呋塞米鼻腔噴霧劑局部給藥的大鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

杜建紅，何德云，鐘元高

呋塞米鼻腔噴霧劑是筆者單位申請課題“呋塞米鼻腔噴霧劑用于戰(zhàn)時(shí)高原反應(yīng)急救的研究”研究配制的實(shí)驗(yàn)制劑，主要由呋塞米、苯扎氯銨、苯乙醇等成分配制而成。具有利尿作用，臨床主要用于高原環(huán)境引起的急性肺水腫或腦水腫等水腫性疾病。為了解該藥經(jīng)鼻噴霧給藥對局部及全身產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和反應(yīng)的恢復(fù)情況，本研究對該藥鼻腔用藥的局部及全身毒性反應(yīng)情況進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，為臨床研究提供資料。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 健康SD大鼠220～300 g[成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供，動物合格證號：SCXK（川）2016-25]，分籠飼養(yǎng)于空調(diào)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，室溫（24±2）℃，相對濕度40%～60%，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w備用。1.2 儀器與試藥

1.2.1 儀器 轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)[德國徠卡（Leica）儀器有限公司，型號2015]，全自動封閉式組織脫水機(jī)（常州市中威電子儀器有限公司，型號TSJ-Ⅱ），病理組織漂烘儀（常州市中威醫(yī)療儀器有限公司，型號PHY-Ⅲ型），數(shù)碼三目攝像顯微攝像系統(tǒng)（麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司，型號BA200Digital）。

1.2.2 試藥 呋塞米鼻腔噴霧劑（0.5%W/W，批號20160301，20160315，20160327， 委托成都軍區(qū)總醫(yī)院按研究組方配制，僅用于課題研究），多聚甲醛、氫氧化鈉、PBS 磷酸鹽緩沖液（pH 7.2～7.4）、無水乙醇、二甲苯、中性樹膠、蘇木素、伊紅等均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法[1-7]實(shí)驗(yàn)前，挑選鼻部皮膚無出血及破損的動物備用，仔細(xì)觀察并篩選鼻黏膜完整無損傷、出血、水腫及潰爛等病變的大鼠共12只，雌雄各6只，按性別體重隨機(jī)分為空白組與給藥組，每組6只。于實(shí)驗(yàn)室分籠飼養(yǎng)觀察3 d，無異常反應(yīng)后用于實(shí)驗(yàn)。

固定大鼠頭部，用移液器將呋塞米鼻腔噴霧劑分別緩慢滴入給藥組大鼠雙側(cè)鼻孔內(nèi)，每孔25 μl，以保證受試樣品和鼻腔鼻黏膜充分接觸，防止受試樣品流出鼻孔外，30 min后肉眼觀察鼻黏膜局部損傷情況；第4 h及第8 h后重復(fù)上述操作，作為給藥組?？瞻捉M滴入呋塞米鼻腔噴霧劑賦形劑，其余操作同給藥組。 分別觀察每只大鼠給藥后 1、2、3、4、8、24 h 及第 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13 及 14 d的局部和全身毒性反應(yīng)情況，主要包括黏膜有無充血、水腫、潰瘍、行為活動、飲食、排便和口、眼、鼻有無分泌物等情況，并做好詳細(xì)記錄。第14 d實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，脫頸椎處死大鼠，肉眼觀察大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胰腺、胃、脾、前列腺、睪丸、卵巢、子宮等主要臟器有無明顯病理改變，做好詳細(xì)記錄；解剖取出鼻中隔（含兩側(cè)鼻腔黏膜），10%中性甲醛固定，蘇木精-伊紅染色法染色，光鏡下觀察并拍照。

2 結(jié)果

2.1 一般觀察 給藥組動物給予試藥后，鼻腔局部無充血、水腫及潰爛等特殊反應(yīng)，大鼠均未出現(xiàn)異常變化，一般活動正常，行為活潑，毛發(fā)光亮，飲食、排便無異常，口、眼、鼻無異常分泌物，黏膜無充血，無動物死亡，與空白組比較無顯著性差異（P＞0.05）。

2.2 組織病理學(xué)檢查 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，脫頸椎處死各組大鼠，解剖肉眼觀察各組織器官均未見明顯病理學(xué)改變。鼻中隔黏膜病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示，兩組無顯著性差異（圖1）。

3 討論

本研究通過鼻腔給藥方式，給予大鼠呋塞米鼻腔噴霧劑和呋塞米鼻腔噴霧劑賦形劑，觀察大鼠局部給藥后局部和全身急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果顯示，給藥組給藥后1～14 d，大鼠鼻腔局部均無異常反應(yīng)和表現(xiàn)，與空白組比較無顯著性差異（P＞0.05），初步證明，呋塞米鼻腔噴霧劑對實(shí)驗(yàn)大鼠用藥局部及全身均無明顯急性毒性反應(yīng)，具有良好的用藥安全性。

圖1 各組鼻中隔黏膜病理組織學(xué)檢查結(jié)果