液基細胞學檢查在惡性胸腹水鑒別診斷中的臨床應(yīng)用

謝小林，劉家斌，張利

（江西省萍鄉(xiāng)市上栗縣人民醫(yī)院病理科，江西 萍鄉(xiāng) 337009）

惡性胸腹水是指由于全身或胸腹腔內(nèi)的癌變或惡性腫瘤病變，引起胸腔、腹腔臟層和壁層的胸膜或腹膜發(fā)生大小范圍不確定的彌漫性病變，導致體腔內(nèi)液體異常增多的現(xiàn)象。液基細胞學是脫落細胞學的一部分，是把按傳統(tǒng)方式難以處理的脫落細胞學標本放入一種中介的液體中去，以去除血液、黏液等影響診斷的干擾成分，達到提高診斷率的目的。中介的液體被稱為細胞保存液，具有保持細胞形態(tài)、軟化黏液、處理紅細胞等功能。有關(guān)實驗證明，液基細胞學在疑難胸腔積液鑒別診斷中有重要的臨床意義，能有效輔助細胞學鑒別肺腺癌細胞及間皮細胞，值得推廣應(yīng)用[1]。經(jīng)過多年的實踐證明，液基細胞學在胸腹水標本的制片質(zhì)量和制片滿意度方面優(yōu)于傳統(tǒng)涂片細胞學，對惡性胸腹水的診斷陽性率略高于傳統(tǒng)細胞學[2]。胸腹水取樣結(jié)果情況不一，因此必須做一些前期處理，臨床送檢的胸腹水應(yīng)盡快離心放入保存液中。本研究的目的是探討液基細胞學在檢查惡性胸腹水鑒別診斷中的臨床應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 本研究選取2017年1月～2017年12月本院內(nèi)科收治的69例患者，按照隨機標準分為觀察組和對照組，觀察組35例，對照組34例。其中觀察組的35例中男16例，女19例；年齡19～53歲，平均（33±6.8）歲；病程3～12年，平均病程（4.1±1.9）年；輕度21例，重度14例；病變部位：胸水13例，腹水22例；對照組34例中男20例，女14例；年齡20～55歲，平均（32±3.9）歲；病程10個月～8年，平均病程（4.3±1.7）年；輕度10例，重度24例；病變部位：胸水19例，全結(jié)腸15例。兩組患者性別、年齡、病程、病情、病變部位等資料比較差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。診斷標準：根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)，影像學檢查，液體生化檢查及病理學檢查聯(lián)合診斷。

1.2 納入標準及排除標準 納入標準：①選取69例患者均根據(jù)上條診斷標準確診為惡性胸腹水；②為排除年齡因素影響，患者年齡應(yīng)控制在19～55歲范圍內(nèi)；③患者及家屬對參與此項研究知情并同意；④本院對此研究知情并同意。排除標準：①不符合診斷標準的患者；②年齡＜19歲或者＞55歲者；③腹膜假性黏液瘤、柏查氏綜合征、宮頸原位癌、卵巢癌者等；④有嚴重并發(fā)癥如腸梗阻、腸穿孔、中毒性巨結(jié)腸者；⑤妊娠或哺乳期婦女；⑥對研究中所用藥物過敏者；⑦有嚴重的心、肺、腹基礎(chǔ)疾病者；⑧重度及難治性患者；⑨有精神疾患不能配合治療者[3]。

1.3 標本取材 對照組進行傳統(tǒng)細胞學檢查，觀察組進行液基細胞學檢查，液基細胞學檢查具體步驟如下。

1.3.1 標本前期處理 ①若標本液量較多，將液體靜置30 min左右，用吸管吸取底部沉淀12 ml進行離心（2 000轉(zhuǎn)/min，10 min）。離心后若細胞沉淀較多，吸取上清棄之，將底部沉淀放入保存液中，混勻；若沉淀較少則棄上清液后保留沉淀，再吸取約12 ml離心，直至得到較多的細胞沉淀，再放入保存液。②血性標本：離心后若得到較多的紅色沉淀，則用吸管小心吸去上清液后，取中間層的沉淀放入保存液中，重復多次，直至收集較多的細胞沉淀為止。

泰普液基沉降式細胞學制片染色技術(shù)（手工型）是在巴氏涂片基礎(chǔ)上進一步獨立改良技術(shù)之一，采用先進的自然沉降技術(shù)及特制高粘附力玻片，根據(jù)人體不同類型細胞比重不同，病變細胞核異質(zhì)、比重大、沉降速度快的特點，優(yōu)先捕獲病變細胞及有效成分。保存液中的細胞經(jīng)處理,有效去除黏液、血液與炎癥細胞等干擾物質(zhì)，制得的薄層細胞涂片效果清晰鮮艷，細胞分布均勻集中，重疊少，細胞結(jié)構(gòu)保存良好，細胞與染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)清晰，克服了常規(guī)巴氏涂片所帶來的因制片質(zhì)量差及取材時細胞的丟失等所帶來的假陰性問題。

1.3.2 產(chǎn)品特點 ①先進的細胞保存配方，標本有效保存至少1個月；②獨特的玻片粘附配方，細胞數(shù)量充足；③梯度離心和自然沉降制片技術(shù)，背景干凈，細胞單層均勻平鋪；④全自動完成制片和染色過程，24～48片/h；⑤獨立染色室染色，一個標本可重復制片3～10張；⑥HE和巴氏染色組合，滿足不同客戶需求。

1.3.3 產(chǎn)品優(yōu)勢

（1）實現(xiàn)標本較為長期保存，使得胸腹水脫落細胞學檢測技術(shù)在普查中運用成為可能。

（2）制片技術(shù)的改進：①及時固定標本，100%收集采集到的細胞，有效截留有診斷價值細胞成分；②特有的薄層制片技術(shù)：細胞分布均勻，重疊較少且三維立體感明顯，“二次分層”比重大的癌細胞更容易沉淀而被發(fā)現(xiàn)，提高了發(fā)現(xiàn)癌細胞的機率；③制片效率高，一次可制片24張，染色更均勻鮮艷。HE和巴氏染色液組合，滿足不同客戶需求。④涂膜面積明顯縮小，降低了因病理醫(yī)師視眼疲勞產(chǎn)生漏診的現(xiàn)象，大大提高了工作效率。全自動沉降式制片染色系統(tǒng)在宮頸病變診斷中,具有制片省時，節(jié)約勞力，染色鮮明，細胞核結(jié)構(gòu)清晰等特點，為宮頸病變的診斷提供了良好的方法，聯(lián)合為患者進行陰鏡活檢可提高診斷的準確性，從而有效地預防宮頸癌的惡化[4]?；谏鲜鰞?yōu)勢，胸腹水沉降式液基薄層細胞制片染色技術(shù)（手工型）對于原發(fā)性間皮瘤和轉(zhuǎn)移癌的診斷效果明顯，為正確鑒別良性與惡性腫瘤提供更有效的診斷依據(jù)。

1.3.4 適用范圍 用于醫(yī)療機構(gòu)、醫(yī)學研究部門對宮頸細胞、呼吸道脫落細胞、漿膜腔積液等人體標本的制片染色。漿膜腔積液：胸水、腹水、腦積液、心包積液、尿液、羊水等。

1.4 方法 目前應(yīng)用較廣的兩種液基細胞學檢查法是全自動沉降式液基薄層制片系統(tǒng)和膜式液基薄層制片系統(tǒng)，兩種方法的區(qū)別見表1，本實驗的觀察組采取的是膜式液基薄層制片系統(tǒng)法。

表1 沉降式與膜式制片比較Table 1 Comparison between sedimentation and membrane production

1.5 統(tǒng)計學方法 本研究數(shù)據(jù)均用SPSS 14.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料采用“±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法的滿意度及準確度比較 檢查前兩組患者在性別、年齡、病程、病情、病變部位的比較差異無統(tǒng)計學意義，檢查結(jié)果的滿意度比較差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而準確度比較差異無統(tǒng)計學意義，見表2。

表2 兩種方法的滿意度及準確度差異Table 2 Satisfaction and accuracy differences between the two methods

2.2 不良反應(yīng) 無明顯不良反應(yīng)。

3 討論

近年來，一種新型的國際上最先進的“液基薄層細胞學”檢測技術(shù)得以應(yīng)用，一開始此檢查只用于宮頸細胞學篩查，但由于其還能發(fā)現(xiàn)癌前病變，微生物感染，如霉菌、滴蟲、衣原體等且患病異常細胞檢出率幾乎接近100%，所以也被應(yīng)用于：胸腹水，穿刺液，痰液標本等脫落細胞學標本，典型應(yīng)用為宮頸刮片。液基細胞學優(yōu)點：①使用專用宮頸細胞刷取材，取材全面；②去掉了血液，黏液等雜質(zhì)；③細胞無重疊現(xiàn)象，因此診斷率高。細胞薄層技術(shù)能夠提高被檢胸腹水的涂片質(zhì)量，大大提高了惡性細胞的檢出率，為臨床治療提供了可靠的診斷依據(jù)[5]。液基細胞學檢查的技術(shù)原理是通過標本采集、細胞混勻、細胞負壓過濾膜采集、細胞轉(zhuǎn)移四個步驟，制成薄層的玻片。經(jīng)HE染色，在光鏡下即可進行閱片診斷。采用液基薄層細胞學技術(shù)檢測胸腹水可獲高質(zhì)量涂片,能大大提高惡性細胞診斷率，且癌細胞分類更容易，更能為臨床治療提供可靠的診斷依據(jù)[6]。

漿膜腔包含體的胸腔、腹腔和心包腔。生理狀態(tài)下，正常人的這些腔隙內(nèi)都存在有少量液體。生理狀態(tài)下，這些腔隙內(nèi)液體一般采集不到；但是在病理狀態(tài)下，液體的產(chǎn)生、吸收平衡被打破，過多的液體將積存于體腔中，就會出現(xiàn)胸腹水。惡性胸腹水引起心臟壓迫、呼吸困難、胸痛、胸悶、腹脹等許多不適癥狀。以胸腔積液為例，運用液基細胞薄層涂片檢測（TCT）法及傳統(tǒng)手工細胞學涂片法進行細胞學檢測，檢測結(jié)果以病理活組織檢查為標準：兩種方法對腺癌、鱗狀細胞癌、小細胞癌的檢出率比較，液基細胞薄層涂片檢測明顯高些。所以得出結(jié)論液基細胞學檢測技術(shù)在胸腔積液細胞學診斷中具有較高的病變檢出率，尤其對惡性腫瘤的檢出率具有重要臨床診斷價值[7]。惡性胸水在晚期肺癌中常見，發(fā)生率高達60%，常呈進行性增多；而惡性腹水則以婦科腫瘤，消化道腫瘤和肝癌多見，同樣以血性腹水為主。由于液基細胞學的典型應(yīng)用即為宮頸刮片，而惡性腹水在婦科腫瘤中多發(fā)，即多為子宮疾病，TCT取材更加科學合理，檢查結(jié)果更加清晰準確，且損傷小、陽性率高，可重復進行檢查，是當前進行宮頸病變篩查的主要手段[8]。對于肺癌引起的惡性胸水，聯(lián)合運用液基細胞學和細胞塊免疫組化檢測較單一檢測方法對肺癌診斷具有更高的靈敏度和準確性，利于肺癌早期診斷的進行[9]。通過痰液標本檢測肺癌細胞，液基細胞學要好于傳統(tǒng)涂片法，具有明顯的優(yōu)越性；兩者聯(lián)用可提高肺癌的檢出率，值得臨床大力推廣[10]。

綜上所述，液基細胞學檢查法相比于傳統(tǒng)細胞學檢查法制片滿意度高，患病細胞檢出率也高，優(yōu)勢明顯。在惡性胸腹水鑒別診斷結(jié)果的臨床應(yīng)用方面已得到確認，值得臨床大力推廣。