商丘市無償獻血人群中HLA抗體分布狀況調(diào)查研究

賈一賓，祖衛(wèi)東

(商丘市中心血站，商丘 476100)

隨著醫(yī)學技術的發(fā)展，輸血已經(jīng)在出血性疾病、手術、創(chuàng)傷及糾正慢性貧血等的治療中都發(fā)揮著不可替代的作用，是挽救患者生命的重要治療手段。目前，輸血安全管理受到廣大醫(yī)務工作者的重視，通過交叉配血、免疫合血以及信息比對等措施，溶血性輸血反應已經(jīng)大幅度降低[1，2]。但值得注意的是，非溶血性輸血反應仍然是臨床導致患者輸血反應甚至致死的主要原因之一。有研究報道[3，4]，非溶血性輸血反應和供血者血液中人類白細胞抗原(HLA)抗體密切相關，且對有生育史的婦女，體內(nèi)產(chǎn)生HLA的幾率較高，其血液不可直接用于臨床輸血。近期，我們對商丘市無償獻血人群中HLA抗體分布進行了調(diào)查，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取商丘市2016年無償獻血者200例為研究對象。其中有男性獻血者60例，年齡18～55 歲，平均年齡（25.5±4.0）歲；有女性無償獻血者140例，其中未生育女性64例，年齡18～30歲，平均年齡（24.6±2.7）歲；已生育女性 76 例，年齡25～55 歲，平均年齡（25.8±4.3 歲）。

1.2 試劑和儀器 本研究所采用的HLA試劑盒購買自美國One Lambda公司抗體篩選試劑(LSM12，LABScreen Mixed，Lot021)，該試劑盒能夠同時檢測HLA-Ⅰ類、Ⅱ類抗體。

1.3 檢測方法 抽取所有入選的體檢者靜脈血3～5ml，置于EDTA抗凝管中，3000r/min離心10min，分離出血漿，-20℃待用。試驗原理為試劑盒中磁珠包被有HLA-Ⅰ類、Ⅱ型號糖蛋白，于血漿孵育后可以結(jié)合血漿中的HLA抗體，然后和藻紅蛋白節(jié)后抗人IgG抗體，通過儀器比對，判斷結(jié)果。具體操作如下：96 孔板中加入 2μl磁珠，14μl PBS，7μl血漿樣本，充分混勻后在室溫條件下避光孵育30min。然后加入180μl的洗液，充分混勻后在水平離心機上離以3500r/min離心5min。待磁珠沉在96孔板孔底部，則棄去上清液。連續(xù)2次后，加入50μl二抗，充分混勻，室溫條件下避光孵育30min，棄上清液，用洗液清晰3次。最后加入PBS 50μl并充分混勻，在酶標儀上讀板。

1.4 觀察指標 觀察比較三類獻血者(男性、未育女性和已育女性)的HLA分布情況和特異性。

1.5 統(tǒng)計學分析 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件處理，計量資料均以平均值±標準差（±s），計數(shù)資料采用χ2檢驗，如有理論T值＜5則使用校正χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三類無償獻血者HLA抗體分布情況比較 在全部200例獻血者中，HLA抗體陽性主要分布在已育女性人群中。已育女性HLA抗體陽性率顯著高于未育女性和男性，且以HLA-Ⅰ類抗體為主，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

2.2 HLA-Ⅰ類抗體特異性分析 由表1可知，本研究中共有HLA-Ⅰ類抗體陽性者22例 (包含HLA-Ⅰ/Ⅱ同時陽性者)，一般均以多種HLA-Ⅰ類抗混合存在為主。HLA-Ⅰ類抗體出現(xiàn)頻率較高的是 A*11、23、02、04，B*07、27、40、81、15 以 及Cw*07。見表2。

2.3 HLA-II類抗體特異性分析 由表1可知，本研究中共有HLA-II類抗體陽性者9例 (包含HLA-Ⅰ/Ⅱ同時陽性者)，一般均以多種HLA-II類抗混合存在為主。HLA-II類抗體出現(xiàn)頻率較高的是DRB1*04、02、03、01，DQB1*06、02、01 和 DPB1*04、03。 見表3。

3 討論

在醫(yī)療界高度重視用血安全的現(xiàn)在，非溶血性輸血反應已經(jīng)成為臨床安全用血的重大隱患，造成輸血不良反應，嚴重者可導致相關急性肺損傷等并發(fā)癥，直接威脅患者生命安全。HLA抗體是引起輸血相關急性肺損傷的主要原因之一，研究證實65～90%的HLA抗體陽性獻血者血液可引起受血者相關急性肺損傷的發(fā)生[5]。HLA是目前所知人體最復雜的多態(tài)系統(tǒng)，是具有高度多態(tài)性的同種異體抗原，其化學本質(zhì)為一類糖蛋白，按其分布和功能分為Ⅰ類抗原和Ⅱ類抗原。有研究證實[6，7]，已育女性獻血者HLA抗體出現(xiàn)的頻率較高，會增加臨床用血的HLA同種免疫的風險，應對HLA抗體陽性者的血液進行去血漿和去血小板處理。Triulzi等人[8]也認為妊娠、生育過程就是一次免疫刺激，會導致孕婦體內(nèi)有高含量的HLA抗體，且抗體濃度和患者妊娠次數(shù)呈正相關，此類抗體進入受血這體內(nèi)后會導致HLA同種免疫，誘發(fā)非溶血性輸血反應。

表1 三類無償獻血者HLA抗體分布情況比較

表2 24例HLA-Ⅰ類抗體陽性獻血者HLA-Ⅰ類抗體特異性分析

表3 HLA-II類抗體特異性分析

臨床用血不僅要加強交叉配血等常規(guī)檢查，也要加強HLA抗體檢測。本研究選取2016年的200例獻血人群，并進行了HLA抗體篩查，結(jié)果表明已育女性HLA抗體陽性率顯著高于未育女性和男性，且以HLA-Ⅰ類抗體為主，且差異有統(tǒng)計學意義。據(jù)報道[9]，歐美發(fā)達國家已經(jīng)制定了相關規(guī)章制定，要求醫(yī)療機構(gòu)在進行輸血治療時有限使用女性獻血者血液，我國尚無相關規(guī)定。在本研究中，未育女性和男性獻血者中也有個別HLA抗體陽性者，這可能和環(huán)境中HLA抗原和機體HLA抗原表位具有一定相似度，從而導致的交叉反應刺激，導致HLA抗體產(chǎn)生，但這種現(xiàn)象是少見的，發(fā)生率較低[10]。根據(jù)HLA抗體產(chǎn)生的原因可知，多次輸血者體內(nèi)也會產(chǎn)生HLA抗體，但本研究未選取有輸血史患者，有待進一步研究。HLA抗原和種族、遺傳等因素有關，因此不同區(qū)域HLA的特異性也有所不同[11]，而高發(fā)的HLA抗原可誘發(fā)高發(fā)抗體。我們根據(jù)本地區(qū)獻血者血小板HLA基因庫，將基因頻率在0.02以上的認為是常見基因。我們發(fā)現(xiàn)本地區(qū) HLA-I類抗體以 A*11、23、02、04，B*07、27、40、81、15 以及 Cw*07 多見；HLA-II類抗體以DRB1*04、02、03、01，DQB1*06、02、01 和 DPB1*04、03常見。

綜上所述，本地區(qū)已育女性獻血者HLA抗體頻率較高，要加強對已育女性獻血者血液篩選，排除其血漿和血小板成分，加強臨床用血安全。