帕金森鼠結(jié)腸黏膜炎性反應(yīng)與多巴胺和5-羥色胺受體表達(dá)

張 悅 李 蘊(yùn) 張曉麗 馮小燕 權(quán)竹聲 朱進(jìn)霞*

(1.首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)與病理生理學(xué)系，北京 100069; 2.首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系，北京 100069)

消化道組織內(nèi)存在大量的多巴胺(dopamine，DA)和5-羥色胺(serotonin，5-HT)，具有重要的胃腸功能調(diào)節(jié)作用。除了調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力和黏膜分泌與吸收外，DA和5-HT都參與黏膜保護(hù)，在黏膜炎性反應(yīng)與黏膜屏障等方面均發(fā)揮重要作用。有研究[1]顯示激動(dòng)DA受體D2可以保護(hù)胃腸黏膜，激動(dòng)D1可以抑制炎性反應(yīng)小體NLRP3的激活[2]，提示DA及其受體具有一定的抗炎效應(yīng)。本課題組[3]前期報(bào)道5-HT除了調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力以外，具有促進(jìn)結(jié)腸黏膜分泌的作用，5-HT可以作用于5-HT4受體升高cAMP促進(jìn)結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞分泌，而通過5-HT3受體則可促進(jìn)生長(zhǎng)抑素釋放對(duì)上述促分泌作用起到一個(gè)負(fù)反饋調(diào)節(jié)效應(yīng)。同時(shí)5-HT在黏膜保護(hù)中的作用也有文獻(xiàn)[4-6]報(bào)道。

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一種以中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元發(fā)生進(jìn)行性丟失作為病理改變的中老年疾病， PD患者除軀體運(yùn)動(dòng)功能障礙以外，病程早期常伴發(fā)胃腸功能紊亂，出現(xiàn)胃腸動(dòng)力紊亂(胃輕癱、便秘等)以及黏膜屏障功能損傷，晚期還會(huì)出現(xiàn)潰瘍、胃十二指腸反流等。PD的臨床研究[7-8]顯示，在中樞和消化系統(tǒng)存在多種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)改變，并出現(xiàn)黏膜屏障損傷。本課題組[9]前期研究，PD模型大鼠中，DA在平滑肌的含量明顯升高，可通過抑制結(jié)腸動(dòng)力從而導(dǎo)致便秘。但是PD模型鼠結(jié)腸黏膜層中DA和5-HT的含量及其受體的蛋白表達(dá)是否發(fā)生變化、黏膜是否存在炎性反應(yīng)和通透性改變未見報(bào)道。本研究將觀察5-HT和DA及其受體在結(jié)腸黏膜的分布情況，并通過在大鼠雙側(cè)黑質(zhì)注射6-羥多巴(6-hydroxydopamine，6-OHDA)模擬PD病癥制作6-OHDA大鼠模型，觀察黏膜炎性反應(yīng)和通透性的變化，以及5-HT和DA含量及其相關(guān)受體的變化。為PD胃腸功能紊亂提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性SD大鼠30只，首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)為：SCXK(京)2012-0001。大鼠體質(zhì)量為200～250 g，經(jīng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)許可(動(dòng)物倫理是批號(hào)：AEEI-2015-065)，動(dòng)物在室溫條件飼養(yǎng)，24 h食水供應(yīng)，給予正常晝夜光照。斷頸處死后取結(jié)腸組織，用解剖鑷剝離出黏膜層并凍存于液氮中；取腦組織，一部分固定包埋用于切片，一部分剝離出黑質(zhì)核團(tuán)凍存。

1.2 6-OHDA大鼠模型

1)模型制備：6-OHDA處理組大鼠用賽拉嗪和氯胺酮的混合物麻醉(13，87 mg/kg)后，將大鼠頭部固定于立體定位儀，顱骨暴露出2點(diǎn)(黑質(zhì)坐標(biāo)：前囟后5.6 mm，旁開±2.0 mm，深度7.5 mm)，從這2點(diǎn)注入6-羥多巴(購(gòu)自Sigma公司，美國(guó))，每點(diǎn)注入2 μL，濃度為2 g/L。飼養(yǎng)4周后模型制作完成。

2)糞便含水量：6-OHDA模型大鼠成模后，將6-OHDA和對(duì)照組每只大鼠放入1個(gè)代謝籠里。收集每只大鼠的糞便，稱質(zhì)量數(shù)值作為濕質(zhì)量。將收集的糞便在100 ℃條件下烤干48 h，稱質(zhì)量數(shù)值作為干質(zhì)量。糞便的含水量按照此公式進(jìn)行計(jì)算：糞便含水量=(濕質(zhì)量-干質(zhì)量)÷濕質(zhì)量×100%，比較6-OHDA模型組和對(duì)照組大鼠的糞便含水量。

3)行為學(xué)檢測(cè)：將模型及對(duì)照組大鼠置于橫桿上，每只大鼠以圓形隔板隔開，啟動(dòng)開關(guān)后橫桿開始轉(zhuǎn)動(dòng)，記錄每只大鼠在轉(zhuǎn)棒上停留的時(shí)間，比較兩組大鼠的運(yùn)動(dòng)能力。

1.3 黏膜電阻和通透性檢測(cè)

剝離大鼠結(jié)腸的黏膜層組織置于2個(gè)Ussing chambers中間，平鋪蓋住中間的孔隙并固定，兩側(cè)的小室中分別倒入5 mL Kreb’s液(pH值為7. 4)，通入配比為95%(體積分?jǐn)?shù))O2和5%(體積分?jǐn)?shù))CO2的混合氣，恒溫水浴37 ℃。通過電極測(cè)定黏膜的電阻。

孵育組織的方法同上，從黏膜組織的頂膜側(cè)加入異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC)-葡聚糖，每隔30 min從基底側(cè)取待測(cè)液體，從實(shí)驗(yàn)開始直到1 h，共取3次，第一次液體作為空白對(duì)照，通過酶標(biāo)儀讀數(shù)。

1.4 免疫組織化學(xué)熒光染色

取材：6-OHDA成模大鼠及對(duì)照組大鼠用4%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))多聚甲醛進(jìn)行灌流固定，完成后取腦，將腦組織浸泡于4%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))多聚甲醛溶液中，次日將組織浸泡于15%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))蔗糖溶液中，第3天換至30%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))蔗糖溶液中，梯度脫水。待腦組織完全脫水后，根據(jù)黑質(zhì)所在部位切塊包埋，冰凍切片機(jī)切厚度為20 μm腦片，漂片于多聚賴氨酸處理的載玻片上，過夜晾干。

切片經(jīng)檸檬酸鹽緩沖液中微波抗原修復(fù)后，自然降至室溫。先后經(jīng)PBST緩沖液洗片。用5%(體積分?jǐn)?shù))驢血清封閉30 min，選用一抗為酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase，TH)(1∶5 000，小鼠抗大鼠，Sigma公司，美國(guó))，4 ℃過夜孵育。15～16 h后取出組織切片室溫放置1 h，PBST洗3次。滴加二抗 (1∶1 000，驢抗小鼠，購(gòu)自Invitrogen公司，美國(guó))，孵育2 h后滴加DAPI，5 min后PBST洗片，甘油封片。熒光顯微鏡下觀察并拍照。

1.5 免疫蛋白印跡分析

稱取大鼠黑質(zhì)或結(jié)腸黏膜層組織30 mg左右，加入300 μL蛋白裂解液，將組織剪碎勻漿，低溫超聲至半透明，冰上輕搖30 min，離心5 min(12 000 r/min、4 ℃)。取上清液，測(cè)定提取的蛋白濃度，調(diào)平后在95 ℃水浴中煮5 min，以每孔100 μg蛋白上樣。

80 V電壓約30 min，待蛋白跑齊更換電壓至120 V約1 h，取出凝膠，與硝酸纖維素膜(PVDF膜)按順序疊放，以295 mA轉(zhuǎn)膜90 min。用5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))脫脂奶粉封閉1 h。分別用一抗D1、D2、D5、5-HT3和5-HT4、TH及內(nèi)參GAPDH， 4 ℃孵育約15 h，次日取出室溫輕搖30 min，TBST洗膜，孵育綠色熒光二抗2 h，TBST洗膜后TBS浸泡，使用Odyssey系統(tǒng)掃描成像，實(shí)驗(yàn)所用一抗及二抗信息見表1、2。

表1 實(shí)驗(yàn)所用一抗信息Tab.1 Primary antibodies information in these experiments

TH:tyrosine hydroxylase;5-HT:serotonin.

表2 實(shí)驗(yàn)所用二抗信息Tab.2 Secondary antibodies information in these experiments

1.6 高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)法(high-performance liquid chromatography-electrochemistry detection, HPLC-EDC)

稱取大鼠結(jié)腸黏膜層組織30 mg左右，加入0.4 mol/L高氯酸150 μL，冰浴中超聲勻漿。避光，冰浴靜置1 h后，4 ℃，12 000 r/min離心20 min，定量吸取上清液約100 μL，加入半量上清液體積即50 μL左右預(yù)處理液(檸檬酸鉀、磷酸氫二鉀、 EDTA-2Na混合液)，漩渦混勻。冰浴靜置1 h后，4 ℃，12 000 r/min離心20 min，吸取上清液測(cè)定。

1.7 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)(Real-time PCR)

1)RNA的提取:取適量大鼠結(jié)腸黏膜組織，研磨碾碎后加入放有1 mL Trizol(Invitrogen公司，美國(guó))的1.5 mL EP管內(nèi)，混勻后冰上靜置5 min。加入氯仿0.2 mL，劇烈震蕩15 s，冰上靜置2～3 min，離心15 min (4 ℃、12 000 r/min)。吸取上層水相至干凈的離心管中，加入異丙醇[每1 mL Trizol對(duì)應(yīng)0.5 mL 100%(體積分?jǐn)?shù))異丙醇]。室溫孵育10 min，低溫離心 10 min(4 ℃ 12 000 r/min)。棄掉上層懸液，用75%(體積分?jǐn)?shù))乙醇洗滌RNA[每1 mL的Trizol加1 mL的75%(體積分?jǐn)?shù))乙醇]，離心5 min(4 ℃，7 500 r/min)，棄上清，干燥RNA。加入10～20 μL 無酶水溶解，測(cè)定濃度后，將RNA反轉(zhuǎn)錄。

2)反轉(zhuǎn)錄:取0.1 ng～5 μg的總RNA，依次加入1 μL(50 μmol/L)Oligo (dT)、無RNA酶水至12 μL，65 ℃加熱5 min后冷卻，再分別加入4 μL 緩沖溶液、2 μL 10 mmol/L dNTP Mix、1 μL RiboLock RNase 抑制劑(20 U/μL)、1 μL反轉(zhuǎn)錄酶。42 ℃孵育60 min， 70 ℃孵育5 min。試劑盒購(gòu)于美國(guó)Thermo公司。

3)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè):Real-time PCR用于測(cè)定大鼠結(jié)腸黏膜層的多巴胺受體D1、D2、和D5及5-HT受體5-HT3和5-HT4的mRNA表達(dá)情況。以GAPDH和β-Actin為內(nèi)參，進(jìn)行相對(duì)定量PCR分析。多巴胺受體D1正向引物序列為5′-GGA TGA CAA CTG TGA CAC AAG GTT G-3′，反向引物序列為5′- AAG CTG ATG AGG GAC GAT GAA-3′；D2正向引物序列為5′- CAC CAC GGC CTA CAT AGC AA-3′，反向引物序列為5′-GGC GTG CCC ATT CTT CTC T-3′；D5正向引物序列為5′-CTA GTG TGT GCT GCC ATC GT-3′，反向引物序列為5′-ACC CAG ATG TCG CAG AAT G-3′，5-HT受體5-HT3正向引物序列為5′-TGC ATA CCA TCC AGG ACA TCA-3′，反向引物序列為5′-CTC TTG TCC GAC CTC ACT TCT TC-3′，5-HT4正向引物序列為5′-GCT GGG TCA TTC CCA TGT TT-3′，反向引物序列為5′-CAA CTA TGC CGA TGT TGT TCC A-3′，β-Actin正向引物序列為5′-TTC AAC ACC CCA GCC ATG T-3′，反向引物序列為5′-GTG GTA CGA CCA GAG GCA TAC A-3′。GAPDH引物購(gòu)于上海生工公司。反應(yīng)體系按中國(guó)Stransgen公司的試劑盒說明操作。94 ℃變性5 s，59 ℃退火15 s，72 ℃延伸10 s， 40個(gè)循環(huán)后讀取數(shù)值。

1.8 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)

使用腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α)(ER006，ExCell)、白介素(interleukin，IL)IL-6(ER003，ExCell)、IL-1β(ER008，ExCell)的Elisa試劑盒，操作如下：取出抗體包被的板條，留空白孔，其他每孔加入100 μL樣本或標(biāo)準(zhǔn)品，隨后每孔添加50 μL生物素化抗體工作液，封住反應(yīng)孔，室溫孵育120 min。洗板5次，除空白孔外，每孔加入100 μL酶結(jié)合物工作液，封住反應(yīng)孔，室溫孵育60 min。洗板5次，每孔加入顯色底物100 μL，室溫避光孵育15 min。加入100 μL終止液，混勻后測(cè)量450 nm的A值。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 6-OHDA大鼠模型鑒定

為驗(yàn)證6-OHDA大鼠模型是否造模成功，本研究采用免疫熒光染色法和免疫蛋白印跡技術(shù)觀察模型和對(duì)照組大鼠黑質(zhì)多巴胺的合成酶TH的分布和蛋白表達(dá)。結(jié)果如圖1A和B所示，6-OHDA模型組大鼠黑質(zhì)TH蛋白的表達(dá)明顯降低，從0.335±0.073(對(duì)照組)下降到0.132±0.028(n=7，P<0.05)說明定點(diǎn)損毀黑質(zhì)DA能神經(jīng)元成功；行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果(圖1C)顯示，6-OHDA大鼠的轉(zhuǎn)棒停留時(shí)間從(35.330±3.148)s縮短至(24.000±1.424)s，提示模型鼠出現(xiàn)軀體運(yùn)動(dòng)功能障礙(n=6，P<0.01)；進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)6-OHDA模型大鼠糞便的含水量從(0.119±0.005)%到(0.062±0.006)%(n=4，P=0.000)顯著降低(圖1D)，PD伴便秘模型成功。

2.2 6-OHDA大鼠結(jié)腸黏膜通透性與炎性反應(yīng)因子的改變

為觀察6-OHDA模型大鼠結(jié)腸黏膜的屏障功能，本研究檢測(cè)了黏膜電阻、FITC-葡聚糖的通過量以及炎性反應(yīng)因子表達(dá)量。結(jié)果如圖2A和B所示， 在6-OHDA大鼠結(jié)腸黏膜，F(xiàn)ITC-葡聚糖的通過量在60 min時(shí)由(18.86±1.856)μg/L(對(duì)照組)升高至(37.000±4.457)μg/L，明顯增加(n=4，P<0.01)，表明6-OHDA大鼠結(jié)腸黏膜的通透性增加，此外，膜電阻值從(73.750±4.024)Ω/cm2(對(duì)照組)降到(53.400±6.282)Ω/cm2(n=7，P<0.05)，間接反映了黏膜通透性增加，提示黏膜屏障功能出現(xiàn)異常。雖然兩組大鼠結(jié)腸黏膜中炎性反應(yīng)因子IL-6[對(duì)照組(156.3±9.416)ng/g，模型組(203.2±19.34)ng/g]與IL-1β的含量[對(duì)照組(210.1±23.92)ng/g；模型組(186.5±24.41) ng/g]差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖2C，n=5，P>0.05)，但TNF-α的含量明顯升高[對(duì)照組(269.1±18.00)ng/g；模型組(340.4±21.52)ng/g](圖2C，n=5，P<0.05)，6-OHDA大鼠結(jié)腸出現(xiàn)輕度炎性反應(yīng)。

圖1 6-OHDA大鼠模型鑒定Fig.1 Identification of the 6-OHDA rats model

A: distribution of tyrosine hydroxylase (TH) in substantia nigra in control and 6-OHDA rats (TH is the synthetic rate-limiting enzyme of DA);B: expression of TH protein in substantia nigra in control and 6-OHDA rats，n=7，*P<0.05vscontrol;C: Rotarod test between 6-OHDA and control rats，n=6，**P<0.01vscontrol;D: fecal water content between 6-OHDA and control rats，n=4，***P=0.000vscontrol;6-OHDA:6-hydroxydopamine；DA：dopamine.

圖2 6-OHDA大鼠結(jié)腸黏膜電阻、FITC-葡聚糖透過量及炎性反應(yīng)因子的改變Fig.2 Changes of mucosaltransepithelial resistance， FITC-dextran concentration of through mucosa， and mucosal inflammatory factors in colon of 6-OHDA rats

A: transepithelial resistance of colonic mucosa incontrol and 6-OHDA rats，n=7，*P<0.05vscontrol;B: colonic mucosa FITC-dextran permeability in control and 6-OHDA rats，n=4，**P<0.01vscontrol;C: content of inflammatory factors of colonic mucosa in control and 6-OHDA rats，n=5，*P<0.05vscontrol;6-OHDA:6-hydroxydopamine;TNF-α:tumor necrosis factor-α;IL:interleukin.

2.3 6-OHDA大鼠結(jié)腸黏膜層內(nèi)DA和5-HT含量及其受體的表達(dá)

對(duì)照組與6-OHDA組大鼠結(jié)腸黏膜組織中DA含量分別為(44.240±2.371)ng/g和(42.610±4.521)ng/g，兩者間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(n=6，P>0.05)。同樣，5-HT的含量(662.7±49.59)ng/g與對(duì)照組(625.4±77.83)ng/g，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(n=6，P>0.05)。詳見圖3。

Real-time PCR結(jié)果顯示多巴胺受體D1、D2和D5與5-羥色胺受體5-HT3和5-HT4mRNA在結(jié)腸黏膜廣泛分布。進(jìn)一步釆用Western blotting法檢測(cè)了這些受體在模型大鼠結(jié)腸黏膜中的蛋白表達(dá)変化。模型大鼠結(jié)腸黏膜中的D1和D5明顯降低(D1：對(duì)照組：0.728±0.132，模型組：0.272±0.067，n=7，P<0.01；D5：對(duì)照組：0.721±0.036，模型組：0.543±0.051，n=6，P<0.05)。5-HT3雖有升高趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(對(duì)照組：0.078±0.016，模型組：0.103±0.034，n=4，P>0.05)。D2(對(duì)照組：0.699±0.064，模型組：0.547±0.078，n=7，P>0.05)和5-HT4(對(duì)照組：0.038±0.007，模型組：0.047±0.010，n=7，P>0.05)，兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，詳見圖4。

圖3 6-OHDA大鼠結(jié)腸黏膜層內(nèi)DA和5-HT的含量測(cè)定Fig.3 Content of DA and 5-HT in the colonic mucosa of control and 6-OHDA rats

6-OHDA：6-hydroxydopamine；DA：dopamine；5-HT：serotonin.

圖4 DA和5-HT受體在大鼠結(jié)腸黏膜層中的mRNA和蛋白表達(dá)Fig.4 mRNA and protein expression of DA and 5-HT receptors in colonic mucosa of rats

A: mRNA expression of DA receptors in colonic mucosa of normal rats,n=4;B: Western blotting results of DA receptors；C: statistical chart of DA receptors in colonic mucosa of control and 6-OHDA rats,D1:n=7,D2:n=7,D5:n=6,*P<0.05vscontrol，**P<0.01vscontrol;D: mRNA expression of 5-HT receptors in colonic mucosa of normal rats,n=4;E:Western blotting results of 5-HT receptors；F: statistical chart of 5-HT receptors in colonic mucosa of control and 6-OHDA rats,5-HT3:n=4,5-HT4:n=7；DA: dopamine;5-HT: serotonin；6-OHDA: 6-hydroxydopamine.

3 討論

本研究模擬臨床PD患者制作6-OHDA大鼠模型，觀察到模型大鼠出現(xiàn)便秘，且黏膜電阻降低，F(xiàn)ITC-葡聚糖通過量增加，以及黏膜炎性反應(yīng)因子TNF-α含量升高，提示結(jié)腸黏膜通透性增加并出現(xiàn)輕度炎性反應(yīng)。進(jìn)一步還發(fā)現(xiàn)，6-OHDA大鼠結(jié)腸黏膜層內(nèi)DA的含量和D2不變，但D1和D5兩種DA受體的蛋白表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組。5-HT3的表達(dá)有升高趨勢(shì)，而5-HT的含量和5-HT4無變化，人體90%的5-HT來源于消化道組織，對(duì)胃腸功能調(diào)節(jié)發(fā)揮非常重要的作用。除對(duì)動(dòng)力調(diào)節(jié)外，5-HT通過激活上皮細(xì)胞的5-HT4受體刺激結(jié)腸分泌，而黏膜下神經(jīng)叢中的5-HT3，則通過刺激生長(zhǎng)抑素的釋放，間接地抑制結(jié)腸黏膜的離子轉(zhuǎn)運(yùn)。本研究發(fā)現(xiàn)PD鼠5-HT3表達(dá)有升高趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能對(duì)黏膜分泌有一定的影響，與模型鼠糞便含水量降低有一定關(guān)系。但仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明。

有研究[14]顯示，在潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)和克羅恩(Crohn disease，CD)患者發(fā)炎的結(jié)腸黏膜層中，DA的含量明顯減少；在三硝基苯磺酸(2，4，6-trinitrobenzene sulfonic acid，TNBS)誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型中，結(jié)腸組織的DA濃度也顯著降低。這提示DA可能參與結(jié)腸炎性反應(yīng)。并且，DA可以通過D1受體抑制炎性反應(yīng)小體NLRP3的激活和全身系統(tǒng)性的炎性反應(yīng)，通過D2受體抑制急性胰腺炎，提示DA可能通過D1或者D2受體發(fā)揮抑炎作用。另有文獻(xiàn)[15-18]顯示PD患者及模型大鼠的結(jié)腸均出現(xiàn)低度炎性反應(yīng)，本研究發(fā)現(xiàn)6-OHDA大鼠結(jié)腸的炎性反應(yīng)因子TNF-α含量升高，結(jié)合結(jié)腸黏膜中DA受體D1和D5表達(dá)減少，筆者推測(cè)，6-OHDA大鼠結(jié)腸黏膜D1和D5的表達(dá)降低可能與其輕度炎性反應(yīng)有關(guān)?？傊?，本研究進(jìn)一步揭示了DA及其受體與結(jié)腸黏膜保護(hù)功能相關(guān)，但其內(nèi)在的機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

綜上所述，DA與5-HT是胃腸組織中重要的單胺類生物活性物質(zhì)，具有調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力與黏膜水電解質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)以及保護(hù)胃腸黏膜等重要生理功能。本研究中6-OHDA大鼠表現(xiàn)有便秘，其結(jié)腸黏膜通透性增加、炎性反應(yīng)因子TNF-α升高，提示其結(jié)腸黏膜存在有炎性反應(yīng)。本研究中雖未檢測(cè)到6-OHDA大鼠結(jié)腸黏膜中DA與5-HT含量、以及5-HT受體表達(dá)的顯著性變化，但多巴胺受體D1和D5的蛋白表達(dá)明顯降低。DA受體下調(diào)是否與PD鼠結(jié)腸炎性反應(yīng)相關(guān)有待進(jìn)一步研究。