• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    磁小體介導(dǎo)的生物傳感器研究進展

    2018-10-26 02:12:16李舒婷周子琦田杰生許文濤
    生物技術(shù)通報 2018年9期
    關(guān)鍵詞:磁性探針抗原

    李舒婷 周子琦 田杰生 許文濤

    (1. 北京食品營養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院,北京 100083;2. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)生物學(xué)院,北京 100083)

    磁小體(Bacterial magnetosomes,BMs)是由趨磁細菌(Magnetotactic bacteria,MTB)合成的用于在其水生棲息地中進行地磁導(dǎo)航的專用細胞器。細菌磁小體的合成是通過高度控制磁性晶體的生物礦化來實現(xiàn)的。BMs由生物膜包裹的納米晶體組成,納米晶體大多數(shù)為磁鐵礦(Fe3O4),較少數(shù)的為硫復(fù)鐵礦(Fe3S4)[1]。BMs在細菌細胞中成鏈狀排列,增加了細菌細胞的磁偶極矩[2]。BMs表面帶負電荷,可以很容易的被其他功能活性基團修飾[3]。BMs粒徑分布在35-120 nm之間[4],是單磁疇納米粒子[5],具有順磁性[6]。此外,其還具有形態(tài)均勻[5]、比表面積大[7]及生物相容性高等特點[4]?;谶@些特性,科學(xué)家主要將其應(yīng)用于醫(yī)療領(lǐng)域,包括:核磁共振成像[8-9]、靶向藥物遞送[4]、腫瘤磁熱療[10]等。

    作為一種天然磁性納米材料,目前,基于BMs的生物傳感器相對較少,且不論是電化學(xué)生物傳感器還是熒光生物傳感器都主要通過在BMs表面共價或非共價修飾上抗體,利用抗原(靶物質(zhì))抗體之間的特異性免疫反應(yīng)來達到檢測靶物質(zhì)的目的,檢測方法相對較單一。本文著重綜述了近些年來細菌磁小體介導(dǎo)的生物傳感器研究進展,旨為進一步研發(fā)該項技術(shù)及其應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)及提供技術(shù)支撐。

    1 磁小體的基本特性及特點

    1.1 磁小體的結(jié)構(gòu)及組成

    BMs由外部的膜和內(nèi)部的磁性納米晶體組成。BMs內(nèi)部的磁性納米晶體大多數(shù)為磁鐵礦(Fe3O4),較少數(shù)的為硫復(fù)鐵礦(Fe3S4)[1],磁鐵礦晶體形態(tài)根據(jù)提取它的細菌菌株而變化[2],有立方八面體型、子彈型及矩形[11]。此外,還有淚滴狀、薄片狀等。BMs的外層膜為脂質(zhì)雙層膜,與生物體內(nèi)的細胞膜系統(tǒng)相似,由98%脂質(zhì)和2%其他化合物組成,包括蛋白質(zhì);磷脂占總脂質(zhì)的58%,磷脂酰乙醇胺占總磷脂的50%。此外,一些蛋白質(zhì)還與磁小體的形成有關(guān)[5,12-13]。磁螺菌MS-1的磁小體膜中含有中性脂質(zhì)和游離脂肪酸,其中糖脂、硫脂和磷脂重量比為1∶4∶6,磷脂包括磷脂酰絲氨酸和磷脂酰乙醇氨基[4]。2014年,Xu等[14]在BMs表面檢測到超過200種蛋白質(zhì),其中有些是磁小體特有的。Mam C和Mam F是趨磁細菌MSR-1中磁小體膜上最豐富的蛋白質(zhì),是分別由125個氨基酸(12.4 kD)和111個氨基酸(12.3 kD)組成的小蛋白質(zhì)。相較于人工合成的磁性納米粒子,磁細菌產(chǎn)生的BMs具有非常完美的晶體結(jié)構(gòu),而且種類較多,很多研究者都將BMs作為理想晶形的標準[15]。

    1.2 磁小體的基本特性

    作為具有獨特結(jié)構(gòu)的天然磁性納米粒子,BMs具有多種特性。當(dāng)趨磁細菌在最佳條件下培養(yǎng)時,磁小體的粒徑分布窄且形態(tài)均勻。磁小體通常是大的單磁疇納米粒子,在生理溫度下具有熱穩(wěn)定的磁矩[5],并且磁鐵礦的磁矩比硫復(fù)鐵礦強得多[3]。另外,BMs還具有順磁性[6]及高生物相容性[4]。典型的BMs粒徑是在35-120 nm之間,然而在一些細菌中,也發(fā)現(xiàn)了大于200 nm的晶體[4]。但大部分的BMs表現(xiàn)出40-50 nm的尺寸分布[2]。小尺寸和完整的磁小體膜使BMs具有很大的表面積與體積比[7]。含有氨基殘基的磁小體膜覆蓋了每個BMs,可以利用交聯(lián)劑將蛋白質(zhì)固定在BMs表面[12]或通過羧基和氨基的反應(yīng)形成酰胺鍵修飾上其他功能活性基團。此外,Li等[16]從AMB-1菌株中提取出BMs并發(fā)現(xiàn)其具有固有的類過氧化物酶活性,可依賴這種活性清除活性氧,并且在可見光的照射下類過氧化物酶活性會增強。

    1.3 磁小體的毒性

    隨著磁小體在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的研究應(yīng)用,對磁小體進行毒性評估是必要的。Xiang等[17]評估了提取自磁螺菌MSR-1中的已經(jīng)純化和滅菌的BMs在體外對小鼠成纖維細胞的毒性,發(fā)現(xiàn)該BMs在體外對小鼠成纖維細胞沒有毒性。Sun等[18]檢測了BMs的急性毒性、免疫毒性和細胞毒性,確定了注射到SD大鼠舌下靜脈中BMs的LD50值是62.7 mg/kg。當(dāng)進一步注射40 mg/kg BMs時,在常規(guī)血液檢查結(jié)果,肝臟和腎臟功能測試,主要器官臟器指數(shù)或與ConA和/或LPS抗原結(jié)合的淋巴細胞刺激指數(shù)方面,BMs處理組和對照組大鼠之間沒有顯著差異;BMs處理大鼠的主要器官組織學(xué)檢查顯示除了肝中的空泡數(shù)量增加和肺中的小葉間隔稍厚外,沒有明顯的病理學(xué)變化。BMs對H22,HL60或EMT-6細胞幾乎沒有細胞毒性作用,用9 mg/mL BMs孵育時,3種細胞的生長都沒有被抑制也沒有被刺激,對DNA含量、細胞大小或細胞膜完整性也沒有影響。最近,Revathy等[19]在多種模型中對BMs的毒性進行了評估,其中包括人類紅細胞、白細胞、小鼠巨噬細胞系(J774)、洋蔥根尖和魚(Oreochromis mossambicus)。當(dāng)BMs濃度較低時,紅細胞和J774細胞沒有觀察到可檢測的形態(tài)改變,沒有檢測到白細胞的染色體畸變。此外,對魚也沒有毒性。他們得出結(jié)論,磁小體在較低濃度下是安全的,并且不會對生態(tài)系統(tǒng)造成任何潛在風(fēng)險。

    1.4 磁小體的提取和純化方法

    Erdal等[3]提到BMs的制備步驟較困難。在BMs提取和純化過程中一般都會輔助以超聲波加快BMs的分離。Chen等[7]利用超聲波破碎培養(yǎng)的磁螺菌MSR-1細菌細胞,然后再用Nd-Fe-B磁鐵對BMs進行富集,最后再純化得到BMs。Guo等[20]開發(fā)了一種新的快速連續(xù)程序,用于大規(guī)模提取和純化磁螺菌MSR-1細胞中的BMs。該程序主要包括4步:第一步,用高壓勻漿器破碎細菌細胞,直到超過90%被裂解,裂解率可通過顯微鏡進行測定;第二步,用持續(xù)磁力分離系統(tǒng)MIS并伴隨低功率超聲波處理和尿素處理分離BMs,直到廢棄物中的蛋白質(zhì)在280 nm的吸光度下檢測不到;第三步,用蛋白酶K去除被吸附的蛋白質(zhì)和表面蛋白質(zhì)并采用電洗脫去除核酸,直到檢測不到蛋白質(zhì)和核酸污染物;最后一步,用磁力攪拌系統(tǒng)中的蒸餾水代替緩沖液洗滌BMs。在冷凍干燥和用γ射線處理后,將純化的BMs保存在-20℃即可??梢酝ㄟ^采用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE)、聚合酶鏈式反應(yīng)(Polymerase chain reaction,PCR)和傅立葉變換紅外光譜對所得到的BMs的純度進行評價。Pi等[21]從一種可以容易地在常規(guī)實驗室或商業(yè)環(huán)境中孵育的MTB中提取出了15 nm大小的BMs。他們先將含有MTB的肉湯培養(yǎng)基進行離心,多次洗滌得到?jīng)]有細胞碎片的純沉淀物,再利用超聲波細胞破碎系統(tǒng)設(shè)置10 s超聲和3 s間隔,超聲破碎30 min以從MTB體中釋放BMs。

    1.5 磁小體形態(tài)結(jié)構(gòu)表征和組分元素分析

    對BMs形態(tài)結(jié)構(gòu)進行解析能夠便于研究者更好地利用BMs來進行實驗??梢酝ㄟ^掃描電鏡圖(Scanning electron microscope,SEM) 來 觀 察BMs[22]。透射電子顯微鏡(Transmission electron microscope,TEM)也可用于對BMs的結(jié)構(gòu)進行觀察,TEM提供了許多關(guān)于磁小體結(jié)構(gòu)的重要發(fā)現(xiàn)。Mann等[23]采用高分辨率透射電子顯微鏡(High resolution transmission electron microscopy,HRTEM)探究了從磁球菌細胞中分離的磁鐵礦顆粒。結(jié)果顯示顆粒具有與磁鐵礦結(jié)構(gòu)一致的晶格圖像,并且是單疇結(jié)構(gòu),具有高度的晶體完美性。Feng等[24]在研究Mms 6磁小體蛋白質(zhì)的整合自組裝以形成鐵應(yīng)答結(jié)構(gòu)時表示,Mms 6是來自磁螺菌菌株AMB-1的60個氨基酸的小蛋白質(zhì),其可以促進順磁磁鐵礦納米晶體的體外生長,在水溶液中組裝形成球形膠束可通過TEM可視化。但是,利用TEM進行觀察需要對生物樣品進行如固定、染色、脫水、包埋和薄切片等實驗操作,這些過程均可能會損害或改變生物標本的天然結(jié)構(gòu)。利用原子力顯微鏡(Atomic force microscope,AFM)觀察時,在樣品的光柵掃描期間,樣品的表面輪廓通過檢測樣品與AFM針頭之間的相互作用而成像。AFM能夠在接近原始的條件下以高信噪比使生物標本可視化,在分子分辨率下也能夠觀察到亞細胞大小的細菌細胞器的構(gòu)成[25]。Yamamoto等[25]應(yīng)用AFM來調(diào)查磁性螺旋菌AMB-1 中BMs的空間構(gòu)型。AFM觀察結(jié)果表明包裹在磁鐵礦晶體周圍的有機層的厚度大約為7 nm,并且BMs相關(guān)蛋白Mam A位于有機層的表面,BMs的最外層是由BMs相關(guān)蛋白的無定形層形成。將TEM與X射線能量色散譜(EDXS-TEM)結(jié)合能夠分析BMs的化學(xué)組分,空氣-乙炔火焰光譜能用來對元素進行分析[21]。

    2 磁小體用于靶物質(zhì)富集

    2.1 磁小體用于病原菌富集

    在BMs表面固定上抗體,通過抗原抗體反應(yīng)吸附病原菌,然后利用外部施加的磁場可實現(xiàn)病原菌的快速富集和分離。早在20世紀末,就有科學(xué)家利用BMs來對致病菌進行富集和檢測,Nakamura等[12]就用將異硫氰酸熒光素綴合的單克隆抗大腸桿菌抗體固定在細菌磁性顆粒BMs上用于高選擇性的富集和除去細菌懸浮液中的大腸桿菌。2010年,Li等[26]通過雙琥珀酰亞胺辛二酸酯鈉鹽(BS3)交聯(lián)劑將多克隆抗體與BMs表面上的氨基進行連接以形成功能磁性載體,并用于捕獲食品樣品中的沙門氏菌,利用外部的磁場實現(xiàn)樣品中沙門氏菌的富集與分離。2014年,Xu等[14]利用表面展示技術(shù)通過將葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal protein A,SPA)(一種來自金黃色葡萄球菌細胞壁的免疫球蛋白結(jié)合蛋白)與Mam C或Mam F這兩種BMs(來自趨磁細菌MSR-1)膜表面最多的蛋白質(zhì)進行融合,從而使SPA在BMs上大量表達。這種重組磁小體表面的SPA能夠與哺乳動物抗體(Abs)的Fc區(qū)自主裝。將得到的磁小體/抗體復(fù)合物用于捕獲富集致病菌,發(fā)現(xiàn)1 mg的復(fù)合物能夠捕獲多達1.74×107個副溶血性弧菌細胞。

    2.2 磁小體用于磷酸化肽富集

    不久前,Huang等[27]首次報道BMs可以直接將Zr4+和Fe3+吸附在其表面上不需要任何其他的修飾,這種吸附了金屬離子的表面對α-、β-和牛奶酪蛋白的胰蛋白酶消化物中的磷酸化肽具有選擇能力,可在30 s內(nèi)快速富集磷酸化肽。結(jié)果顯示每克BMs可以固定5.909×10-4moL的Fe3+和3.946×10-4moL的Zr4+,因此Fe3+固定的BMs可在較低濃度條件下檢測磷酸化肽。離子固定的量之間存在差異可以用兩種離子之間不同配位性質(zhì)來解釋:BMs膜上除了磷脂之外,還含有硫脂,因此,F(xiàn)e3+可以通過Fe-O(磷脂)和Fe-S(硫脂)配位鍵連接到BMs上,而Zr4+只有Zr-O(磷脂)配位。并且當(dāng)Fe3+固定的BMs只能富集單一的磷酸化肽時,Zr4+固定的BMs可以同時富集多種磷酸化肽。此外,BMs本身還可以直接通過BMs和磷酸化肽之間的弱相互作用從α-酪蛋白消化物中富集一種磷酸化肽。

    圖1 免疫磁小體(IMS)的構(gòu)建和CTC富集過程[28]

    2.3 磁小體用于腫瘤細胞富集

    2016年,Xiong等[28]合成了仿生免疫磁小體用于高通量富集血液中的循環(huán)腫瘤細胞(Circulating tumor cells,CTCs)。如圖1所示,首先通過靜電相互作用在Fe3O4磁性納米簇(Magnetic nanoclusters,MNCs)表面覆蓋一層白細胞膜碎片形成復(fù)合物(LMNC)。這層白細胞膜帶有疊氮化物(N3),是作者通過將白細胞與疊氮化膽堿共同孵育在白細胞膜上產(chǎn)生N3預(yù)先設(shè)計的。隨后,N3-LMNCs可以用高活性的二苯并環(huán)辛烯基團修飾的抗體(DBCO-Ab)通過點擊化學(xué)以可控的密度進行修飾。由此產(chǎn)生的抗體修飾的仿生免疫磁小體被賦予了優(yōu)越的CTCs識別效率,近90%的罕見腫瘤細胞可在15 min內(nèi)被該免疫磁小體從全血中捕獲;由于同源性,免疫磁小體與白細胞之間存在斥力因此可顯著降低白細胞干擾,在富集的CTCs中檢測不到白細胞的存在。

    2.4 磁小體用于真菌毒素富集

    最近,Pi等[21]通過化學(xué)鍵合將黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)多克隆抗體連在天然BMs上構(gòu)建了一種磁小體-AFB1抗體免疫磁性探針,并用這種磁性探針富集和除去植物油中的AFB1毒素。用此免疫磁性探針從人為AFB1污染的商業(yè)植物油中富集AFB1的15 min過程中,回收率可高達93.7%。與傳統(tǒng)的Fe3O4磁性納米顆粒-AFB1抗體探針相比(4 ng/mg),這種新構(gòu)建的磁小體-AFB1抗體免疫磁性探針對植物油中AFB1毒素的富集能力(115 ng/mg)高了28倍。且這種免疫磁性探針經(jīng)過簡單的激活可以重復(fù)使用,通過在BMs表面附著上不同的抗體還可以開發(fā)出一系列磁小體-抗體免疫磁性探針用于其他靶物質(zhì)的富集。

    3 磁小體介導(dǎo)的電化學(xué)生物傳感器

    將BMs應(yīng)用于電化學(xué)生物傳感器的研究相對較少,目前僅發(fā)現(xiàn)一例。即2013年,Wu等[22]首次構(gòu)建了一種基于BMs的電化學(xué)免疫傳感器用于檢測葡萄球菌腸毒素B(Staphylococcal enterotoxin B,SEB)。這種電化學(xué)免疫傳感器主要依賴SEB孵育后電極阻抗的變化來對SEB進行定量測定。其構(gòu)建過程如圖2所示。在實驗中,該免疫傳感器是直接通過物理吸附逐層組裝構(gòu)建的,通過共價鍵合法合成SEB抗體功能化的BMs。所使用的BMs不僅提供了更大的比表面積以增加抗體的固定量和免疫反應(yīng)速率,而且還提供了良好的分散性以在金電極表面形成光滑致密的膜。已經(jīng)構(gòu)建好的傳感器能夠在大約20 min內(nèi)實現(xiàn)對SEB的快速檢測,檢測范圍0.05-5 ng/mL,檢測限為0.017 ng/mL;而采用沒有BMs的檢測方法檢測SEB,檢測限為0.033 ng/mL,相對更高。該方法具有線性范圍寬、檢出限低、特異性好、穩(wěn)定性強、回收率高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點,最重要的是可以將其應(yīng)用于實際樣品的檢測。

    圖2 電化學(xué)免疫傳感器的制備過程[22]

    4 磁小體介導(dǎo)的熒光生物傳感器

    基于BMs構(gòu)建熒光生物傳感器相較于其他類型生物傳感器研究較多。Ota等[29]通過使用基于BMs的雜交方法檢測轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)基因內(nèi)的單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism,SNP)。先使用交聯(lián)劑將用于檢測TGF-β1中SNP的短(9個堿基)和特異性DNA檢測探針固定在BMs上。用熒光染料香豆素標記TGF-β1的PCR產(chǎn)物(139 bp),并與BMs上的檢測探針雜交,最后通過測定熒光強度來成功區(qū)分SNP基因型。與一個堿基錯配雜交相比,完全互補雜交產(chǎn)生的熒光強度要高出4倍。這種方法適用于自動化工作系統(tǒng),以實現(xiàn)高通量SNP檢測。該系統(tǒng)還具有對其他類型的SNP進行基因分型的潛力,并且還可用于鑒定插入或缺失多態(tài)性。Ceyhan等[6]采用了兩種策略在BMs的表面修飾上生物素得到生物素化的BMs。隨后,他們采用鏈霉親和素作為連接體在生物素化的BMs表面連接上生物素修飾的寡核苷酸鏈或抗體形成官能化BMs納米復(fù)合物。作者基于這種納米復(fù)合物設(shè)計了熒光生物傳感器用于蛋白質(zhì)檢測實驗,小鼠免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)作為檢測模型。其構(gòu)建原理如圖3所示,首先通過免疫吸附將捕獲抗體(多克隆抗小鼠IgG)固定在微孔反應(yīng)板上用于小鼠IgG抗原固定,隨后讓連接有抗小鼠IgG和寡核苷酸鏈的雙功能化的BMs納米復(fù)合物與微孔反應(yīng)板上固定化抗原結(jié)合,然后讓雙功能化的納米復(fù)合物通過特異性DNA雜交來捕獲DNA-鏈霉親和素-堿性磷酸酶綴合物,最后加入熒光堿性磷酸酶的底物Attophos,根據(jù)測量得到的熒光信號強度來判定IgG的含量。

    圖3 在夾心免疫測定中使用抗體/DNA-官能化的生物磁小體粒子(MP)作為試劑的示意圖[6]

    在2009年,Chen等[7]通過熒光免疫實驗使用從磁螺菌MSR-1中提取出的細菌磁粒子BMs與抗體和異硫氰酸熒光素形成的復(fù)合物對兩種果樹病毒:枯枝壞死環(huán)斑病毒(Prunus necrotic ring spot virus,PNRSV)和葡萄扇葉病毒(Grapevine fanleaf virus,GFLV)進行了精確高靈敏檢測。采用這種方法,可以檢測到極低的抗原濃度(原始樣品濃度的1×106稀釋)。而使用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫反應(yīng)(Double antibody sandwich enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA),最小抗原檢測濃度是原始樣品濃度。因此,基于BMs的方法比基于ELISA檢測PNRSV和GFLV的方法靈敏度提高了6個數(shù)量級(106)。兩種病毒的濃度線性檢測范圍都在1×10-6-1×10-3。

    5 磁小體介導(dǎo)的磁生物傳感器

    由于BMs的單磁疇和順磁特性,常常被用作磁標記物應(yīng)用于生物傳感器中。Amemiya等[30]開發(fā)了一種使用綴合了生物素的BMs用于鏈霉親和素檢測的系統(tǒng),如圖4所示。其中,BMs用作磁力顯微鏡(Magnetic force microscopy,MFM)成像的磁性標記物。這是第一篇使用單疇納米磁性顆粒作為生物傳感的磁性標記的報告。在實驗中,使用MFM可以在不施加外部磁場的情況下從單個顆粒中獲得磁信號。該技術(shù)的最低鏈霉親和素檢測限為1 pg/mL,比常規(guī)的熒光檢測系統(tǒng)靈敏度高100倍。該測定系統(tǒng)還可用于高靈敏度的免疫測定和DNA檢測。

    圖4 使用生物素-BMP和MFM對鏈霉親和素進行磁性檢測的程序[30]

    6 磁小體介導(dǎo)的其他生物傳感技術(shù)

    6.1 縱向表面等離子體共振檢測法

    2013年,Sun等[31]第一次使用抗體功能化的金納米棒(Gold nanorods,GNRs)作為信號探針和抗原-卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)修飾的生物磁小體作為信號放大探針,開發(fā)了一種簡單的縱向表面等離子共振(Longitudinal surface plasmon resonance,LSPR)檢測方法,用于同時進行紫外-可見檢測海鮮中的培氟沙星(Pefloxacin,PEF)和微囊藻毒素LR(Microcystin-LR,MC-LR)。如圖5所示,該傳感器是根據(jù)抗原-OVA可以與抗體和游離抗原進行競爭的原理構(gòu)建的??贵w功能化的GNRs和抗原-OVA修飾的BMs可以根據(jù)游離抗原的濃度形成不同大小的聚集體。組裝到GNRs表面的BMs的數(shù)量越多,GNR的LSPR的紅移越高。隨著游離抗原濃度的增加,組裝的BMs數(shù)量會減少,GNRs的紅移也會隨之減少。通過磁分離和信號放大效應(yīng)及當(dāng)GNRs縱橫比發(fā)生變化時,LSPR吸收光譜產(chǎn)生的獨特光學(xué)性質(zhì);LSPR免疫測定法可靈敏和選擇性的同時檢測PEF和MC-LR。整個分析時間少于3 h,PEF和MC-LR的檢測線性范圍均為1-20 ng/mL。與無BMs的LSPR測定相比,響應(yīng)信號放大2.5-5.0倍。

    6.2 磁免疫-PCR

    Wacker等[32]在傳統(tǒng)的免疫-PCR的技術(shù)上進行創(chuàng)新構(gòu)建了磁免疫-PCR(Magneto immuno-PCR,M-IPCR)。這種M-IPCR是在抗體功能化的BMs上建立的??贵w功能化的磁小體結(jié)合物主要用于產(chǎn)生信號的檢測復(fù)合物的固定和磁性富集。M-IPCR的一般原理與雙面(三明治)免疫分析法相似。該實驗的抗原檢測模型是重組乙型肝炎表面抗原(Hepatitis B surface antigen,HBsAg)。首先,使用NHS-生物素將BMs膜初始生物素化,然后使用膜結(jié)合的生物素基團結(jié)合鏈霉親和素;隨后,將鏈霉親和素官能化的BMs與生物素化的抗HBsAg抗體偶聯(lián)形成復(fù)合物,再以HBsAg抗原作為連接體,通過抗原抗體反應(yīng)連上DNA-抗體結(jié)合物形成了可產(chǎn)生信號的檢測復(fù)合物;使用磁力分離法洗滌所得到的檢測復(fù)合物顆粒,重新懸浮后,將確定體積的檢測復(fù)合物溶液轉(zhuǎn)移至含有PCR主混合物的微孔板中以實現(xiàn)固定化抗原的實時PCR檢測。其線性檢測范圍為200 ng/mL-320 pg/mL,檢測限為320 pg/mL。作者將BMs與商業(yè)用磁珠作為磁性載體進行了比較發(fā)現(xiàn),使用BMs構(gòu)建的M-IPCR具有更高的信噪比,更低的標準偏差和更好的靈敏度。相比較于商業(yè)用磁珠而言,靈敏度提高了約25倍。

    圖5 使用指定的金納米棒探針和磁小體探針開發(fā)的縱向表面等離子體共振測定的示意圖[31]

    7 結(jié)語

    目前,相較于人工合成磁納米粒子,科學(xué)家將磁細菌產(chǎn)生的天然磁性納米顆粒BMs應(yīng)用到生物傳感器中的研究相對較少,且形式較單一,沒有比色和化學(xué)發(fā)光等類型的生物傳感器,這可成為未來的研究方向。且不管何種類型的生物傳感器,都主要通過在BMs表面共價或非共價修飾上抗體,利用抗原抗體之間的特異性免疫反應(yīng)來達到檢測靶物質(zhì)的目的,檢測的靶物質(zhì)主要傾向于蛋白質(zhì)類的生物大分子,沒有發(fā)現(xiàn)對寡核苷酸鏈、糖苷類、金屬離子等物質(zhì)的檢測。這是今后基于BMs構(gòu)建生物傳感器需要克服的關(guān)鍵技術(shù)之一。

    利用抗體功能化的BMs來實現(xiàn)靶物質(zhì)的檢測局限性較大,能夠檢測的靶物質(zhì)較少,且制作成本較高。BMs膜表面含有大量的氨基,可以通過在BMs表面共價修飾上各種不同的功能活性物質(zhì),如適配體等,并結(jié)合BMs的順磁特性來構(gòu)建生物傳感器實現(xiàn)其他類型的靶物質(zhì)的快速檢測。BMs的毒性較低,可在外部磁場的控制下定向移動,因此,將其應(yīng)用于體內(nèi)實現(xiàn)體內(nèi)物質(zhì)的檢測也是未來科學(xué)家可以進行研究突破的。BMs相較于人工合成磁性納米粒子具有突出的優(yōu)勢,BMs介導(dǎo)的生物傳感器應(yīng)用前景廣泛。

    猜你喜歡
    磁性探針抗原
    自制磁性螺絲刀
    磁性離子交換樹脂的制備及其對Cr3+的吸附
    多通道Taqman-探針熒光定量PCR鑒定MRSA方法的建立
    BOPIM-dma作為BSA Site Ⅰ特異性探針的研究及其應(yīng)用
    梅毒螺旋體TpN17抗原的表達及純化
    結(jié)核分枝桿菌抗原Lppx和MT0322人T細胞抗原表位的多態(tài)性研究
    透射電子顯微鏡中的掃描探針裝置
    物理實驗(2015年9期)2015-02-28 17:36:47
    一種新型磁性指紋刷的構(gòu)思
    APOBEC-3F和APOBEC-3G與乙肝核心抗原的相互作用研究
    鹽酸克倫特羅人工抗原的制備與鑒定
    丰满乱子伦码专区| 久久久久久人妻| 午夜福利视频在线观看免费| 国产精品女同一区二区软件| 五月伊人婷婷丁香| 久久人妻熟女aⅴ| 热re99久久精品国产66热6| 久久午夜综合久久蜜桃| 天天操日日干夜夜撸| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 精品久久久精品久久久| 大片电影免费在线观看免费| 边亲边吃奶的免费视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 热re99久久精品国产66热6| 日日摸夜夜添夜夜爱| 七月丁香在线播放| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 精品视频人人做人人爽| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产综合精华液| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 在线看a的网站| 美女视频免费永久观看网站| 伦理电影免费视频| 欧美日韩视频精品一区| 国产精品 国内视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 久久久久精品久久久久真实原创| 国产福利在线免费观看视频| 免费少妇av软件| av女优亚洲男人天堂| 观看美女的网站| av片东京热男人的天堂| 亚洲熟女精品中文字幕| 日韩av不卡免费在线播放| videosex国产| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 少妇人妻 视频| 最新的欧美精品一区二区| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久久久国产网址| 最后的刺客免费高清国语| 国产一区二区三区av在线| 色94色欧美一区二区| 十八禁高潮呻吟视频| 国产精品国产av在线观看| 久久国内精品自在自线图片| 精品少妇久久久久久888优播| 各种免费的搞黄视频| 亚洲欧洲国产日韩| 欧美精品一区二区免费开放| 1024视频免费在线观看| 在线天堂最新版资源| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产探花极品一区二区| 日韩一区二区三区影片| 最近中文字幕高清免费大全6| 精品久久久久久电影网| 九九在线视频观看精品| 亚洲精品一二三| 国产色婷婷99| 丁香六月天网| 国产精品一二三区在线看| 亚洲四区av| 嫩草影院入口| 视频中文字幕在线观看| 少妇的逼好多水| xxx大片免费视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 国产精品熟女久久久久浪| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 大香蕉久久成人网| 成人免费观看视频高清| videos熟女内射| 亚洲五月色婷婷综合| 9191精品国产免费久久| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产亚洲精品第一综合不卡 | 性高湖久久久久久久久免费观看| videos熟女内射| 韩国av在线不卡| 久久久久网色| 色视频在线一区二区三区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 蜜臀久久99精品久久宅男| 日韩成人伦理影院| 精品人妻在线不人妻| 免费人成在线观看视频色| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产精品偷伦视频观看了| 一级,二级,三级黄色视频| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲国产精品国产精品| 久热久热在线精品观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久国内精品自在自线图片| 最近中文字幕高清免费大全6| 午夜免费鲁丝| 午夜免费鲁丝| 久久青草综合色| 日韩成人av中文字幕在线观看| 伦理电影免费视频| 青春草亚洲视频在线观看| 一边亲一边摸免费视频| 国产精品成人在线| 老司机影院毛片| 一个人免费看片子| 国产 精品1| 亚洲综合精品二区| 2018国产大陆天天弄谢| 日韩av不卡免费在线播放| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 在线天堂中文资源库| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲国产精品999| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 热re99久久国产66热| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产一区二区三区av在线| 婷婷色麻豆天堂久久| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 免费高清在线观看日韩| 久久av网站| 久久亚洲国产成人精品v| 少妇的逼水好多| 亚洲国产精品999| 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲国产成人一精品久久久| 建设人人有责人人尽责人人享有的| av国产久精品久网站免费入址| 美女福利国产在线| 精品少妇久久久久久888优播| 午夜91福利影院| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产高清国产精品国产三级| 久久人人爽人人爽人人片va| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 欧美成人午夜精品| 国产精品久久久久久精品古装| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 老司机亚洲免费影院| 国产 精品1| 春色校园在线视频观看| videossex国产| av女优亚洲男人天堂| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 免费观看无遮挡的男女| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产精品久久久久久av不卡| 在线观看美女被高潮喷水网站| 看免费av毛片| 亚洲情色 制服丝袜| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 2018国产大陆天天弄谢| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲综合色网址| 欧美少妇被猛烈插入视频| 观看美女的网站| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 男男h啪啪无遮挡| 国产一区二区三区综合在线观看 | 成人亚洲欧美一区二区av| 国产成人精品无人区| av福利片在线| 国产一区亚洲一区在线观看| 激情五月婷婷亚洲| 青青草视频在线视频观看| 黄色怎么调成土黄色| 99久国产av精品国产电影| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 哪个播放器可以免费观看大片| 我的女老师完整版在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 水蜜桃什么品种好| 亚洲国产看品久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 日日摸夜夜添夜夜爱| 精品少妇内射三级| 午夜91福利影院| 99热6这里只有精品| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲精品第二区| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 一级片免费观看大全| 亚洲国产色片| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲高清免费不卡视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 天美传媒精品一区二区| 久久 成人 亚洲| 欧美少妇被猛烈插入视频| 精品久久国产蜜桃| 男女边吃奶边做爰视频| 人人妻人人澡人人看| 中文天堂在线官网| 男的添女的下面高潮视频| 99国产综合亚洲精品| 日本黄大片高清| 色94色欧美一区二区| 另类亚洲欧美激情| 伦精品一区二区三区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 老司机影院成人| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 日本欧美国产在线视频| 国精品久久久久久国模美| 久久ye,这里只有精品| 国产视频首页在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久99精品国语久久久| 免费观看在线日韩| 一个人免费看片子| 国产精品久久久久成人av| 美女福利国产在线| 久久热在线av| 美女内射精品一级片tv| 一二三四中文在线观看免费高清| 天堂8中文在线网| 97在线视频观看| 黄色怎么调成土黄色| 国产亚洲最大av| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 精品久久国产蜜桃| 有码 亚洲区| 大片电影免费在线观看免费| 搡老乐熟女国产| 久久午夜综合久久蜜桃| av不卡在线播放| 丝袜在线中文字幕| 亚洲国产精品国产精品| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 亚洲在久久综合| 高清视频免费观看一区二区| 色94色欧美一区二区| 在线天堂中文资源库| 久久亚洲国产成人精品v| 国产深夜福利视频在线观看| 久热久热在线精品观看| videos熟女内射| 国产爽快片一区二区三区| 在线观看美女被高潮喷水网站| av天堂久久9| 高清不卡的av网站| 午夜91福利影院| 最后的刺客免费高清国语| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美精品亚洲一区二区| 观看美女的网站| 亚洲国产精品一区三区| 在线观看免费高清a一片| 91久久精品国产一区二区三区| 各种免费的搞黄视频| 欧美精品一区二区大全| 色网站视频免费| 久久鲁丝午夜福利片| 捣出白浆h1v1| 国产av一区二区精品久久| 日韩电影二区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 成年女人在线观看亚洲视频| 国产精品久久久av美女十八| 久久久国产欧美日韩av| 国产日韩欧美亚洲二区| 成年av动漫网址| 亚洲第一av免费看| 人妻 亚洲 视频| 久久久久久久久久人人人人人人| 黑丝袜美女国产一区| 国产有黄有色有爽视频| 女人久久www免费人成看片| 波野结衣二区三区在线| 国产永久视频网站| 国产精品无大码| 免费高清在线观看视频在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 多毛熟女@视频| 亚洲情色 制服丝袜| 免费av中文字幕在线| 91精品伊人久久大香线蕉| 精品久久久精品久久久| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 丝袜脚勾引网站| 亚洲av综合色区一区| 丝袜喷水一区| 久久婷婷青草| 亚洲丝袜综合中文字幕| 久久久久精品人妻al黑| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 99国产精品免费福利视频| 久久人妻熟女aⅴ| 精品人妻偷拍中文字幕| 99香蕉大伊视频| 2018国产大陆天天弄谢| 伦理电影免费视频| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 欧美丝袜亚洲另类| 国产xxxxx性猛交| 伦精品一区二区三区| 国产成人精品福利久久| 18在线观看网站| 99热国产这里只有精品6| 99热国产这里只有精品6| 又大又黄又爽视频免费| 日韩三级伦理在线观看| 色视频在线一区二区三区| 美女内射精品一级片tv| 亚洲一区二区三区欧美精品| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产1区2区3区精品| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 麻豆乱淫一区二区| 欧美成人午夜免费资源| 国产在线一区二区三区精| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 欧美+日韩+精品| 国产免费现黄频在线看| 哪个播放器可以免费观看大片| 日本色播在线视频| 两性夫妻黄色片 | 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 一级a做视频免费观看| 久久ye,这里只有精品| 高清不卡的av网站| 性色av一级| 内地一区二区视频在线| 熟女av电影| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 免费日韩欧美在线观看| 亚洲少妇的诱惑av| av有码第一页| 亚洲欧美精品自产自拍| 91国产中文字幕| 91久久精品国产一区二区三区| av卡一久久| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 宅男免费午夜| 视频在线观看一区二区三区| 日本av免费视频播放| 一级片'在线观看视频| 亚洲欧美清纯卡通| 欧美丝袜亚洲另类| tube8黄色片| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久免费观看电影| 国产熟女午夜一区二区三区| 青青草视频在线视频观看| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲国产精品国产精品| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲成人av在线免费| 亚洲美女视频黄频| 黄色怎么调成土黄色| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久久久久人妻| 亚洲国产精品国产精品| 国产免费又黄又爽又色| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 高清视频免费观看一区二区| 全区人妻精品视频| 日本色播在线视频| av在线播放精品| 9热在线视频观看99| 999精品在线视频| 日本91视频免费播放| 乱码一卡2卡4卡精品| 久久婷婷青草| 国产精品一区二区在线观看99| 国产 一区精品| 观看美女的网站| 久久久久网色| 久久久久久人人人人人| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 成人无遮挡网站| 国产 精品1| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲av电影在线进入| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| www.色视频.com| 我要看黄色一级片免费的| 水蜜桃什么品种好| 高清在线视频一区二区三区| 大陆偷拍与自拍| 日本av免费视频播放| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲综合精品二区| 国产一级毛片在线| 99re6热这里在线精品视频| 国产永久视频网站| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲精品国产av成人精品| 熟妇人妻不卡中文字幕| 免费观看在线日韩| 日本wwww免费看| 热re99久久国产66热| 美女视频免费永久观看网站| 在线观看免费视频网站a站| 日韩av不卡免费在线播放| 一本色道久久久久久精品综合| a 毛片基地| 久久久久久久亚洲中文字幕| a级毛片在线看网站| 丰满乱子伦码专区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲国产日韩一区二区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 在线观看免费高清a一片| av在线app专区| 久久鲁丝午夜福利片| 哪个播放器可以免费观看大片| 热re99久久国产66热| 热re99久久精品国产66热6| 99re6热这里在线精品视频| 五月伊人婷婷丁香| 国产成人av激情在线播放| 日本欧美国产在线视频| 成年动漫av网址| 国产精品久久久久久久电影| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 一级爰片在线观看| av有码第一页| 成人国语在线视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 涩涩av久久男人的天堂| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 99精国产麻豆久久婷婷| 色哟哟·www| 欧美人与性动交α欧美软件 | 国产av码专区亚洲av| 日本vs欧美在线观看视频| 春色校园在线视频观看| 日本欧美视频一区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 色哟哟·www| 丝瓜视频免费看黄片| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 桃花免费在线播放| 黑人猛操日本美女一级片| 国产亚洲精品久久久com| 精品视频人人做人人爽| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产精品国产三级国产专区5o| 熟妇人妻不卡中文字幕| 在线天堂最新版资源| 亚洲伊人久久精品综合| 国产精品99久久99久久久不卡 | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 考比视频在线观看| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产片内射在线| 亚洲四区av| 高清在线视频一区二区三区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产激情久久老熟女| 欧美成人精品欧美一级黄| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| xxx大片免费视频| 99九九在线精品视频| 精品亚洲成国产av| 久久99蜜桃精品久久| 国产精品一区二区在线不卡| 伊人久久国产一区二区| 免费大片黄手机在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 国精品久久久久久国模美| 久久久久久久大尺度免费视频| 免费观看av网站的网址| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲四区av| 国产xxxxx性猛交| 国产极品天堂在线| 精品久久久精品久久久| 一个人免费看片子| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产精品国产三级国产专区5o| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 成人毛片a级毛片在线播放| 国产激情久久老熟女| 久久久久久人妻| 国产男女超爽视频在线观看| 中文欧美无线码| 久久ye,这里只有精品| 亚洲精品中文字幕在线视频| 人体艺术视频欧美日本| 一边亲一边摸免费视频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲av在线观看美女高潮| 欧美日韩成人在线一区二区| 久久青草综合色| 赤兔流量卡办理| 观看av在线不卡| 欧美日韩av久久| 亚洲久久久国产精品| 国产精品免费大片| 99热这里只有是精品在线观看| 熟女电影av网| 有码 亚洲区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产成人精品无人区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产国语露脸激情在线看| 精品久久久精品久久久| 少妇精品久久久久久久| 哪个播放器可以免费观看大片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产精品久久久av美女十八| 成人国产麻豆网| 99久国产av精品国产电影| 国产一区二区三区综合在线观看 | 人人澡人人妻人| 久热久热在线精品观看| 久久女婷五月综合色啪小说| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美亚洲日本最大视频资源| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲伊人久久精品综合| 久久久精品区二区三区| 成人亚洲精品一区在线观看| 最近最新中文字幕免费大全7| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| a 毛片基地| www.av在线官网国产| 中国国产av一级| 国产毛片在线视频| 99热网站在线观看| 国产成人aa在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 欧美精品av麻豆av| 美女中出高潮动态图| 免费观看a级毛片全部| 亚洲五月色婷婷综合| 精品酒店卫生间| 大码成人一级视频| 亚洲少妇的诱惑av| 22中文网久久字幕| 99久国产av精品国产电影| 亚洲精品一二三| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 99九九在线精品视频| 少妇高潮的动态图| 久久久精品94久久精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 两性夫妻黄色片 | 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲成人av在线免费| 久久99热这里只频精品6学生| 精品视频人人做人人爽| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 婷婷成人精品国产| 99国产精品免费福利视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 精品人妻一区二区三区麻豆| 精品国产一区二区久久| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲精品视频女| 午夜老司机福利剧场| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 欧美亚洲日本最大视频资源| av.在线天堂| 丰满少妇做爰视频| 久久亚洲国产成人精品v| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 18+在线观看网站| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 咕卡用的链子| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲av福利一区| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产av精品麻豆| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 少妇的逼水好多| 桃花免费在线播放| 久久精品久久久久久久性| 成人毛片60女人毛片免费| 久久久久网色| 大香蕉久久网| 日本vs欧美在线观看视频| 成年av动漫网址| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 黑人猛操日本美女一级片| 国产精品蜜桃在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 免费日韩欧美在线观看| 欧美日本中文国产一区发布|