鏡檢法與金標(biāo)法在瘧原蟲篩查中的應(yīng)用

李冉，王康椿，葉青，黃小玲

(廣東省第二中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510095)

瘧疾是由人類瘧原蟲感染引起的寄生蟲病，據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)2016年全球仍有2.12億瘧疾感染病例[1]。近年來(lái)，經(jīng)濟(jì)貿(mào)易全球化帶來(lái)的人口流動(dòng)及勞務(wù)輸出增加，我國(guó)多有輸入性瘧疾的報(bào)道。2010年1月-2015年7月，廣東省共報(bào)告瘧疾病例773例，全為輸入性病例[2]。因此，準(zhǔn)確快速的診斷對(duì)瘧疾控制具有重要意義。瘧原蟲檢測(cè)多采用鏡檢法，其操作簡(jiǎn)便，適用于各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)，但其受影響因素較多，而瘧原蟲快速診斷試劑盒具有操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)短、檢測(cè)結(jié)果直觀易判讀等優(yōu)點(diǎn)。廣州萬(wàn)孚生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的瘧原蟲檢測(cè)試劑盒通過(guò)檢測(cè)全血樣本中的特異性惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶 （pfLDH）和瘧原蟲乳酸脫氫酶（panLDH）來(lái)判定有無(wú)瘧原蟲感染。本研究同時(shí)應(yīng)用鏡檢法與金標(biāo)法進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)兩種方法的臨床應(yīng)用進(jìn)行評(píng)價(jià)，旨在為各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 選取2011年1月-2017年9月期間在我院鏡檢發(fā)現(xiàn)瘧原蟲的55例為陽(yáng)性組；以發(fā)熱查因?yàn)樵V求鏡檢瘧原蟲陰性的292例為對(duì)照組。

1.2 材料 OLYPUMS CX41雙目普通光學(xué)顯微鏡，BASO吉姆薩染液，廣州萬(wàn)孚瘧原蟲金標(biāo)法檢測(cè)試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 顯微鏡檢查 每份病例均采集EDTA.K2新鮮抗凝全血2ml，并立即涂厚、薄血片，其中薄片用甲醇固定后，與厚片一起用吉姆薩染液染色10min，使用清水浸泡法除去多余的染液，待干后由經(jīng)驗(yàn)豐富的鏡檢人員進(jìn)行鏡檢，所有鏡檢結(jié)果均由第二人復(fù)核。薄片用于蟲種鑒定，具體方法參見(jiàn)《瘧疾診斷標(biāo)準(zhǔn)》（WS/T 259-2006）。

1.3.2 金標(biāo)法檢測(cè) 按照試劑盒說(shuō)明書操作。取5ul全血樣本滴加于加樣孔內(nèi)，同時(shí)滴加4滴裂解液于試劑孔，15min內(nèi)觀察結(jié)果。檢測(cè)區(qū)（T1）及質(zhì)控區(qū)（C）各出現(xiàn)一條紅色反應(yīng)線，提示惡性瘧感染；檢測(cè)區(qū)（T1、T2）及質(zhì)控區(qū)（C）均出現(xiàn)一條紅色反應(yīng)線，提示惡性瘧感染，但不排除可能同時(shí)混合感染其他3種瘧疾；檢測(cè)區(qū)（T2）及質(zhì)控區(qū)（C）各出現(xiàn)一條紅色反應(yīng)線，提示除惡性瘧以外的其他3種瘧疾中的1種或多種感染；僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紅色反應(yīng)線，為陰性；質(zhì)控區(qū)（C）無(wú)紅色反應(yīng)線出現(xiàn)，為無(wú)效，應(yīng)重測(cè)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 兩組間數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05具有顯著性差異，所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析。

2 結(jié)果

對(duì)347例血樣同時(shí)用金標(biāo)法和鏡檢法進(jìn)行瘧原蟲檢測(cè)，鏡檢出瘧原蟲陽(yáng)性55例（32例惡性瘧，17例間日瘧，1例卵形瘧，5例混合瘧），陰性292例，陽(yáng)性率為15.85%（55/347）；金標(biāo)法試劑盒檢測(cè)出陽(yáng)性55例（32例惡性瘧，17其他瘧疾，5例混合瘧，1例假陽(yáng)性），陰性292例。以鏡檢法結(jié)果為基準(zhǔn)，金標(biāo)法試劑盒檢測(cè)的靈敏度為98.18%（54/55），特異性為99.66%（291/292），陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為98.18%（54/55），陰性預(yù)測(cè)值為 99.66%（291/292）；兩種檢測(cè)方法符合率為 99.42%﹛（54+291）/347﹜；兩種檢測(cè)方法間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見(jiàn)表1。

表1 鏡檢法與金標(biāo)法檢測(cè)瘧原蟲結(jié)果統(tǒng)計(jì)分布

3 討論

我國(guó)的瘧疾發(fā)病率雖較19世紀(jì)70年代有了較大下降，但隨著國(guó)際化的進(jìn)程，外貿(mào)經(jīng)濟(jì)的繁榮，人員流動(dòng)性的加大，瘧疾仍為困擾我國(guó)的傳染性疾病之一，海南、云南、廣西等地瘧疾發(fā)病率相對(duì)較高，而內(nèi)陸地區(qū)輸入性瘧疾的報(bào)道也日益增多[3-6]。

目前瘧疾檢測(cè)主要有經(jīng)典的鏡檢法，金標(biāo)法，流式細(xì)胞標(biāo)記法，PCR法等方法[7]。鏡檢法操作簡(jiǎn)便，易于普及，適合各級(jí)醫(yī)院使用，但檢出受制片、染色、鏡檢水平、顯微鏡質(zhì)量等多方面因素影響，導(dǎo)致瘧疾病例的確診與鑒別診斷困難[8，9]，特別在瘧原蟲混合感染或藥物治療后，瘧原蟲形態(tài)遭到破壞，增大了瘧原蟲染色鏡檢的難度[10]；流式細(xì)胞標(biāo)記法和PCR檢測(cè)法雖然具有檢測(cè)準(zhǔn)確，靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)[11]，但其操作繁瑣，要求條件及成本較高，難以普及；金標(biāo)法試劑盒具有體積小，易保存，操作方便，結(jié)果易于判讀，對(duì)操作人員要求不高等特點(diǎn)，適用于各級(jí)醫(yī)療檢測(cè)機(jī)構(gòu)用于瘧疾疑似患者的輔助診斷和瘧區(qū)病例的篩選檢查。

本研究中以鏡檢法為參照，金標(biāo)法檢測(cè)試劑盒具有較高的靈敏度 （98.18%）與特異性（99.66%），兩種檢測(cè)方法之間無(wú)顯著差異。金標(biāo)法與鏡檢法二者的符合率高達(dá)99.42%，顯示了良好的一致性。

萬(wàn)孚金標(biāo)法瘧原蟲檢測(cè)試劑盒通過(guò)檢測(cè)特異性惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶（pfLDH）和瘧原蟲乳酸脫氫酶（panLDH）以檢測(cè)瘧原蟲。本研究的347例檢測(cè)血樣中，有1例鏡檢法陽(yáng)性，而金標(biāo)法陰性，經(jīng)鏡檢確認(rèn)該例標(biāo)本為卵形瘧，故未能檢出，這與唐鳳[12]等人的研究相符，但因標(biāo)本量不足，未能驗(yàn)證金標(biāo)法對(duì)卵形瘧的檢出率。本研究中發(fā)現(xiàn)的1例鏡檢法陰性，金標(biāo)法陽(yáng)性的標(biāo)本，經(jīng)詢問(wèn)該患者檢查前1周內(nèi)曾服用抗瘧藥物，這可能與鏡檢結(jié)果轉(zhuǎn)陰時(shí)間（1-5d）和金標(biāo)法轉(zhuǎn)陰時(shí)間（＞7d）有差異有關(guān)[13]。

瘧疾是由雌性按蚊傳播的一種致死率第一的寄生蟲疾病，根據(jù)感染瘧原蟲種類的不同有7-30天的潛伏期[14]，消滅傳染源和傳播途徑是控瘧的兩大首要任務(wù)，由于人群對(duì)抗瘧藥抵抗加強(qiáng)，抗瘧藥濫用，病人治療不規(guī)范等，使傳染源多為低密度帶蟲者。常規(guī)鏡檢法不易檢出，常出現(xiàn)漏診，使傳染源不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)并消除[15]。故提升各級(jí)檢驗(yàn)人員的能力，及時(shí)發(fā)現(xiàn)瘧疾，對(duì)瘧疾防治有重要意義[16]。聯(lián)合鏡檢法與金標(biāo)法對(duì)瘧原蟲進(jìn)行檢測(cè)，簡(jiǎn)便易行，易于推廣，可彌補(bǔ)檢測(cè)人員技術(shù)上的不足，提高瘧原蟲檢出率，為不同醫(yī)療機(jī)構(gòu)根據(jù)自身特點(diǎn)選擇瘧原蟲的檢測(cè)方法提供依據(jù)。