC偏差≤±3.0%；③HGB偏差≤±3.5%；④HCT偏差≤±3.5%；⑤MCV偏差≤±3.5%；⑥PLT偏差≤±12.5%(當(dāng)PLT＜40×109/L時(shí)，其偏差≤±10.5%)。

(10)準(zhǔn)確度。取5份定值臨床樣本分別進(jìn)行單次檢測(cè)，定值臨床樣本由XN-9000型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀上檢測(cè)所得。XN-9000型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀已校準(zhǔn)，并參加國(guó)家臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量控制，所有室間質(zhì)量控制結(jié)果均在控。計(jì)算每份樣本檢測(cè)結(jié)果與靶值的相對(duì)偏差，每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的相對(duì)偏差符合下述要求的比例應(yīng)≥80%，相對(duì)偏差=(檢測(cè)結(jié)果-靶值)÷靶值×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

檢測(cè)所得數(shù)據(jù)均使用Microsoft Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，線性范圍評(píng)價(jià)試驗(yàn)的相關(guān)性采用線性回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 本底計(jì)數(shù)檢測(cè)

對(duì)D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀使用稀釋液作為樣本連續(xù)檢測(cè)3次，WBC、RBC、HGB及PLT本底結(jié)果滿足國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T406-2012)的要求；CRP的本底結(jié)果均為0.0 mg/L，滿足企業(yè)要求，見(jiàn)表1。

2.2 攜帶污染率檢測(cè)

按檢測(cè)方法要求，對(duì)D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀分別使用滿足要求的樣本測(cè)試，WBC、RBC及PLT計(jì)數(shù)及HGB的攜帶污染率分別為0.03%、0.26%、0.11%和0.0%，滿足國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T406-2012)的要求；CRP攜帶污染率滿足企業(yè)要求，見(jiàn)表2。

表1 本底計(jì)數(shù)評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果

2.3 精密度檢測(cè)

2.3.1 批內(nèi)精密度

按檢測(cè)方法要求，對(duì)D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀使用符合要求的樣本測(cè)試，其結(jié)果見(jiàn)表3。其中，WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC及PLT的批內(nèi)精密度分別為1.65%、0.54%、0.51%、0.53%、0.17%、0.37%、0.42%以及1.96%，符合國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T 406-2012)的要求；CRP批內(nèi)精密度滿足企業(yè)要求。

表2 攜帶污染率評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果

表3 批內(nèi)精密度正常水平評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果

2.3.2 日間精密度

按前述檢測(cè)方法試驗(yàn)，對(duì)D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀使用質(zhì)控物連續(xù)20 d后，統(tǒng)計(jì)WBC、RBC、PLT、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC及PLT的低、中、高水平質(zhì)控物的日間精密度，均符合國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T406-2012)的要求；CRP日間精密度滿足企業(yè)要求，見(jiàn)表4。

2.4 線性檢測(cè)

按照線性檢測(cè)方法，D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀WBC的線性范圍為0.00～356.46×109/L、RBC的線性范圍為0.00～9.02×1012/L、HGB的線性范圍為0～263 g/L、HCT的線性范圍為0.0～91.3%、PLT的線性范圍為0～6166×109/L，均能滿足廠商的要求，相關(guān)系數(shù)r均≥0.975，符合國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T406-2012)的要求，見(jiàn)表5。

2.5 正確度檢測(cè)

按正確度檢測(cè)方法測(cè)試，對(duì)D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀驗(yàn)證檢測(cè)系統(tǒng)的正確度，WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC及PLT的偏倚分別為-0.66%、-1.61%、0.00%、-1.75%、-0.18%、1.66%、1.80%、0.08%，均符合國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T406-2012)的要求，見(jiàn)表6。

表4 日間精密度評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果

表5 線性評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果

表6 正確度評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果

表7 不同吸樣模式結(jié)果可比性評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果

表8 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)結(jié)果可比性試驗(yàn)評(píng)價(jià)結(jié)果

2.6 不同吸樣模式結(jié)果可比性

按不同吸樣模式檢測(cè)方法試驗(yàn)，對(duì)D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀以開放模式為標(biāo)準(zhǔn)，與自動(dòng)進(jìn)樣模式結(jié)果比對(duì)，WBC、RBC、HGB、HCT、MCV以及PLT的偏差均符合國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T406-2012)的要求，見(jiàn)表7。

2.7 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)結(jié)果可比性

按實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢測(cè)方法試驗(yàn)，D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的WBC、RBC、PLT計(jì)數(shù)，HGB、HCT、MCV、MCH及MCHC的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的結(jié)果可比性均符合國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T 406-2012)的要求，見(jiàn)表8。

2.8 準(zhǔn)確度檢測(cè)

按照準(zhǔn)確度檢測(cè)方法試驗(yàn)，D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的WBC、RBC、PLT計(jì)數(shù)，HGB、HCT、MCV、MCH及MCHC的準(zhǔn)確度均符合國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T406-2012)的要求，見(jiàn)表9。

3 討論

由于科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，臨床檢驗(yàn)設(shè)備越來(lái)越先進(jìn)，隨著技術(shù)的不斷引進(jìn)與吸收消化，國(guó)產(chǎn)大型醫(yī)療儀器設(shè)備的設(shè)計(jì)與制造日漸走向成熟，相信在不久的將來(lái)國(guó)產(chǎn)大型醫(yī)療設(shè)備一定會(huì)在世界上占有一席之地[10]。

表9 準(zhǔn)確度試驗(yàn)評(píng)價(jià)結(jié)果

本研究通過(guò)對(duì)D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀主要性能評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)，該儀器全血細(xì)胞計(jì)數(shù)與CRP檢測(cè)各參數(shù)空白試驗(yàn)良好，極低的攜帶污染率完全符合設(shè)計(jì)需求，精密度均小于規(guī)定的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)允許誤差。精密度試驗(yàn)表明儀器有較高重復(fù)性，能滿足臨床應(yīng)用的要求，通過(guò)與參加全省實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)的國(guó)外同類儀器比較均在行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，表明D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀具有良好的準(zhǔn)確性和可靠性[11]。

D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的主要性能達(dá)到國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(WS/T406-2012)規(guī)定的要求，能滿足血細(xì)胞檢測(cè)的一般需要。儀器總體設(shè)計(jì)合理、操作簡(jiǎn)單，具有高度自動(dòng)化和智能化，有較強(qiáng)的質(zhì)量控制功能，并有故障自檢功能，故障時(shí)可提示故障類型和相應(yīng)自動(dòng)處理措施，有較完善的保養(yǎng)功能，進(jìn)樣針和管道系統(tǒng)可自動(dòng)沖洗，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量保障起了重要的作用[12-13]。

D7-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀帶有20 μl微量血液預(yù)稀釋模式功能，可以滿足幼兒及其他特殊人群血常規(guī)檢查需求，是一款性能優(yōu)良的國(guó)產(chǎn)全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，可滿足臨床實(shí)驗(yàn)室的需要。