阻斷式PRRSV免疫抑制試驗(yàn)

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(浙江省縉云縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，浙江 縉云 321400)

近年來，我國各地對(duì)豬瘟和豬藍(lán)耳病的預(yù)防和撲滅做了大量工作，曾經(jīng)的“高熱發(fā)紅急性致死”的“高熱病”已不復(fù)存在，但以免疫抑制為主要危害的PRRSV隱性持續(xù)性感染卻依然嚴(yán)重。表面“平靜”的臨床現(xiàn)象，往往容易混淆人們的視線，從而忽視了豬藍(lán)耳免疫的重要性。豬瘟是國家強(qiáng)制免疫的傳染病，眾所周知，豬瘟的免疫效果與PRRSV的自然感染及它的免疫效果密切相關(guān)。為能比較深入地揭示PRRSV對(duì)豬瘟免疫抑制危害的嚴(yán)重性及藍(lán)耳防疫的重要性，故特做本試驗(yàn)。

1 材料和方法

1.1材料

1.1.1免疫疫苗 豬藍(lán)耳疫苗：杭州佑本批號(hào)：20170605；豬瘟疫苗：杭州佑本批號(hào)：20170527。

1.1.2實(shí)驗(yàn)用豬 隨機(jī)選取縉云某豬場30日齡仔豬40頭(體態(tài)正常，無可見臨床癥狀)。

1.1.3豬瘟診斷試劑 豬瘟間接血凝抗體檢測試劑盒，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)蘭州獸醫(yī)研究所批號(hào)：20180615202。

1.1.4抗PRRSV-IG和瓊擴(kuò)抗原的制備 用豬藍(lán)耳弱毒活疫苗(NVDC-JXA1株)首免100日齡育成豬，肌注2頭份。免后2周再以豬藍(lán)耳滅活疫苗(NVDC-JXA1株)加強(qiáng)免疫2次，間隔21 d，第1次劑量2 mL/頭，第2次劑量4 mL/頭，末次免疫后21 d ，經(jīng)采血分離血清-鹽析沉淀-脫鹽濃縮而成。將提取的蛋白溶液稀釋后用UV-170紫外分光光度計(jì)測定，記錄λ=280 nm和λ=260 nm的光密度，按Lowry-Kalokar公式計(jì)算蛋白濃度，蛋白濃度(mg/mL)=1.45×1.116-0.74×1.041得0.84786乘以稀釋倍數(shù)134為113.6 mg/mL。

1.1.5山羊免疫球蛋白的制備 以豬抗PRRSV-IG免疫健山羊，采血分離血清-鹽析沉淀-脫鹽濃縮而成。用瓊擴(kuò)法檢驗(yàn)：中間孔為豬抗PRRSV-IG抗原，周邊孔為倍比稀釋的山羊免疫球蛋白，結(jié)果見圖1所示。

圖1 山羊抗豬PRRSV球蛋白瓊擴(kuò)圖

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1試驗(yàn)設(shè)計(jì) 分A、B、C、D 4個(gè)試驗(yàn)組，每組10頭，A組為藍(lán)耳疫苗+山羊免疫球蛋白1次，B組為組為藍(lán)耳疫苗+山羊免疫球蛋白2次，C組僅免豬瘟疫苗，D組為只用藍(lán)耳苗。

1.2.2免疫方法 A、B兩組30日齡首免藍(lán)耳和山羊免疫球蛋白，D組只免藍(lán)耳疫苗，劑量為2 mL/頭。首免后2 d，四組各免疫豬瘟苗2 mL/頭。首免后21 d，B組和D組與首次相同劑量加強(qiáng)免疫1次。二次免疫3周后，經(jīng)腔靜脈采血分離血清，用正向間接血凝法檢測豬瘟免疫抗體。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1山羊免疫球蛋白對(duì)藍(lán)耳疫苗免疫抑制影響

試驗(yàn)A組使用一次免疫抑制劑后，豬瘟免疫效價(jià)下降為3，B組使用免疫抑制劑二次后即可下降至2以下(見表1)。

表1 山羊免疫球蛋白對(duì)藍(lán)耳疫苗免疫抑制的豬瘟抗體效價(jià)

2.2免疫藍(lán)耳疫苗對(duì)豬瘟抗體效價(jià)的影響

未經(jīng)藍(lán)耳免疫的C組，因受PRRSV的免疫抑制作用其平均豬瘟效價(jià)為1.8，經(jīng)藍(lán)耳疫苗免疫的D組因PRRSV受到了控制，其平均豬瘟效價(jià)達(dá)到8(見表2)。

表2 藍(lán)耳免疫對(duì)豬瘟抗體效價(jià)的影響

以PRRSV自然感染豬的豬瘟免疫抗體水平為參照，以山羊免疫球蛋白為豬藍(lán)耳疫苗的免疫抑制劑，能有效地阻斷豬藍(lán)耳疫苗的防疫作用，從而明晰出PRRSV對(duì)豬瘟疫苗的免疫抑制作用，進(jìn)一步揭示了豬PRRSV對(duì)豬瘟免疫抑制危害的嚴(yán)重性(圖2)。

圖2 各處理組別豬瘟抗體效價(jià)

3 小結(jié)與討論

3.1山羊球蛋白為免疫抑制劑能有效地阻斷豬藍(lán)耳疫苗的防疫作用，使B組的豬瘟抗體水平與C組的水平相當(dāng)，從而進(jìn)一步證實(shí)PRRSV對(duì)豬瘟免疫抑制的重要作用及嚴(yán)重性。

3.2試驗(yàn)提示：PRRSV是影響豬瘟免疫的一個(gè)重要因素，豬瘟的免疫抗體水平高低與豬藍(lán)耳的防疫與否存在密切相關(guān)性，因此做好藍(lán)耳的免疫是預(yù)防豬瘟的重要手段之一。

3.3在PRRSV隱性感染被徹底清除之前，評(píng)判豬瘟免疫抗體效價(jià)一定要與藍(lán)耳病毒的感染程度結(jié)合起來，這對(duì)于指導(dǎo)豬瘟的防疫實(shí)踐十分重要。