Fascin和survivin蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義

潘建生，陳一杰，江濤，劉朝輝

中國(guó)人民解放軍第180醫(yī)院普外科，福建 泉州 362000

近年來(lái)，結(jié)直腸癌的發(fā)病率和病死率均呈上升趨勢(shì)，近5年來(lái)其發(fā)病率維持在（454～584）/10萬(wàn)[1]。結(jié)直腸癌可能會(huì)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)浸潤(rùn)，導(dǎo)致患者預(yù)后較差[2-3]。生物學(xué)機(jī)制是導(dǎo)致結(jié)直腸癌發(fā)生的重要因素，一些生物因子可能會(huì)導(dǎo)致腫瘤信號(hào)通路的激活或腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的改變，影響腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)及分化過(guò)程，促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生。肌成束蛋白（Fascin）的表達(dá)能夠通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的偽足形成、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白的合成等，提高腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移能力[4]；存活蛋白（survivin）的高表達(dá)能夠通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，從而參與腫瘤進(jìn)展[5]。部分研究探討了survivin或Fascin蛋白在結(jié)直腸癌和卵巢惡性上皮性腫瘤發(fā)生中的作用，認(rèn)為Fascin和survivin蛋白高表達(dá)與腫瘤進(jìn)展有關(guān)[5-6]，但缺乏有關(guān)二者與結(jié)直腸癌患者臨床特征關(guān)系的分析。為進(jìn)一步揭示Fascin和survivin蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及意義，從而為結(jié)直腸癌的診療提供理論基礎(chǔ)，本研究回顧性分析了67例結(jié)直腸癌患者的臨床資料，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2017年1月至2017年12月于中國(guó)人民解放軍第180醫(yī)院診治的結(jié)直腸癌患者的臨床資料，收集患者的結(jié)直腸癌組織標(biāo)本及相應(yīng)的癌旁組織（距腫瘤邊緣＞5 cm）標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理組織學(xué)確診；②術(shù)前均未行放化療等治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料不完整者；②合并其他惡性腫瘤者。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入67例結(jié)直腸癌患者。67例患者中，男39例，女28例；年齡24～67歲，中位年齡51歲；結(jié)腸癌40例，直腸癌27例。

1.2 免疫組織化學(xué)染色法

首先石蠟切片脫蠟入水，然后應(yīng)用過(guò)氧化氫封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶（3%H2O2，室溫避光放置10 min），磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗5 min，滴加正常山羊或兔血清封閉處理，37℃，15 min。用濾紙吸去血清，不洗，直接滴加一抗，37 ℃，2 h；滴加生物素化的二抗，37 ℃，40 min；PBS沖洗5 min，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木素復(fù)染，加拿大樹膠（或中性樹膠）封片。

1.3 結(jié)果判斷

survivin蛋白主要定位于細(xì)胞核，F(xiàn)ascin蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)，陽(yáng)性表達(dá)呈黃色或棕黃色顆粒。在高倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度評(píng)分的乘積進(jìn)行判斷，總分≥4分為陽(yáng)性表達(dá)，＜4分為陰性表達(dá)[3]。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例進(jìn)行評(píng)分：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。根據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分：無(wú)著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)性分析；多因素分析采用Logistic回歸分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 survivin和Fascin蛋白在結(jié)直腸癌組織和癌旁組織中的表達(dá)

結(jié)直腸癌組織中survivin和Fascin蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1、圖1）

表1 67例結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌組織和癌旁組織中survivin和Fascin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率的比較[n（%）]

圖1 結(jié)直腸癌組織和相應(yīng)癌旁組織中survivin和Fascin蛋白的表達(dá)情況（免疫組織化學(xué)染色，×100）

2.2 survivin和Fascin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與結(jié)直腸癌患者臨床特征的關(guān)系

Dukes分期為C～D期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者的survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Dukes分期為A～B期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，Dukes分期為C～D期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中低分化的結(jié)直腸癌患者的Fascin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Dukes分期為A～B期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和高分化患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；不同年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤直徑的結(jié)直腸癌患者的survivin和Fascin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

2.3 survivin與Fascin蛋白表達(dá)情況的相關(guān)性分析

經(jīng)Spearman秩相關(guān)性分析，survivin與Fascin蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)（rs=0.441，P＜0.05）。（表3）

表3 survivin與Fascin蛋白的表達(dá)情況

2.4 survivin和Fascin蛋白陽(yáng)性表達(dá)影響因素的多因素分析

將單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量納入Logistic多因素回歸分析。結(jié)果顯示，Dukes分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況是survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立影響因素（OR=3.508、3.016，P＜0.01）；Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和分化程度是Fascin蛋白陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立影響因素（OR=3.022、2.787、2.627，P＜0.01）。（表4、表5）

表4 survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)影響因素的多因素Logistic回歸分析

表5 Fascin蛋白陽(yáng)性表達(dá)影響因素的多因素Logistic回歸分析

3 討論

結(jié)直腸癌的早期診斷水平較低，整體生存預(yù)后較差，其早期診斷方式主要包括血清學(xué)檢查和超聲檢查，雖然能夠在疾病的診斷過(guò)程中發(fā)揮重要的參考價(jià)值，但局限性較為明顯。而在治療方面，手術(shù)治療、免疫靶向治療和靜脈化療雖然能夠改善結(jié)直腸癌患者的臨床癥狀，抑制病情進(jìn)展，但長(zhǎng)期的臨床隨訪研究顯示，結(jié)直腸癌患者綜合性治療后的5年生存率仍不足35%，嚴(yán)重并發(fā)癥的發(fā)生率可達(dá)8%以上[7-8]。通過(guò)對(duì)相關(guān)免疫組化指標(biāo)的研究，能夠?yàn)榕R床上結(jié)直腸癌的診斷和治療提供新的作用靶點(diǎn)及理論參考。

survivin蛋白主要存在于未成熟的胚胎組織中，在成年人惡性腫瘤細(xì)胞的發(fā)生過(guò)程中，survivin蛋白可以通過(guò)對(duì)細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶的調(diào)控作用，影響細(xì)胞周期，提高G1/S細(xì)胞比例。研究顯示，survivin蛋白能夠抑制腫瘤細(xì)胞的程序性凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的持續(xù)性增殖[9-10]。Fascin蛋白能夠參與腫瘤細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)、肌動(dòng)蛋白或偽足的形成，提高腫瘤細(xì)胞變形及突破基底膜的能力，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)增加。有研究顯示，F(xiàn)ascin蛋白能夠提高腫瘤細(xì)胞對(duì)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附能力，促進(jìn)惡性腫瘤的進(jìn)展[11-12]。

本研究結(jié)果顯示，survivin和Fascin蛋白在結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），提示survivin和Fascin蛋白均可能影響結(jié)直腸癌的病情進(jìn)展。survivin和Fascin蛋白高表達(dá)主要通過(guò)以下機(jī)制促進(jìn)病情進(jìn)展[13]：①survivin蛋白高表達(dá)可抑制腫瘤凋亡抑制因子α的表達(dá)水平，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，打破腫瘤細(xì)胞增殖與凋亡的平衡狀態(tài)；②Fascin蛋白可以對(duì)腫瘤細(xì)胞的α-肌動(dòng)蛋白和細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響，提高腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)能力，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)鄰近正常結(jié)直腸上皮組織的侵襲。徐萬(wàn)宇和徐德[14]認(rèn)為，survivin蛋白高表達(dá)能夠促進(jìn)直腸癌患者臨床轉(zhuǎn)歸的惡化，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞病理分級(jí)升高，影響直腸癌患者放化療等綜合性治療的敏感性。免疫組化染色結(jié)果顯示，survivin和Fascin蛋白分別表達(dá)于結(jié)直腸癌細(xì)胞的細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)中，特別是在異型性較高的腫瘤細(xì)胞周邊，survivin和Fascin蛋白的染色程度更深。本研究結(jié)果顯示，survivin蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌患者的Dukes分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，這主要是由于survivin蛋白能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)深肌層的浸潤(rùn)，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附能力；Fascin蛋白表達(dá)不僅與結(jié)直腸患者的Dukes分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，同時(shí)也與分化程度密切相關(guān)，這主要是由于Fascin蛋白能夠?qū)е陆Y(jié)直腸癌細(xì)胞分化成熟調(diào)控障礙。部分研究者分析了survivin蛋白表達(dá)與腫瘤患者的臨床特征后，并不認(rèn)為survivin的高表達(dá)能夠影響淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[13]，存在相關(guān)差異考慮與腫瘤患者的基礎(chǔ)性疾病、指標(biāo)檢測(cè)的敏感度差異有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，survivin與Fascin蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)，提示二者在促進(jìn)結(jié)直腸癌患者病情進(jìn)展的過(guò)程中可能發(fā)揮了一定的協(xié)同作用。此外，本研究結(jié)果顯示，Dukes分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況是survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立影響因素（P＜0.01），Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和分化程度是Fascin蛋白陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立影響因素（P＜0.01）。提示survivin和Fascin蛋白的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者的臨床特征具有一定的關(guān)系，這主要與survivin和Fascin蛋白能夠影響結(jié)直腸癌細(xì)胞的生物學(xué)特征有關(guān)。

綜上所述，survivin和Fascin蛋白在結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率較高，且其陽(yáng)性表達(dá)與患者的臨床特征有關(guān)，后續(xù)研究可以進(jìn)一步探討survivin和Fascin蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌患者生存預(yù)后的關(guān)系。